麻疯树核糖体失活蛋白及其分离纯化方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种麻疯树核糖体失活蛋白及其制备制备方法，该核糖体失活蛋白从麻疯树种子萌发4～49天的麻疯树幼苗的子叶或/和胚乳中分离纯化得到，相对分子量为31.398kDa，等电点为7.12该核糖体失活蛋白的N‑末端的氨基酸残基的序列如序列表中SEQ ID No：1所示。本发明专利技术还提供了所述麻疯树核糖体失活蛋白在制备治疗肿瘤的药物中的应用，该核糖体失活蛋白对人骨肉瘤U20S、人非小细胞肺癌A549、人非小细胞肺癌H1975和人结肠癌HCT116均具有明显的增殖抑制作用，对人骨肉瘤U20S的离体增殖抑制效果优于Curcin和紫杉醇，并且对人正常肾细胞的毒性较低。

【技术实现步骤摘要】
麻疯树核糖体失活蛋白及其分离纯化方法与应用
本专利技术属于植物蛋白质的分离纯化
，特别涉及麻疯树核糖体失活蛋白及其分离纯化方法与应用。
技术介绍
恶性肿瘤严重威胁着人类的生命健康，但目前还非常缺乏有效的针对性治疗药物。植物中富含各种生物活性蛋白分子，从中寻找高效低毒的肿瘤治疗药物是一种有效途径。核糖体失活蛋白(ribosome-inactivatingproteins，RIPs，EC3.2.2.22)是一种存在于高等植物或真菌中的细胞毒素蛋白，多具有RNAN-糖苷酶或多核苷酸:腺苷糖苷酶活性，通过作用于核糖体28SrRNA上保守的sarcin/ricin环腺苷酸的N-C糖苷键，使核糖体失活，进而抑制蛋白质翻译的进行。根据结构，植物RIPs可分为I型和II型两大类，I型RIP为单链蛋白，II型RIP除了含有类似I型RIPs的A链，还通过二硫键连接具有凝集素活性的B链。研究显示，RIPs具有抗肿瘤、抗病毒和抗真菌等多种生物学活性，特别是I型RIPs和II型RIPs的A链显示出对肿瘤细胞的选择性杀伤作用，若将其与单克隆抗体结合制成免疫毒素，对肿瘤细胞的靶向性大大提高，有望开发成专一杀本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种麻疯树核糖体失活蛋白，其特征在于该核糖体失活蛋白从麻疯树种子萌发4～49天的麻疯树幼苗的子叶或/和胚乳中分离纯化得到，相对分子量为31.398kDa，等电点为7.12，该核糖体失活蛋白的N‑末端的氨基酸残基的序列如序列表中SEQ ID No：1所示。

【技术特征摘要】
1.一种麻疯树核糖体失活蛋白，其特征在于该核糖体失活蛋白从麻疯树种子萌发4～49天的麻疯树幼苗的子叶或/和胚乳中分离纯化得到，相对分子量为31.398kDa，等电点为7.12，该核糖体失活蛋白的N-末端的氨基酸残基的序列如序列表中SEQIDNo：1所示。2.一种麻疯树核糖体失活蛋白的分离纯化方法，其特征在于步骤如下：(1)制备粗提液①将麻疯树种子萌发，收集萌发4～49天的麻疯树幼苗的子叶或/和胚乳，将收集的子叶或/和胚乳用液氮研磨至粉状，然后向所得粉状物料中加入缓冲液A将粉状物料溶解并匀浆至少3min，将所得匀浆液旋转至少2h，然后离心并收集上清液；②在搅拌下向步骤①所得上清液中加入硫酸铵至硫酸铵在上清液中的饱和度为55％～65％，再搅拌至少2h，离心并收集上清液；③在搅拌下向步骤②所得上清液中加入硫酸铵至硫酸铵在上清液中的饱和度为75％～80％，再搅拌至少2h，离心并弃上清液、收集沉淀，将所得沉淀溶解于缓冲液A中即得粗提液；步骤(1)中，液氮研磨之后的操作均在0～8℃进行，缓冲液A温度为0～8℃；(2)脱盐层析及缓冲液交换采用缓冲液B进行柱平衡，然后将步骤(1)所得粗提液作为样品上样，上样后用缓冲液B洗脱，收集第一个280nm吸收峰对应的洗脱组分，柱填料为SephadexG25superfine；(3)阴离子交换层析采用缓冲液B进行柱平衡，然后将步骤(2)收集的洗脱组分作为样品上样，上样后先用缓冲液B冲洗至基线稳定，然后采用缓冲液B和缓冲液C进行线性梯度洗脱，收集线性梯度洗脱阶段最高的280nm吸收峰对应的洗脱组分，柱填料为QSepharoseHP；(4)...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐莺，杨千，张杨雪，丁蒙蒙，陈放，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川,51