制备过继性细胞疗法的改善方法技术

本发明专利技术提供组合物以及用于制备过继性细胞疗法的方法。在具体实施方案中，本发明专利技术提供得到细胞群，分离并活化PBMC，扩增T细胞，以及向有此需要的对象施用T细胞治疗剂的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请基于35U.S.C.§119(e)要求于2014年4月25日提交的美国临时申请第61/984,558号的权益，将其通过引用整体并入本文。关于序列表的声明与本申请相关的序列表以文本格式提供，代替纸质本，并且在此通过引用并入说明书。含有序列表的文本文件的名称是BLBD_028_01WO_ST25.txt。文本文件为3KB，创建于2015年4月24日，并且经EFS-Web以电子方式与说明书文件同时提交。背景
本专利技术涉及用于制备免疫效应细胞的改善平台和相关方法。更具体而言，本专利技术涉及用于制备包含T细胞的治疗性免疫效应细胞组合物的可扩展、灵活、可靠且可复制的方法。相关领域的描述过继免疫疗法或过继性细胞疗法(ACT)是将基因修饰的T淋巴细胞转移至对象，用于疾病的疗法。过继免疫疗法尚未发挥其治疗多种疾病的潜能，所述疾病包括癌症、感染性疾病、自身免疫病、炎症性疾病和免疫缺陷。然而，大多数(即使不是全部)的过继免疫疗法策略需要T细胞的活化和扩增步骤以产生临床有效的治疗剂量的T细胞。由于活细胞培养的固有复杂性以及患者之间的可变性，用于产生治疗剂量的T细胞(包括工程化的本文档来自技高网...

【技术保护点】
制备T细胞治疗剂的方法，其包括：a)获得包含T细胞和抗原递呈细胞(APC)的细胞群；b)将所述细胞群在细胞培养基中培养，所述细胞培养基包含：i)一种或多种细胞因子，ii)抗CD3抗体或其CD3结合片段，以及iii)抗CD28抗体或其CD28结合片段、B7‑1或其CD28结合片段、或者B7‑2或其CD28结合片段，其中所述培养活化并刺激所述T细胞；c)用病毒载体转导活化的细胞群；以及d)将所述细胞群在细胞生长培养基中培养以扩增转导的T细胞；从而制备所述T细胞治疗剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.25 US 61/984,5581.制备T细胞治疗剂的方法，其包括：a)获得包含T细胞和抗原递呈细胞(APC)的细胞群；b)将所述细胞群在细胞培养基中培养，所述细胞培养基包含：i)一种或多种细胞因子，ii)抗CD3抗体或其CD3结合片段，以及iii)抗CD28抗体或其CD28结合片段、B7-1或其CD28结合片段、或者B7-2或其CD28结合片段，其中所述培养活化并刺激所述T细胞；c)用病毒载体转导活化的细胞群；以及d)将所述细胞群在细胞生长培养基中培养以扩增转导的T细胞；从而制备所述T细胞治疗剂。2.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞群获自外周血、外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织或肿瘤。3.如权利要求1所述的方法，其中所述T细胞获自外周血、外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织、肿瘤或T细胞系。4.如权利要求1所述的方法，其中所述APC获自外周血、外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织或肿瘤。5.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞群包含外周血单核细胞(PBMC)。6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中得到或获得所述细胞群包括白细胞去除术。7.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中分离所述细胞群包括沉降。8.如权利要求7所述的方法，其中所述沉降包括FICOLLTM或PERCOLLTM梯度。9.如权利要求7或权利要求8所述的方法，其中使用半自动直流离心机进行所述沉降。10.如权利要求9所述的方法，其中所述半自动直流离心机为Cobe2991细胞处理器、CellSaver5+或Elutra。11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其还包括在缓冲液或细胞培养基中洗涤所述细胞群。12.如权利要求11所述的方法，其中在含有一种或多种细胞因子的T细胞生长培养基(TCGM)中洗涤所述细胞群。13.如权利要求12所述的方法，其中所述TCGM中的一种或多种细胞因子选自：IL-2、IL7、IL-15、IL-9和IL-21。14.如权利要求13所述的方法，其中所述细胞因子为IL-2。15.如权利要求14所述的方法，其中所述IL-2的浓度为约250IU/mL。16.如权利要求11至15中任一项所述的方法，其中分离的细胞群包含PBMC。17.如权利要求16所述的方法，其中将所述细胞群在速率可控的冷冻仪中低温保藏。18.如权利要求17所述的方法，其中将低温保藏的细胞群解冻。19.如权利要求1或权利要求18所述的方法，其中以约1×106个细胞/mL的密度将所述细胞群接种于TCGM中，以在步骤(b)中培养。20.如权利要求19所述的方法，其中将所述细胞群在细胞培养袋或生物反应器中培养。21.如权利要求19至20中任一项所述的方法，其中所述TCGM包含选自IL-2、IL7、IL-15、IL-9和IL-21的一种或多种细胞因子。22.如权利要求21所述的方法，其中所述一种或多种细胞因子选自IL-2、IL-7和IL-15。23.如权利要求21所述的方法，其中所述一种或多种细胞因子包括IL-2。24.如权利要求21至23中任一项所述的方法，其中所述一种或多种细胞因子的浓度为约250IU/mL。25.如权利要求1至24中任一项所述的方法，其中将所述细胞群与可溶的抗CD3抗体和可溶的抗CD28抗体一起培养。26.如权利要求24所述的方法，其中所述抗CD3抗体的浓度为约50ng/mL。27.如权利要求25所述的方法，其中所述抗CD28抗体的浓度为约50ng/mL。28.如权利要求1至27中任一项所述的方法，其中在转导之前将步骤b)的细胞群培养约12小时至约48小时。29.如权利要求1至27中任一项所述的方法，其中在活化时转导步骤b)的细胞群。30.如权利要求1至27中任一项所述的方法，其中在转导之前将步骤b)的细胞群培养约1小时至约12小时。31.如权利要求1至27中任一项所述的方法，其中在转导之前将步骤b)的细胞群培养约16小时至约32小时。32.如权利要求1至27中任一项所述的方法，其中在转导之前将步骤b)的细胞群培养至少18小时。33.如权利要求1至27中任一项所述的方法，其中在转导之前将步骤b)的细胞群培养至少24小时。34.如权利要求1至33中任一项所述的方法，其中用逆转录病毒载体转导步骤d)的细胞群。35.如权利要求1至34中任一项所述的方法，其中用慢病毒载体转导步骤d)的细胞群。36.如权利要求19至35中任一项所述的方法，其中将约1×109TU至约2×109TU的病毒载体用于转导1×108个接种细胞。37.如权利要求1至36中任一项所述的方法，其中将所述病毒载体稀释至总培养体积的20％v/v。38.如权利要求1至36中任一项所述的方法，其中将所述病毒载体稀释至总培养体积的约40％至约50％v/v。39...

【专利技术属性】
技术研发人员：理查德·摩根，凯文·弗里德曼，道恩·迈尔，
申请(专利权)人：蓝鸟生物公司，
类型：发明
国别省市：美国;US