一种利用APTES修饰的细胞膜色谱柱及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及细胞膜色谱领域，具体是一种新型的APTES修饰的硅胶应用细胞膜色谱中。本发明专利技术经APTES处理后的硅胶具有更高的柱效，大大加强了细胞膜与硅胶的结合力，柱寿命至少延长至12天。另外在柱效下降最快的前3天时间里，其重现性也由以前的20％提高到10％以内。这样的改进十分适用于珍稀或较难以获得的生物材料，可以极大减少生物材料的用量和浪费。

【技术实现步骤摘要】
一种利用APTES修饰的细胞膜色谱柱及其制备方法和应用
本专利技术涉及细胞膜色谱
，具体地说，是一种利用APTES修饰的细胞膜色谱柱及其制备方法和应用。
技术介绍
细胞膜色谱法(Cellmembranechromatography,CMC)结合了生物材料和色谱法的优势，使从复杂体系中筛选出有效的活性成分成为可能。它的原理很简单，就是将细胞膜固定在固定相上，将复杂体系(如中药等)的提取溶液进样到细胞膜色谱模型中，然后用质谱或其他检测器研究所有化合物的保留行为。化合物的保留行为越强，说明其是活性成分的可能性就越大，与其他的亲和色谱原理类似。本课题组已经成功的建立了一系列的CMC模型，并成功搭建了一个在线全二维细胞膜色谱筛选系统。一般来说，细胞膜和硅胶是通过疏水性相互作用结合的。这种结合力比较弱且不稳定，这使得细胞膜很容易从硅胶上脱落，从而导致细胞膜色谱柱寿命短，柱效低。由于色谱固定相上细胞膜的老化和脱落，该模型存在着寿命短、重复性差等缺点。这些缺点很大程度上限制了该模型的推广、应用。尤其是对于一些较为珍稀的细胞种类，其细胞量较少或较难以培养，较难以满足实际的活性筛选要求。这些问题大本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用APTES修饰的细胞膜色谱柱的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a)合成APTES固定相：用APTES对二氧化硅硅胶的球体表面进行修饰，使硅胶表面上通过APTES和戊二醛的桥联，键合得到一端游离的醛基官能团；b)制备APTES修饰的细胞膜色谱柱：收集1×10

【技术特征摘要】
2016.10.19 CN 20161091217821.一种利用APTES修饰的细胞膜色谱柱的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a)合成APTES固定相：用APTES对二氧化硅硅胶的球体表面进行修饰，使硅胶表面上通过APTES和戊二醛的桥联，键合得到一端游离的醛基官能团；b)制备APTES修饰的细胞膜色谱柱：收集1×107至5×107细胞，在110×g条件下离心10min，然后用PBS洗三次；然后加入PBS制成细胞悬液，细胞用超声波处理器破膜；得到的混悬液离心1000×g，10分钟；弃沉淀，然后上清液离心12000×g20min；得到的沉淀再用5mlPBS悬浮即得细胞膜悬浮液；细胞膜固定相是由细胞膜悬液真空搅拌条件下与0.04gAPTES硅胶反应制备；以上所有的程序均在4℃条件下进行；过夜孵育12h后，使用PBS在1000g，10分钟条件下清洗三次；所得沉淀再次用PBS混悬浮，用LC泵以PBS为流动相进行湿法装柱；装填得到的CMC柱在0.2.mlmin-110mM醋酸铵的流速下保持37℃的温度平衡1h，直至柱压和基线平稳。2.根据权利要求1所述的利用APTES修饰的细胞膜色谱柱的制备方法，其特征在于，所述的细胞膜色谱柱中的细胞为HepG2肿瘤干细胞、或HepG2肿瘤细胞。3.根据权利要求1所述的利用APTES修饰的细胞膜色谱柱的制备方法，其特征在于，所述的细胞膜色谱柱中的细胞为第三代HepG2肿瘤微球体。4.一种利用APTES修饰的细胞膜色谱柱，其特征在于，所述的细胞膜色谱柱中的硅胶是经APTES处理后的硅胶，即用APTES对二氧化硅硅胶的球体表面进行修饰，使硅胶表面上通过APTES和戊二醛的桥联，键合得到一端游离的醛基官能团。5.根据权利要求4所述的利用APTES修饰的细胞膜色谱柱，其特征在于，所述的细胞膜色谱柱采用权利要求1-3任一所述的制备方法制备得到。6.一种经APTES修饰的全二维HepG2/CSCMC的分析系统，其特征在于，由安捷伦1200系列高效液相色谱系统、二元泵系统、单元泵系统、恒温箱...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁璇，陈啸飞，曹岩，刘悦，巩志荣，贾丹，王冬尧，陈郎东，王晓宇，赵亮，吕磊，张国庆，朱臻宇，洪战英，柴逸峰，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海,31