灭活登革热病毒疫苗制造技术

本发明专利技术提供了含有纯化的灭活登革热病毒的免疫原性组合物的制剂及其生产方法。

Inactivated dengue virus vaccine

The present invention provides formulations comprising immunogenic compositions of Purified Inactivated dengue virus and methods of producing the same.

【技术实现步骤摘要】
灭活登革热病毒疫苗本申请是以下申请的分案申请：申请日：2012年5月25日；申请号：201280031821.0(PCT/EP2012/059879)；专利技术名称：同上。相关申请的交叉引用本申请要求2011年5月26日提交的美国临时申请61/490,205和2011年12月15日提交的61/570,966的较早申请日的权利，所述申请的公开内容并入本文。依照37C.F.R.§1.71(E)的版权通告本专利文件的部分公开内容含有受到版权保护的材料。版权所有者不反对专利文件或专利公开内容中使用的提交到专利与商标局(PatentandTrademarkOffice)的专利文件或记录中出现的任何复制件，但除此之外保留所有版权权利。背景登革热是通过蚊子传播的人类急性病毒性疾病。其为全球热带和亚热带的地方性疾病，每年估计有100,000,000例发生。虽然比较罕见，但是登革出血热(DHF)和登革休克综合征(DSS)在儿童中是主要的致死原因。目前，还没有保护免于登革热的疫苗，而通过控制蚊子媒介来防病的试图也被证明基本无效。因此，仍然需要安全和有效的疫苗来保护免于由登革热病毒导致的疾病。简述本专利技术公开内容涉及配制引发针对登革热病毒的免疫应答的组合物。附图简述图1是泊洛沙姆表面活性剂α-羟基-ω-羟基聚(氧乙烯)聚(氧丙烯)聚(氧乙烯)三嵌段共聚物的通式的图示说明。图2A和B是说明包含纯化的灭活登革热病毒的免疫原性组合物的纯化和灭活的示例性过程的流程图。图2C和D是说明纯化和灭活的可替代过程的流程图。图3A和B是说明包含纯化的灭活登革热病毒的免疫原性组合物的配制的示例性过程的流程图。图4A-B是说明配制包含纯化的灭活登革热病毒的免疫原性组合物之后产物表征的代表性结果的表。图5A-C是说明冻干和重构之后产物表征的代表性结果的表。图6A和B是稳定性特征的图示代表(A：固有荧光280/320；B：ELISA)。详述介绍本公开内容涉及配制免疫原性组合物。具体而言，本公开内容涉及配制组合物，诸如原料疫苗制品(bulkvaccinepreparation)和免疫原性组合物，其含有一株或多株纯化的灭活登革热病毒。本文公开的配制方法增加了含有纯化的灭活登革热病毒的免疫原性组合物的回收率和稳定性，促进它们的产生、储存和分配。本公开内容的第一个方面涉及组合物，其包含一种或多种纯化的灭活登革热病毒与缓冲剂和表面活性剂的组合。有利地，此类组合物是适合于配制成免疫原性组合物(例如，防止由于登革热病毒的感染和/或疾病的疫苗)的灭活登革热病毒的原料制品(bulkpreparation)。例如，与不包含表面活性剂的制剂相比，添加选择的表面活性剂增强了抗原性保存的灭活登革热病毒的回收率。含有表面活性剂的纯化的灭活登革热病毒的制剂具有减少(例如，在冻干、储存和重构过程中)灭活病毒的非特异性吸附和/或聚集的有利特性。本文公开的组合物可以包含一种或多于一种血清型的登革热病毒。通常，该组合物包括来自多于一种血清型的多种登革热病毒，即登革热血清型1、登革热血清型2、登革热血清型3和/或登革热血清型4(分别为DEN-1、DEN-2、DEN-3、和/或DEN-4)。例如，组合物可以包含来自不同血清型的登革热病毒中的两种、三种或四种不同的病毒。在一个具体实例中，该组合物包括四种不同的纯化的灭活登革热病毒，每种不同的血清型能够引发对于每种不同血清型的登革热病毒特异性的免疫应答。因此，该组合物有利地包含四种不同的纯化的灭活登革热病毒，其引起针对所有DEN-1、DEN-2、DEN-3和DEN-4的免疫应答。一种或多种病毒可以选自野生型病毒(即，从天然存在的分离株的强毒病毒繁殖或者对应于天然存在的分离株的强毒病毒)，或者一种或多种病毒可以选自减毒病毒。选择的病毒可以是重组病毒。例如，重组病毒可以是嵌合病毒，例如，具有来自登革热病毒的核酸和来自另一种黄病毒(诸如不同登革热病毒、黄热病病毒或日本脑炎病毒)的核酸的病毒。通常，嵌合病毒包括登革热M和登革热E蛋白中的一种或两种。单一组合物可以以任何组合包含一种或多种野生型病毒、一种或多种减毒病毒、一种或多种重组病毒、和/或一种或多种嵌合病毒。可以单独或组合使用化学、物理和/或辐射灭活剂灭活纯化的灭活登革热病毒。可以通过暴露于甲醛、β-丙内酯(BPL)、过氧化氢、紫外线辐射和γ辐射或这些技术的任何组合灭活纯化的灭活登革热病毒。通常，单次人剂量的免疫原性组合物含有至少0.1µg、0.2µg、至少0.25µg、至少0.3µg、至少0.33µg、至少0.4µg、至少0.5µg、至少1.0µg、或至少2.0µg、或至少3.0µg、或至少5.0µg、或至少10.0µg(或0.1和10.0µg之间的任何量)的每种血清型的病毒。通常，单次人剂量的免疫原性组合物含有不超过100μg的每种血清型的病毒，例如，不超过90μg、或不超过80μg、或不超过75μg、或不超过70μg、或不超过60μg、或不超过50μg、或不超过40μg、或不超过30μg、或不超过20μg、或不超过10μg(或10和100µg之间的任何量)的每种血清型的病毒。例如，单次人剂量的免疫原性组合物可以包括0.1至10µg，或约0.25至5µg，例如，在0.05至2ml的体积中，诸如0.5至1.5ml的体积中进行施用。在某些实施方案中，将一种或多种纯化的灭活登革热病毒吸附到铝盐(“alum”)，诸如氢氧化铝、磷酸铝或羟基磷酸铝上。当包括多种登革热病毒时，每种都可以吸附到相同铝盐上，或者不同病毒可以吸附到不同铝盐上。因此，在一个方面，本公开内容涉及含有吸附(例如，预吸附)到铝盐上的至少一种纯化的灭活登革热病毒与缓冲剂和表面活性剂的组合的免疫原性组合物。在本文公开的免疫原性组合物(和由其制备成品免疫原性组合物的原料制品)的背景下，选择表面活性剂以适合用于施用于受试者，特别是人受试者。在某些实施方案中，选择表面活性剂适合用于肠胃外施用，例如，用于肌内、皮下、经皮或皮内施用。适合用于本文公开的登革热组合物的示例性表面活性剂包括泊洛沙姆表面活性剂，以及适合用于施用于人受试者的其他表面活性剂。因此，合适的表面活性剂(除了泊洛沙姆表面活性剂以外)可以选自：聚山梨醇酯表面活性剂、辛苯昔醇(octoxinol)表面活性剂、聚多卡醇表面活性剂、聚氧乙烯硬脂酸酯表面活性剂、聚氧乙烯蓖麻油表面活性剂、N-辛基葡糖苷表面活性剂、聚乙二醇15羟基硬脂酸酯和它们的组合。在某些实施方案中，泊洛沙姆表面活性剂特别适合用于其中一种或多种纯化的灭活登革热病毒没有吸附到铝盐上的制剂。泊洛沙姆表面活性剂是聚乙二醇-聚丙二醇线性共聚物。商业上，这些通常被称为普朗尼克表面活性剂。在某些实施方案中，泊洛沙姆表面活性剂选自聚乙二醇-聚乙二醇共聚物，其平均分子量为至少约1000kD，并且平均分子量不超过约15,000kD。在一个具体实施方案中，免疫原性组合物用聚乙二醇-聚丙二醇共聚物泊洛沙姆188来配制，其以商标Pluronic™F68、Lutrol™F68和Kolliphor™P188进行商业销售，其平均分子量为8600kD，聚氧丙烯分子量为1800g/摩尔，并且聚氧乙烯含量为80％。组合物(原料制品和免疫原性组合物)还包括本文档来自技高网...

【技术保护点】
灭活登革热病毒的原料制品或免疫原性组合物，其包含：一种或多种纯化的灭活登革热病毒；缓冲剂；和泊洛沙姆表面活性剂。

【技术特征摘要】
2011.05.26 US 61/490205;2011.12.15 US 61/5709661.灭活登革热病毒的原料制品或免疫原性组合物，其包含：一种或多种纯化的灭活登革热病毒；缓冲剂；和泊洛沙姆表面活性剂。2.权利要求1的免疫原性组合物，其进一步包含佐剂。3.权利要求2的免疫原性组合物，其中所述佐剂包含铝盐，任选氢氧化铝和磷酸铝中的至少一种。4.权利要求3的免疫原性组合物，其进一步包含至少一种额外的免疫刺激性组分，任选地其中所述至少一种额外的免疫刺激性组分包含油和水乳剂、脂质体、脂多糖、皂苷、和寡核苷酸中的一种或多种。5.权利要求2的免疫原性组合物，其中所述佐剂是不含铝的佐剂，任选地包含选自以下的一种或多种免疫刺激性组分：油和水乳剂、脂质体、脂多糖、皂苷和寡核苷酸。6.灭活登革热病毒的原料制品或免疫原性组合物，其包含：吸附到铝盐上的至少一种纯化的灭活登革热病毒；缓冲剂；和表面活性剂。7.权利要求6的免疫原性组合物，其进一步包含至少一种额外的免疫刺激性组分，任选地所述免疫刺激性组分包含油和水乳剂、脂质体、脂多糖、皂苷、和寡核苷酸中的一种或多种。8.权利要求4、5和7中任一项的免疫原性组合物，其中所述一种或多种免疫刺激性组分包含3-脱酰基单磷酰脂质A(3D-MPL)、QS21、包含至少一个未甲基化CpG的DNA寡核苷酸和/或脂质体。9.前述权利要求中任一项的灭活登革热病毒的原料制品或免疫原性组合物，其中所述表面活性剂适合用于肌内、皮下、经皮或皮内施用。10.前述权利要求中任一项的灭活登革热病毒的原料制品或免疫原性组合物，其中所述表面活性剂选自泊洛沙姆、聚乙二醇15羟基硬脂酸酯、聚山梨醇酯、辛苯昔醇、聚多卡醇、聚氧乙烯硬脂酸酯、聚氧乙烯蓖麻油、N-辛基-葡糖苷和它们的组合。11.前述权利要求中任一项的灭活登革热病毒的原料制品或免疫原性组合物，其中所述泊洛沙姆表面活性剂的分子量为至少4500kD和/或不超过15,000kD。12.前述权利要求中任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：V亨德里克斯，O勒布西，DI莱莫伊内，F马托特，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时,BE