人源肝细胞中Nrf1β基因定向敲除识别序列对、Talens、载体对及应用制造技术

本发明专利技术提供人源肝细胞中Nrf1β基因定向敲除识别序列对、Talens、载体对及应用，所述识别序列对由左臂识别序列和右臂识别序列组成，左臂识别序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，右臂识别序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述核酸酶Talens由识别SEQ ID NO.1核苷酸序列的核酸酶左臂Nrf1β‑Talen L和识别SEQ ID NO.2核苷酸序列的核酸酶右臂Nrf1β‑Talen R组成；所述载体对由Nrf1β‑Talen L载体和Nrf1β‑Talen R载体组成；所述载体对能在定向敲除人源肝细胞系中Nrf1β基因、构建Nrf1β基因敲除型人源肝细胞系中应用。

【技术实现步骤摘要】
人源肝细胞中Nrf1β基因定向敲除识别序列对、Talens、载体对及应用
本专利技术属于基因敲除
，具体涉及人源肝细胞中Nrf1β基因定向敲除识别序列对、Talens、载体对及应用。
技术介绍
核因子E2相关因子1(TCF11/Nrf1)具有抗氧化、抗炎症、调控蛋白质降解、糖脂代谢平衡等多种重要生理功能。但由于细胞中Nrf1蛋白存在多个亚型包括Nrf1α、Nrf1β、Nrf1χ、Nrf1D等以及多种翻译后修饰，使得Nrf1的功能未能得到透彻的研究。肝细胞系是研究Nrf1调控糖脂代谢的良好材料，目前市面上还未见有人源肝细胞系Nrf1敲出的细胞系出售，使得Nrf1对糖脂代谢调控的具体分子机制和信号通路比较模糊。传统的研究方法中，使用siRNA干扰技术研究Nrf1功能的原理是通过降解细胞中Nrf1的mRNA，从而达到降低细胞中Nrf1蛋白质水平，而且不能完全消除细胞中的Nrf1，因此得出的研究结果不能排除残留的Nrf1蛋白的影响，此外siRNA技术还存在脱靶问题，siRNA技术的稳定性以及可重复性较差；利用同源重组系统基因敲出技术研究Nrf1则是在基因组上将Nrf1基因全部敲出，但此本文档来自技高网...

【技术保护点】
基于Talen的人源肝细胞中Nrf1β基因定向敲除识别序列对，其特征在于，所述识别序列对由左臂识别序列和右臂识别序列组成；所述左臂识别序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述右臂识别序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

【技术特征摘要】
1.基于Talen的人源肝细胞中Nrf1β基因定向敲除识别序列对，其特征在于，所述识别序列对由左臂识别序列和右臂识别序列组成；所述左臂识别序列的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述右臂识别序列的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。2.用于定向敲除人源肝细胞中Nrf1β基因的转录激活样效应因子核酸酶Talens，其特征在于，所述转录激活样效应因子核酸酶Talens由识别SEQIDNO.1核苷酸序列的核酸酶左臂Nrf1β-TalenL和识别SEQIDNO.2核苷酸序列的核酸酶右臂Nrf1β-TalenR组成；所述Nrf1β-TalenL由识别SEQIDNO.1核苷酸序列的Tale-L和非特异性核酸内切酶Fokl融合而成，所述Nrf1β-TalenR由识别SEQIDNO.2核苷酸序列的Tale-R和非特异性核酸内切酶Fokl融合而成；所述Tale-L的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示，所述Tale-R的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示。3.用于定向敲除人源肝细胞中Nrf1β基因的载体对，其特征在于，所述载体对由Nrf1β-TalenL载体和Nrf1β-TalenR载体组成；所述Nrf1β-TalenL载体包含编码权利要求2所述Tale-L的核苷酸序列，所述Nrf1β-TalenR载体包含编码权利要求2所述Tale-R的核苷酸序列；所述Nrf1β-TalenL载体或Nrf1β-TalenR载体带有嘌呤霉素抗性基因。4.根据权利要求3所述用于定向敲除人源肝细胞中Nrf1β基因的载体对，其特征在于，所述Nrf1β-TalenL载体为包含编码权利要求2所述Tale-L的核苷酸序列的TALEN-LEFT载体；所述Nrf1β-TalenR载体为包含编码权利要求2所述Tale-R的核苷酸序列的TALE-RIGHT载体。5.权利要求3或4所述用于定向敲除人源肝细胞中Nrf1β基因的载体对在定向敲除人源肝细胞系中Nrf1β基因、构建Nrf1β基因敲除型人源肝细胞系中的应用。6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述人源肝细胞为人源肝细胞HL7702细胞。7.Nrf1β基因敲除型人源肝细胞系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：1）采用转染法将权利要求3或4所述载体对转染入人源肝细胞中；2）用嘌呤霉素筛选步骤1）转染培养后的人源肝细胞，得到成功转染Nrf1β-TalenL载体质粒和N...

【专利技术属性】
技术研发人员：张义国，邱露，
申请(专利权)人：重庆大学，
类型：发明
国别省市：重庆,50