一种具有抗炎活性的酚酸类化合物的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种新的酚酸类化合物在制备抗炎药物中的应用，发明专利技术还涉及从中药百尾参中提取、分离、纯化本化合物的制备方法。药理研究表明该新化合物具有显著抑制脂多糖(LPS)引起的小鼠巨噬细胞RAW246.7中IL‑1β，COX‑2和TNF‑αmRNA的表达水平，且多呈剂量依赖关系，表明本发明专利技术所述化合物具有明显的抗炎活性，可用于抗炎药物的制备。该制备方法简单易行，所得化合物纯度高，具有良好的经济效益和应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗炎活性的酚酸类化合物的制备方法及其应用
本专利技术涉及一种具有抗炎活性的酚酸类化合物的制备方法及其应用，属于天然药物医药

技术介绍
百尾参为百合科(Liliaceae)万寿竹属(Disporum)植物万寿竹(Disporumcantoniense(Lour)Merr)的根及根茎，别名又叫白味参、百尾笋、白龙须。百尾参为多年生草本植物，其味甘、淡，性平。具有抗炎、镇痛、止咳的生物活性。我们对百尾参的化学成分及其生物活性进行了较为系统的研究，并对分离得到的化合物进行了抗炎活性的研究。本专利即首次报道了其中一个新化合物及其制备方法和抗炎活性。
技术实现思路
本专利技术的目的是对百尾参进行活性成分研究，提供一种具有抗炎活性的新的酚酸类化合物。为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种具有抗炎活性的酚酸类化合物，名称为：(3S,4S,5S)-3-羟基-4-甲氧基-2-(γ-内酯)-脱氧戊糖酸，其结构式如下：本专利技术提供的一种具有抗炎活性的酚酸类化合物的制备方法，具体步骤为：(1)提取：所用原料为百合科万寿竹属万寿竹的根及根茎，采自贵州安顺猫营镇，将干燥百尾参药材粉碎后，用75％乙醇溶液加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩得总提取物；(2)粗分：将上述提取所得总提取物，用水溶解后，经HP-20离子型交换树脂，分别以水、30％乙醇溶液、60％乙醇溶液、95％乙醇溶液洗脱，每个梯度洗脱三个保留体积，收集30％乙醇溶液洗脱部位，于60℃减压浓缩得粗提物；(3)精制：上述得粗提物，30％乙醇洗脱部位总浸膏63g，加水溶解，滤过，滤液上样于中压MCI柱色谱，用10％、20％、30％、40％、50％的MeOH-H2O洗脱得到5个流分A～E，取C流分经过中压ODS反相柱色谱，用5％、10％、20％、50％MeOH-H2O洗脱，其中20％MeOH-H2O部位再经制备型HPLC制备，以体积比为5:95的甲醇-水为流动相，检测波长254nm，流速2ml/min，保留时间22min处制备得该化合物。其中，步骤(1)所述的提取方法包括冷浸法、渗漉法、微波提取法、超声提取法、回流提取法和连续回流提取法。本专利技术提供了一种酚酸类化合物在制备抗炎药物中的应用。本专利技术所提供的一种具有抗炎活性的酚酸类化合物，将化合物和药学上可接受的载体制备成片剂、胶囊剂、注射剂、粉针剂、颗粒剂、脂肪乳剂、微囊、滴丸、软膏剂或透皮控释贴剂等剂型。本专利技术提供的一种具有抗炎活性的酚酸类化合物制备方法简单易行，所得化合物纯度高，具有良好的经济效益和应用前景。附图说明图1为本专利技术提供的一种具有抗炎活性的酚酸类化合物的结构示意图；具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后,本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例1制备百尾参提取物(1)提取：所用原料为百合科万寿竹属万寿竹的根及根茎，采自贵州安顺猫营镇，将干燥百尾参药材粉碎后，用75％乙醇溶液加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩得总提取物；(2)粗分：将上述提取所得总提取物，用水溶解后，经HP-20离子型交换树脂，分别以水、30％乙醇溶液、60％乙醇溶液、95％乙醇溶液洗脱，每个梯度洗脱三个保留体积，收集30％乙醇溶液洗脱部位，于60℃减压浓缩得粗提物；(3)精制：上述得粗提物，30％乙醇洗脱部位总浸膏63g，加水溶解，滤过，滤液上样于中压MCI柱色谱，用10％、20％、30％、40％、50％的MeOH-H2O洗脱得到5个流分A～E，取C流分经过中压ODS反相柱色谱，用5％、10％、20％、50％MeOH-H2O洗脱，其中20％MeOH-H2O部位再经制备型HPLC制备，以体积比为5:95的甲醇-水为流动相，检测波长254nm，流速2ml/min，保留时间22min处制备得该化合物。结构鉴定：主要利用光谱技术，包括紫外、红外、质谱、核磁共振(1H-NMR、13C-NMR、2D-NMR)鉴定其结构，再经TOF高分辨质谱精确确定其分子量及分子式。命名为(3S,4S,5S)-3-羟基-4-甲氧基-2-(γ-内酯)脱氧戊糖酸。分子式为C12H14O6，ESI-MS：254.0796[M-H]-.其波谱数据见表1。表1.化合物1H-NMR(DMSO-d6，600MHz)和13C-NMR(DMSO-d6，150MHz)实施例2抗炎活性试验将单体化合物作用于脂多糖(LSP)诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞，通过检测RAW264.7细胞中IL-1β，COX-2和TNF-αmRNA的表达水平来检测其抗炎活性。1、药物溶液的配制(1)将单体化合物用DMSO配制成100μg/mL溶液，置于-4℃保存；(2)脂多糖(lipopolysaccharidefromEscherichiaColiE0127:B8-purifiedbyphenolextraction，LPS)，购自Sigma-Aldrich公司，货号：L3129，用重蒸水配制成100μg/mL溶液，-20℃保存。2、细胞株:RAW264.7小鼠巨噬细胞，由中国科学研究院上海分院提供。3、试验方法:按常规复苏细胞并且传代培养，使用DMEM+10％PBS+1％双抗(青霉素、链霉素)的完全培养基，接种细胞到6孔细胞培养板，每孔细胞悬液2ml，细胞数为1.5×105个；每个化合物按每孔不同药物浓度分成2组，即100μg/mL和10μg/mL组，置于5％CO2培养箱于37℃培养48小时，加入LPS(终浓度为10ng/mL)，诱导4小时，每孔加入lmlTRIzol试剂提取RNA，用RNA反转录试剂盒将RNA反转录为cDNA，用实时定量PCR方法(RealTime-PCR)进行IL-1β，COX-2和TNF-αmRNA的表达水平检测，对检测数据进行统计分析，以确定药物预处理对于LPS诱导的炎症反应是否具有抑制作用。结果如表2所示。表2.化合物对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞中IL-1β，COX-2和TNF-αmRNA表达水平相对值的影响(平均值±方差)注：**P<0.01；药物预处理组与DMSO+LSP组比较。由表2数据可见，该化合物能显著抑制脂多糖(LSP)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7中IL-1β，COX-2和TNF-αmRNA的表达水平，且多呈剂量依赖关系，表明本专利技术所述化合物具有明显的抗炎活性。因此，可以用于制备新的抗炎活性药物。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有抗炎活性的酚酸类化合物，其特征为：名称为：(3S,4S,5S)‑3‑羟基‑4‑甲氧基‑2‑(γ‑内酯)‑脱氧戊糖酸，其结构式如下：

【技术特征摘要】
1.一种具有抗炎活性的酚酸类化合物，其特征为：名称为：(3S,4S,5S)-3-羟基-4-甲氧基-2-(γ-内酯)-脱氧戊糖酸，其结构式如下：2.如权利要求1所述的一种具有抗炎活性的酚酸类化合物，其特征为：制备方法的具体步骤为：(1)提取：所用原料为百合科万寿竹属万寿竹的根及根茎，采自贵州安顺猫营镇，将干燥百尾参药材粉碎后，用75％乙醇溶液加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩得总提取物；(2)粗分：将上述提取所得总提取物，用水溶解后，经HP-20离子型交换树脂，分别以水、30％乙醇溶液、60％乙醇溶液、95％乙醇溶液洗脱，每个梯度洗脱三个保留体积，收集30％乙醇溶液洗脱部位，于60℃减压浓缩得粗提物；(3)精制：上述得粗提物，30％乙醇洗脱部位总浸膏63g，加水溶解，滤过，滤液上样于中压MCI柱色谱，用10％、20...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志峰，冯育林，王琦，欧阳辉，何明珍，杨世林，樊东辉，严小军，
申请(专利权)人：江西本草天工科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：江西,36