控制次要过敏原以便提高免疫疗法的安全性制造技术

本发明专利技术披露了用于相对主要和次要过敏原的含量标准化过敏原提取物的方法。该方法包括测定特定提取物中过敏原的相对含量，然后调整主要和次要过敏原的含量，以便满足预定极限。还披露了抗过敏试剂盒，它包括用于剖析过敏对象的装置和按照本发明专利技术制备的提取物或系列提取物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】控制次要过敏原以便提高免疫疗法的安全性的制作方法控制次要过敏原以便提高免疫疗法的安全性 专利
本专利技术涉及免疫学和变态反应学领域。具体地讲，本专利技术涉及通 过新的生产方法改善过敏原疫苗的安全性，该方法取决于定量和调节 免疫原性组合物中主要和次要过敏原的含量，以便所述组合物适用于 剖析过敏性患者对它过敏的过敏原。专利技术背景过敏反应，即I型超敏性影响着全球数百万人，并且它的发病率 在过去若干年中在发达国家有所提高，导致逐渐增加的人力和经济损 耗(l)。过敏反应的重要临床表现包括哮喘、干草热、湿渗和肠胃失 调。尽管过敏反应一般不被认为是威胁生命的疾病，但津喘每年会导 致大量的死亡。过敏反应是由对外源的，通常是非致病性的物质的不适当的免疫 反应造成的。所述过敏反应在特定群体对某些过敏原过敏的意义上是 特异性的，而所述个体不一定对已知能造成过敏性疾病的其他物质产 生过敏反应。过敏性表型以目标器官的明显的粘膜发炎和在循环系统中和在肥大细胞和嗜碱性粒细胞(嗜碱细胞)表面上存在IgE类 型的过敏原特异性抗体为特征。IgE-介导的过敏性疾病是由一般被称为过敏原的蛋白、糖蛋白、 脂蛋白和多糖引起的。对过敏原的接触可以通过吸入，接触，摄入或 注射实现。最重要的过敏原来源出现在环境空气中具有特定大小的最 常见的颗粒物。所述来源显然是普遍的，并且包括青草花粉和屋尘螨 粪便颗粒，它们造成了所有过敏反应的大约50%。在全球范围内重要 的还有动物毛屑，即猫和狗毛屑、其他花粉，如艾属植物花粉，和微 型真菌，如链格孢属。在区域基础上，还有其他花粉起支配作用，如 北欧和中欧的赤杨花粉，南欧的橄榄树和墙草属植物，美国东部和中 部的豚草属，和日本的柳杉花粉。昆虫和它们的产物，例如蜜蜂和胡蜂毒液，以及食物各自造成所有过敏反应的大约2%。过敏性疾病控制包括诊断和治疗，包括预防治疗。过敏反应的诊 断涉及验证过敏原特异性IgE和确定过敏原来源。在很多情况下，认 真的既往病历就足以诊断过敏反应，并且确定入侵的过敏原来源材料。 不过，最常见的是，诊断是通过客观测定进行的，如皮肤穿刺试验， 验血，或诱发试验。对过敏性疾病的现有治疗方法主要包括症状緩解。用药物，如抗 组胺和类固醇治疗患者，这些药物不会抑制IgE抗体的形成，并且通 常具有副作用。正如在WHO专题报告(2)中所指出的，免疫疗法是能 够影响过敏性疾病的自然进程的唯一治疗方法，并且还能阻止过敏性 鼻炎患者发展成哮喘(2)。在施用剂量逐渐增加的合适的过敏原提取 物时，免疫疗法可以调节患者的免疫反应。治疗上使用的过敏原提取物是从天然来源中分离的蛋白和非蛋 白成分的粗制混合物。随着IgE分子在1966年被发现(3， 4)，在七 十年代和八十年代引入了科学方法，以便对过敏原提取物进行标准化 (5)。所述方法基于新生产批次与参考提取物的比较，它的效能业已 通过在特定患者体内进行皮试预先进行了测定。用于体外评估相对致 敏效能的最常用的方法是RAST抑制或相关方法(6)。所述方法中的 重要试剂是来自 一組过敏性患者的血清混合物，效能的测定是通过比 较测试提取物对来自所述血清混合物的特异性IgE的结合的抑制作用i敏原提取物的效能是来自对过:原提取物中任何分子2的任何表位 专一的任意一种IgE分子的过敏原活性的总和。因此，所述效能测量总是取决于所选择的血清混合物或患者组，并且取决于所述参考提取 物。另外，所述方法没有提供有关所述提取物的定量组成的任何信息， 即，每一种过敏原的相对浓度。近几年来，随着杂交瘤和单克隆抗体 技术的出现，通过单克隆抗体-型免疫测定方法测定主要过敏原含量，使过敏原提取物的标准化取得了显著进展。对某些物种来说，仅使用一种主要过敏原，如家猫(Fe/化/ne^2'ci^) (7)或长叶车前 (/Va力^ 7a/ ceo/a) ( 8 )就可以观察到主要过敏原的浓度和提 取物的效能之间的良好的相关性，并且，尽管上述技术不仅能够确定 特定效能的过敏原浓度，而且还能够确定某些物种的两种主要过敏原 之间的最佳比例，如来自表皮螨属(er迈a /^ago/ffes)的螨虫(9 )。 上述重大进展是大量知识的增加和主要过敏原剂量目前被认为是预告 免疫疗法效果的关键因素(10)。然而，在用过敏原提取物对过敏性患者进行免疫疗法治疗时，预 料不到的副作用仍然造成了重大问题。因此，尽管特异性过敏反应免疫接种具有优点，但是没有被广泛 使用，这主要是因为存在过敏性副作用的危险。传统的特异性过敏反 应免疫接种是通过长时间内进行的多次皮下免疫完成的。在每次注射 之后，患者必须保持接受30分钟的医疗监护，因为存在过敏反应副作 用的危险，这种反应尽管极少却是威胁生命的。另外，应当装备门诊 室，以便支持应急处理。亳无疑问的，提高所述过敏反应疫苗的安全 性，有利于更广泛的使用，因为它解决了主要的健康和经济问题，同 时，改善了过敏性患者的生活质量。因此，需要提供具有改善了的安全性的过敏原提取物。专利技术概述术语主要过敏原是基于对特定过敏原提取物过敏的一般性患 者群体对特定过敏原过敏的普遍性的统计学估计。因此，只有那些在>50%的患者中引起过敏的过敏原被称为主要过敏原(11)。然而， 本专利技术人业已发现非常重要的临床学相关因素，即针对特定过敏原， 主要或次要过敏原的IgE抗体的数量和亲和力，它是独立患者可能产 生的，在现有的标准化方法中没有考虑到。最近，本专利技术人的研究小组业已发现了卫生保健工作者的乳胶免 疫疗法的最大耐受剂量和针对Hevb6. 01 (prohevein)的特异性IgE的血清浓度之间的显著的负相关性(r=-0. ， p= 0.012， cf. Sastre J W a人，2006, Allergy 61: 206-210 )。极有可能的是，这一结 果可以延伸到其他过敏原，因此针对特定过敏原的高的IgE水平可能意味着在免疫疗法方案中对所述特定过敏原的较低的耐受剂量。现有 的基于血清混合物的IgE-免疫测定或主要过敏原免疫测定的标准化方法能够以合理的方式控制主要过敏原的水平，并因此控制针对它们 的安全剂量。不过，对于低普遍性过敏原来说存在某种不确定性，主 要是如果满足两个条件在过敏患者体内针对过敏原的高特异性IgE 水平，和在可利用的原材料中过敏原含量的重要的可变性。目前，对 特定过敏原提取物过敏的所有患者都连续接受含有所述提取物的所有 成分的相同的复杂混合物，只能对更普遍的过敏原的浓度进行定量控 制，而忽视了统计学上的次要过敏原浓度，尽管这些过敏原可能对某 些患者具有潜在危害，这些患者最终会产生针对所述特定过敏原的高 特异性IgE水平。目前市场上出售的质量最高的过敏原提取物仅仅进 行过定性技术处理以^更控制它的质量，如SDS-PAGE/Western印迹或免 疫电泳，以《更检测次要过敏原的存在。根据本专利技术，对次要过敏原浓度的定量控制的缺乏，可能是在进 行免疫疗法治疗时出现的 一 定比例副作用的起因，过敏性反应是与所 述治疗相关的主要危险。例如，本专利技术人业已发现了周期性的有害反 应群，显然与确定的过敏原提取物批次相关。不过，在进行深入分析 时，不能确定通过用于质量控制的业已建立的方法分析的提取物的质 量的相关性，这本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于制备过敏原物质的标准化提取物的方法，包括　　　　－从所述过敏原物质获得含过敏原的提取物，　　　　－测定所述含过敏原的提取物中主要和次要过敏原的相对浓度，其中，所述主要和次要过敏原是按照从对所述过敏原物质过敏的群体获得的过敏原敏化曲线确定的，　　　　－调节所述主要和次要过敏原的浓度，来获得所述标准化提取物，以便１）从所述标准化提取物中分离的单一剂型包括主要过敏原的总量不超过所述过敏原物质的任意单一种主要过敏原的最大可接受量和／或标准化过敏原提取物中的主要和次要过敏原的浓度是定量控制的，和２）从所述标准化提取物中分离的单一剂型包括免疫有效量的所述主要和任选性地次要过敏原的每一种。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】DK 2005-2-3 PA 2005 00177;US 2005-2-3 60/649,0901.用于制备过敏原物质的标准化提取物的方法，包括-从所述过敏原物质获得含过敏原的提取物，-测定所述含过敏原的提取物中主要和次要过敏原的相对浓度，其中，所述主要和次要过敏原是按照从对所述过敏原物质过敏的群体获得的过敏原敏化曲线确定的，-调节所述主要和次要过敏原的浓度，来获得所述标准化提取物，以便1)从所述标准化提取物中分离的单一剂型包括主要过敏原的总量不超过所述过敏原物质的任意单一种主要过敏原的最大可接受量和/或标准化过敏原提取物中的主要和次要过敏原的浓度是定量控制的，和2)从所述标准化提取物中分离的单一剂型包括免疫有效量的所述主要和任选性地次要过敏原的每一种。2. 用于制备一组包括过敏原物质的至少2种彼此不同的标准化 提取物的方法，所述标准化提取物各自适用于对所述过敏原物质过敏 的不同的过敏群体的免疫，所述方法包括-从所述过敏原物质获得含过敏原的提取物，-测定所述含过敏原的提取物中过敏原的相对浓度，-根据上述测定，制备用于对所述过敏原物质过敏的至少两个不同群体的每一个的所述组的成员，所述至少两个不同群体的每一个限定了不同的主要过敏原，其中，对每一个成员的所述过敏原的浓度进行调整，以便1)从一个成员中分离的单一剂型包括的主要过敏原的总量不超过所述过敏原物质的任意单一种主要过敏原的最大可接受量和/或标准化过敏原提取物中的主要和次要过敏原的浓度是定量控制的，和2)从所述成员中获得的单一剂型包括免疫有效量的所述主要和任选性地次要过敏原的每一种。3. 用于由过敏原物质制备标准化过敏原提取物的方法，该方法 包括获得源自所述过敏原物质的过敏原提取物，测定每一种提取物中 主要和次要过敏原的浓度，如果必要，调节所述提取物的主要和次要 过敏原的相对数量，以便获得标准化过敏原提取物，其中，主要和次 要过敏原的相对数量处在预定范围内，以便可以从所述标准化过敏原 提取物中分离单一剂型，其中1)所述主要过敏原的总量不超过来自 所述过敏原物质的任意单一种主要过敏原的最大可接受量和/或主要和次要过敏原的浓度是定量控制的，和2)主要和任选性地次要过敏 原是以免疫有效量存在的。4. 如上述权利要求中任意一项的方法，其中，制备.了多种提取 物，并且，其中，所述多种提取物的任意一种中主要过敏原和次要过 敏原浓度与所述多种提取物的任何其他一种相比具有最多50%的波 动。5. 如权利要求4的方法，其中，所述波动最多40%,如最多30%、 25%、 15°/。、 5%、 2%和最多1%。6. 如上述权利要求中任意一项的方法，其中，制备了多种提取 物，并且，其中，所述多种提取物的任意一种中任意单一种主要过敏 原和/或任意一种次要过敏原的浓度不超过所述多种提取物的其他任 意一种中的浓度6倍以上。7. 如权利要求6的方法，其中，所述倍数不超过5，如4、 3和2。8. 在对过敏原物质过敏的对象体内诱导耐受性的方法，该方法 包括重复施用从标准化过敏原提取物中分离的单一剂型，所述标准化 过敏源提取物包括来自所述过敏原物质的过敏原，其中，所述单一剂 型中单个过舉原的相对数量随时间推移保持大体上稳定。9. 如权利^求8的方法，其中，所述单一剂型来自业已与对象物，以便1)构成所述对象体内过敏原或构成过敏群体中的主要过敏 原的过敏原总量不超过所述过敏原物质的任意单一种主要过敏原的最 大可接受量和/或标准化过敏原提取物中的主要和次要过敏原的浓度 是定量控制的，和2)所述过敏原提取物的单一剂型包括免疫有效量 的每一种所述过敏原。10. 在对过敏原物质过敏的对象体内诱导耐受性的方法，该方择标准化ii敏原提取;或过敏原组合物，它与所述对i过敏的i敏原 匹配或与在过敏群体中起反应的主要过敏原匹配，随后重复施用从标 准化过敏原提取物或过敏原组合物中分离的单一剂型，以便诱导对所 述过敏原物质的耐受性，其中，所述标准化过敏原提取物和过敏原组 合物是这样的，其中1)它的单一剂型所包含的在所述群体中发现的 主要过敏原的总量不超过所述过敏原物质的任意单一种主要过敏原的 最大可接受量和/或标准化过敏原提取物和过敏原组合物中的主要和 次要过敏原的浓度是定量控制的，和2)它的单一剂型包括免疫有效 量的所述主要和任选性地次要过敏原的每一种。11. 如权利要求8-10中任意一项的方法，其中，所述标准化过敏 原提取物是一组至少2种不同的过敏原提取物的一部分，其中，每一 种不同的提取物与主要过敏原在所述群体内起反应的群体匹配。12. 如权利要求8-11中任意一项的方法，其中，所述过敏原提取 物的单 一剂量随时间推移而加大，直到达到维持剂量。13. 如权利要求8-12中任意一项的方法，其中，所述单一剂型选 自下列一组注射剂型，固体剂型，如压缩或非压缩型片剂，胶嚢和 锭剂。14. 如权利要求8-13中任意一项的方法，其中，所述单一剂型是 通过选自下列一组的途径施用的肠胃外途径、如皮下途径、皮内途 径和肌内途径；口腔粘膜途径，如口服、含月良、舌下和胃肠途径。15. 如上述权利要求中任意一项的方法，其中，将所述标准化过 敏原提取物中的主要和次要过敏原的浓度定量控制在预定范围内。16. 如权利要求15的方法，其中，所述标准化提取物中每一种次 要过敏原的浓度低于指定提取物中最低浓度的主要过敏原的浓度。17. 如权利要求15或16的方法，其中，单一剂型中任何次要过 敏原和最丰富的主要过敏原之间的重量比不超过1: 50。18. 如权利要求17的方法，其中，任何次要过敏原和最丰富的主 要过敏原之间的重量比不超过1: 100。19. 如权利要求17的方法，其中，任何次要过敏原和最丰富的主 要过敏原之间的重量比不超过1: 200。20. 如上述权利要求中任意一项的方法，其中，单一剂型中最丰 富的主要过敏原和任何其他主要过敏原之间的重量比不超过30: 1。21. 如权利要求20的方法，其中，最丰富的主要过敏原和任何其 他主要过敏原之间的重量比不超过15: 1。22. 如权利要求20的方法，其中，最丰富的主要过敏原和任何其 他主要过敏原之间的重量比不超过10: 1。23. 如权利要求20的方法，其中，最丰富的主要过敏原和任何其 他主要过敏原之间的重量比不超过5: 1。24. 如权利要求20的方法，其中，最丰富的主要过敏原和任何其 他主要过敏原之间的重量比不超过2. 5: 1。25. 如上述权利要求中任意一项的方法，其中，所述标准化过敏 原提取物包括来自所述过敏原物质的所有主要过敏原。26. 用于制备过敏原物质的标准化提取物的方法，包括 -从所述过敏原物质获得含过敏原的提取物，-测定所述含过敏原的提取物中过敏原的相对浓度，其中，所述过敏 原是通过过敏对象的过敏原敏化曲线限定的，-调节所述过敏原的浓度，以便1)所述提取物的单一剂型包括的过 敏原的总量不超过所述过敏原物质的任意一种过敏原的最大可接受量 和/或标准化过敏原提取物中的所有过敏原的浓度是...

【专利技术属性】
技术研发人员：DB埃尔南德斯，FP科拉莱斯，ML维加，
申请(专利权)人：阿尔克阿贝洛有限公司，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]