BCMA嵌合抗原受体制造技术

本发明专利技术提供了分离并且纯化的编码针对B

【技术实现步骤摘要】
BCMA嵌合抗原受体
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请根据35 U.S.C.
§
119(e)要求2015年8月3日提交的美国临时申请第62/200,505号和2014年12月12日提交的美国临时申请第62/091,419号的权益，所述美国临时申请各自以全文引用的方式并入本文中。
[0003]关于序列表的声明
[0004]与本申请相关的序列表以文本格式代替纸本拷贝提供，并且在此以引用的方式并入本说明书中。含有序列表的文本文件的名称是BLBD_043_02WO_ST25.txt。文本文件是27KB，创建于2015年12月4日，并且以电子方式经由EFS-Web在提交本说明书的同时提交。


[0005]本专利技术涉及改进的用于治疗B细胞相关病况的组合物和方法。更具体来说，本专利技术涉及改进的嵌合抗原受体(CAR)，其包含鼠抗BCMA抗体或其抗原结合片段；经遗传修饰以表达这些CAR的免疫效应细胞；和这些组合物有效治疗B细胞相关病况的用途。

技术介绍

[0006]若干重大疾病涉及B淋巴细胞，即B细胞。异常B细胞生理学还可能会导致患上自身免疫疾病，包括(但不限于)全身性红斑狼疮(SLE)。B细胞恶性转化造成癌症，包括(但不限于)淋巴瘤，例如多发性骨髓瘤和非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkins'lymphoma)。
[0007]绝大多数具有B细胞恶性肿瘤(包括非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)和多发性骨髓瘤(MM))的患者是癌症死亡的重要贡献者。B细胞恶性肿瘤对各种治疗形式的应答混合。治疗B细胞恶性肿瘤的传统方法(包括化学疗法和放射疗法)归因于毒性副作用而具有有限的效用。用抗CD19、抗CD20、抗CD22、抗CD23、抗CD52、抗CD80和抗HLA-DR治疗抗体进行的免疫疗法提供有限的成效，部分是由于不良药物动力学特征曲线、抗体因血清蛋白酶和肾小球过滤所致的快速消除以及靶抗原的有限的向肿瘤位点中的穿透和于癌细胞上的表达水平。尝试使用表达嵌合抗原受体(CAR)的经遗传修饰的细胞也具有有限的成效。另外，CAR中所使用的既定抗原结合结构域的治疗功效是不可预知的：如果抗原结合结构域结合得太强，那么CAR T细胞诱导大规模细胞因子释放，导致视为“细胞因子风暴”的可能致死的免疫反应；并且如果抗原结合结构域结合得太弱，那么CAR T细胞无法在清除癌细胞方面呈现充足治疗功效。

技术实现思路

[0008]本专利技术通常提供改进的用于生成T细胞疗法的载体和其使用方法。
[0009]在各种实施例中，提供了一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含：胞外结构域，所述胞外结构域包含结合人BCMA多肽的一个或多个表位的鼠抗BCMA(B细胞成熟抗原)抗体或其抗原结合片段；跨膜结构域；一个或多个胞内共刺激信号传导结构域；和初级信号传导结构域。
[0010]在特定实施例中，结合所述人BCMA多肽的所述鼠抗BCMA抗体或抗原结合片段选自
由以下组成的群组：骆驼Ig、Ig NAR、Fab片段、Fab'片段、F(ab)'2片段、F(ab)'3片段、Fv、单链Fv抗体(“scFv”)、双-scFv、(scFv)2、微型抗体、双功能抗体、三功能抗体、四功能抗体、二硫键稳定的Fv蛋白(“dsFv”)和单结构域抗体(sdAb，纳米抗体)。
[0011]在另外的实施例中，结合所述人BCMA多肽的所述鼠抗BCMA抗体或抗原结合片段是scFv。
[0012]在一些实施例中，所述鼠抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含一个或多个如SEQ ID NO:1-3中任一项中所阐述的CDR。
[0013]在特定实施例中，所述鼠抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含一个或多个如SEQ ID NO:4-6中任一项中所阐述的CDR。
[0014]在某些实施例中，所述鼠抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:7中所阐述的可变轻链序列。
[0015]在特定实施例中，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:1-3中所阐述的CDR序列。
[0016]在其它实施例中，所述鼠抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:8中所阐述的可变重链序列。
[0017]在另外的实施例中，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:4-6中所阐述的CDR序列。
[0018]在其它实施例中，所述跨膜结构域来自选自由以下组成的群组的多肽：T细胞受体的α、β或δ链、CD3ε、CD3δ、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD 16、CD22、CD27、CD28、CD33、CD37、CD45、CD64、CD80、CD86、CD 134、CD137、CD152、CD 154和PD1。
[0019]在一些实施例中，所述跨膜结构域来自选自由以下组成的群组的多肽：CD8α、CD4、CD45、PD1和CD154。
[0020]在某些实施例中，所述跨膜结构域来自CD8α。
[0021]在特定实施例中，所述一个或多个共刺激信号传导结构域来自选自由以下组成的群组的共刺激分子：CARD11、CD2、CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CD54(ICAM)、CD83、CD134(OX40)、CD137(4-1BB)、CD150(SLAMF1)、CD152(CTLA4)、CD223(LAG3)、CD270(HVEM)、CD273(PD-L2)、CD274(PD-L1)、CD278(ICOS)、DAP10、LAT、NKD2C SLP76、TRIM和ZAP70。
[0022]在特定实施例中，所述一个或多个共刺激信号传导结构域来自选自由以下组成的群组的共刺激分子：CD28、CD134和CD137。
[0023]在另外的实施例中，所述一个或多个共刺激信号传导结构域来自选自由以下组成的群组的共刺激分子：CD28、CD134和CD137。
[0024]在另外的实施例中，所述一个或多个共刺激信号传导结构域来自CD28。
[0025]在特定实施例中，所述一个或多个共刺激信号传导结构域来自CD134。
[0026]在其它实施例中，所述一个或多个共刺激信号传导结构域来自CD137。
[0027]在某些实施例中，CAR包含铰链区多肽。
[0028]在其它实施例中，所述铰链区多肽包含CD8α的铰链区。
[0029]在一些实施例中，CAR包含间隔区。
[0030]在另外的实施例中，所述间隔区多肽包含IgG1或IgG4的CH2和CH3区。
[0031]在特定实施例中，CAR包含信号肽。
[0032]在其它实施例中，所述信号肽包含IgG1重链信号多肽、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体2(GM-CSFR2)信号肽或CD8α信号多肽。
[0033]在一个实施例中，CAR包含如SEQ ID NO:9中所阐述的氨基酸序列。
[0034]在各种实施例中，提供了一种多核苷酸，其编码本文所涵盖的CAR。
[0035]在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.嵌合抗原受体(CAR)，其包含SEQ ID NO：9所示氨基酸序列的氨基酸22-493。2.如权利要求1所述的CAR，其包含SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列。3.如权利要求1或2所述的CAR，其中所述CAR由SEQ ID NO：10所示的多核苷酸序列编码。4.多核苷酸，其编码权利要求1或2所述的CAR。5.载体，其包含编码权利要求1或2所述的CAR的多核苷酸。6.如权利要求5所述的载体，其中所述载体是表达载体、游离型载体、病毒载体、逆转录病毒载体或慢病毒载体。7.如权利要求6所述的载体，其中所述慢病毒载体选自基本上由以下组成的群组：人免疫缺陷病毒1(HIV-1)、人免疫缺陷病毒2(HIV-2)、维斯纳-梅迪病毒(visna-maedi virus，VMV)病毒、山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)、马传染性贫血病毒(EIAV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)、牛免疫缺陷病毒(BIV)和猿猴免疫缺陷病毒(SIV)。8.如权利要求6至7中任一项所述的载体，其包含左(5')逆转录病毒LTR、Psi(Ψ)包装信号、中心多嘌呤段/DNA瓣(cPPT/FLAP)、逆转录病毒导出元件、可操作地连接到所述多核苷酸的启动子和右(3')逆转录病毒LTR。。9.如权利要求8所述的载体，其进一步包含异源聚腺苷酸化序列。10.如权利要求8或9所述的载体，其中所述5'LTR的启动子经异源启动子置换。11.如权利要求10所述的载体，其中所述异源启动子是巨细胞病毒(CMV)启动子、劳斯肉瘤病毒(Rous Sarcoma Virus，RSV)启动子或猿猴病毒40(SV40)启动子。12.如权利要求8至11中任一项所述的载体，其中所述5'LTR或3'LTR是慢病毒LTR。13.如权利要求8至12...

【专利技术属性】
技术研发人员：理查德，
申请(专利权)人：蓝鸟生物公司，
类型：发明
国别省市：