一种同时提取罗汉果甜苷V、Ⅵ和11-O基苷V的方法技术

一种同时提取罗汉果甜苷V、Ⅵ和11‑O基苷V的方法，包括以下步骤：（1）将罗汉果甜苷V精制母液溶解，正丁醇萃取，得正丁醇层；（2）浓缩，冷却，析晶，过滤，得晶体和析晶母液，晶体干燥，得罗汉果甜苷Ⅵ；（3）将析晶母液浓缩至无醇，溶解，过聚酰胺层析柱，收集流出液，浓缩，干燥，得罗汉果甜苷V；（4）先后用低度醇和高度醇对层析柱洗脱，收集高度醇洗脱液，浓缩，冷却，析晶，过滤，干燥，得罗汉果11‑O基苷V。本发明专利技术方法所得罗汉果甜苷Ⅵ的纯度≥97%，收率≥83%，罗汉果甜苷V的纯度≥89%，收率≥89%，11‑O基苷V的纯度≥96%，收率≥85%；本发明专利技术方法条件温和，安全环保，适于工业化生产。

A method for the simultaneous extraction of Mogroside V, VI and 11 O base by V

A method for the simultaneous extraction of Mogroside V, VI and 11 O base by V, which comprises the following steps: (1) the Mogroside V refined liquor dissolved, butanol extraction was n-butanol layer; (2) concentration, cooling, crystallization, filtration, crystal and crystallization mother liquor. The crystal was dry, Mogroside VI; (3) the crystallization mother liquor concentration to no alcohol, dissolved, polyamide chromatography, collect the eluent, concentration, drying, was Mogroside V; (4) has used low alcohol and alcohol on the height of column elution, collecting high alcohol eluent concentration, cooling, crystallization, filtration, drying, was 11 O based V in Siraitia grosvenorii. The method of the invention of the Mogroside VI purity not less than 97%, the yield is 83%, Mogroside V purity is more than 89%, the yield is 89%, 11 O base by V purity of more than 96%, the yield is 85%; the invention has mild condition, safety and environmental protection, and is suitable for industrialized production.

【技术实现步骤摘要】
一种同时提取罗汉果甜苷V、Ⅵ和11-O基苷V的方法
本专利技术涉及一种提取罗汉果甜苷的方法，具体涉及一种同时提取罗汉果甜苷V、Ⅵ和11-O基苷V的方法。
技术介绍
罗汉果是我国传统的药食同源植物，罗汉果甜苷是其主要的功能成分，是一类高甜度、低卡路里的理想天然甜味剂，因其具有多种生物活性而备受人们的关注。罗汉果甜苷分为多种，研究表明罗汉果甜苷是一种三萜烯葡萄糖苷，其配糖苷元是三萜烯醇，有两条由四个以下葡萄糖单位组成的葡萄糖苷侧链，以β-糖苷键与苷元相连，侧链葡糖糖之间的连接键为β-1,6和β-1,2糖苷键。其中，罗汉果甜苷V的含量最高，其次是11-O基苷V和苷Ⅵ，三种甜苷的分子式如下：罗汉果甜苷V罗汉果11-O基苷V罗汉果甜苷Ⅵ罗汉果甜苷的提取在国内已有多年的产业化经验，对于罗汉果甜苷V的分离和提纯的研究比较广泛。CN101029071A公开了一种从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷V的方法，是以罗汉果鲜果为原料，通过乙醇回流提取，乙酸乙酯和正丁醇萃取，聚酰胺和硅胶层析，得到罗汉果苷V。但是，该方法过于复杂，生产成本极高，且只能获得罗汉果苷V一种成分。CN106074669A公开了一种罗汉果多酚的提取方法，是以罗汉果果皮为原料，通过干燥，粉碎，乙醇超声提取，聚酰胺吸附，洗脱，浓缩等步骤得到罗汉果多酚提取物。但是，该方法未涉及罗汉果甜苷的分离方法。CN1375499A公开了一种从罗汉果中提取分离多种成份的方法，是以罗汉果为原料，通过碱水提取，脂肪醇沉淀，离子交换树脂、大孔树脂、聚酰胺树脂等处理，得到罗汉果甜苷、罗汉果多糖和罗汉果黄酮。但是，该方法获得的罗汉果甜苷为多种甜苷的混合物，并未得到各甜苷的高纯产品。CN101851265A公开了一种从干罗汉果中提取多种活性成分的方法，是先将干罗汉果去核，再通过加水闪提，离心，多次聚酰胺层析，D213脱色，醇沉，酶解等步骤，分别得到甜苷、多酚、多糖、低聚糖和氨基酸等成分。但是，该方法获得的罗汉果甜苷同样是多种甜苷的混合物，并未得到各甜苷的高纯产品。由上可知，现有关于罗汉果11-O基苷V和苷Ⅵ分离和提纯的报道很少。实际生产中得到的罗汉果提取物通常是罗汉果总苷的混合物，因此，迫切需要找到一种方法，实现单一成分的分离，并实现产业化。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种所得产品纯度、收率高，成本低，工艺条件温和，安全环保，适于工业化生产的同时提取罗汉果甜苷V、Ⅵ和11-O基苷V的方法。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案如下：一种同时提取罗汉果甜苷V、Ⅵ和11-O基苷V的方法，包括以下步骤：（1）正丁醇萃取：将罗汉果甜苷V精制母液用水溶解，加入正丁醇进行萃取，分离水层，得正丁醇层；（2）浓缩析晶：将步骤（1）所得正丁醇层减压浓缩，冷却，搅拌析晶，过滤，得晶体和正丁醇析晶母液，将晶体干燥，得罗汉果甜苷Ⅵ；（3）聚酰胺层析：将步骤（2）所得正丁醇析晶母液减压浓缩至无醇，将所得浓缩物用水溶解，通过聚酰胺层析柱，收集上柱流出液，减压浓缩，干燥，得罗汉果甜苷V；（4）梯度洗脱：先后用低度醇溶液和高度醇溶液对步骤（3）过柱后的聚酰胺层析柱进行洗脱，收集高度醇洗脱液，浓缩，冷却，析晶，过滤，干燥，得罗汉果11-O基苷V。优选地，步骤（1）中，所述罗汉果甜苷V精制母液中，罗汉果甜苷Ⅵ的质量含量为10～30%，罗汉果甜苷V的质量含量为10～15%，11-O基苷V的质量含量为5～20%。本专利技术所述罗汉果甜苷V精制母液来源于以罗汉果提取物为原料，用有机溶剂结晶制备高纯度罗汉果甜苷V时所产生的母液。优选地，步骤（1）中，所述罗汉果甜苷V精制母液、水和正丁醇的质量比为1:5～10:4～30（更优选1:5～10:5～15）。本专利技术人研究发现，加入的水可溶解水溶性的杂质、色素以及无机盐等，通过保留在水层中以除去，而加入的正丁醇对总苷的溶解度适中，且可与水分层，实现杂质与总苷的分离，这是其它溶剂无法替代的。若正丁醇的用量过少，则总苷的萃取不彻底；若正丁醇的用量过多，将加大浓缩的任务量，并增加物料损耗。优选地，步骤（2）、（3）中，所述减压浓缩的温度为70～90℃，减压浓缩的真空度为-0.06～-0.09MPa，浓缩至浓缩液的质量浓度为20～35%（更优选25～30%）。若浓缩后的浓缩液浓度过低，则达不到罗汉果苷Ⅵ结晶的浓度，罗汉果苷Ⅵ无法充分析出；若浓缩后的浓缩液浓度过高，则杂质也将析出，降低产品的纯度。优选地，步骤（2）中，所述搅拌析晶的温度为15～30℃，转速为60～120r/min，时间为12～36h。在所述析晶条件下，使得析出的晶体为高纯的罗汉果甜苷Ⅵ，而不会析出其它的甜苷或杂质。优选地，步骤（3）中，所述水的用量为浓缩物质量的18～50倍（更优选20～30倍）。用水溶解的目的是使浓缩物以水溶液的状态通过聚酰胺层析柱层析，更有利于吸附。聚酰胺的吸附是“氢键原理”，只有与聚酰胺树脂形成氢键的物质才可吸附于其上，且树脂吸附有一个最佳的浓度，高于或低于此浓度都将导致吸附率下降，所以，若水的用量过少，水溶液中的总物质的浓度过高，则聚酰胺无法吸附11-O基苷V及黄酮、多酚等杂质，导致罗汉果甜苷V与11-O基苷V和杂质无法分离；若水的用量过多，则将延长上柱的时间，造成人力、物力的浪费。优选地，步骤（3）中，所述聚酰胺的目数为50～200目，用量为浓缩物质量的4～20倍（更优选5～10倍），聚酰胺层析柱的高径比为1～20:1（更优选5～15:1）。使用聚酰胺的目的是吸附11-O基苷V，从而使11-O基苷V和罗汉果甜苷V分离。若聚酰胺的用量过少，或层析柱的高径比过小，都将导致11-O基苷V无法充分的被吸附；若聚酰胺的用量过多，或层析柱的高径比过大，都将增加洗脱的难度和时间。优选地，步骤（3）中，上柱的流速为0.5～2.0BV/h。本专利技术方法所述1BV=1个柱床体积。优选地，步骤（4）中，所述低度醇溶液和高度醇溶液中的醇均为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇等中的一种或几种；所述低度醇溶液的体积浓度为10～40%（更优选15～30%），所述高度醇溶液的体积浓度为50～85%（更优选70～80%）。利用低度醇和高度醇的极性不同，进行梯度洗脱，梯度洗脱先用低度醇洗脱除去黄酮、多酚等杂质，再用高度醇将目标产品11-O基苷V洗脱并收集。优选地，步骤（4）中，所述低度醇溶液的用量为2～5BV，高度醇溶液的用量为2～5BV；所述洗脱的流速均为0.5～2.0BV/h。优选地，步骤（4）中，所述浓缩的温度为60～80℃，浓缩至浓缩液的质量浓度为25～45%。优选地，步骤（4）中，所述析晶的温度为15～30℃，时间为12～36h。本专利技术方法的原理为：罗汉果甜苷V精制母液的成分除了含有少量罗汉果甜苷V之外，主要的成分是11-O基苷V和罗汉果甜苷Ⅵ。在同时提取罗汉果甜苷Ⅵ、罗汉果苷V和11-O基苷V时，由于罗汉果甜苷Ⅵ在母液中所占比例高，且其极性比其它两种甜苷都小，可在正丁醇中结晶析出，所以首先提取出罗汉果甜苷Ⅵ；11-O基苷V因其特有的结构可与聚酰胺形成氢键，因此可以吸附于聚酰胺层析柱，而罗汉果甜苷V不能与聚酰胺形成氢键，所以聚酰胺对罗汉果甜苷V不吸附，因而得以分离。本专利技术方法的有益效果如下：（1）本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时提取罗汉果甜苷V、Ⅵ和11‑O基苷V的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）正丁醇萃取：将罗汉果甜苷V精制母液用水溶解，加入正丁醇进行萃取，分离水层，得正丁醇层；（2）浓缩析晶：将步骤（1）所得正丁醇层减压浓缩，冷却，搅拌析晶，过滤，得晶体和正丁醇析晶母液，将晶体干燥，得罗汉果甜苷Ⅵ；（3）聚酰胺层析：将步骤（2）所得正丁醇析晶母液减压浓缩至无醇，将所得浓缩物用水溶解，通过聚酰胺层析柱，收集上柱流出液，减压浓缩，干燥，得罗汉果甜苷V；（4）梯度洗脱：先后用低度醇溶液和高度醇溶液对步骤（3）过柱后的聚酰胺层析柱进行洗脱，收集高度醇洗脱液，浓缩，冷却，析晶，过滤，干燥，得罗汉果11‑O基苷V。

【技术特征摘要】
1.一种同时提取罗汉果甜苷V、Ⅵ和11-O基苷V的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）正丁醇萃取：将罗汉果甜苷V精制母液用水溶解，加入正丁醇进行萃取，分离水层，得正丁醇层；（2）浓缩析晶：将步骤（1）所得正丁醇层减压浓缩，冷却，搅拌析晶，过滤，得晶体和正丁醇析晶母液，将晶体干燥，得罗汉果甜苷Ⅵ；（3）聚酰胺层析：将步骤（2）所得正丁醇析晶母液减压浓缩至无醇，将所得浓缩物用水溶解，通过聚酰胺层析柱，收集上柱流出液，减压浓缩，干燥，得罗汉果甜苷V；（4）梯度洗脱：先后用低度醇溶液和高度醇溶液对步骤（3）过柱后的聚酰胺层析柱进行洗脱，收集高度醇洗脱液，浓缩，冷却，析晶，过滤，干燥，得罗汉果11-O基苷V。2.根据权利要求1所述同时提取罗汉果甜苷V、Ⅵ和11-O基苷V的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述罗汉果甜苷V精制母液中，罗汉果甜苷Ⅵ的质量含量为10～30%，罗汉果甜苷V的质量含量为10～15%，11-O基苷V的质量含量为5～20%。3.根据权利要求1或2所述同时提取罗汉果甜苷V、Ⅵ和11-O基苷V的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述罗汉果甜苷V精制母液、水和正丁醇的质量比为1:5～10:4～30。4.根据权利要求1～3之一所述同时提取罗汉果甜苷V、Ⅵ和11-O基苷V的方法，其特征在于：步骤（2）、（3）中，所述减压浓缩的温度为70～90℃，减压浓缩的真空度为-0.06～-0.09MPa，浓缩至浓缩液的质量浓度为20～35%。5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：李伟，龙伟岸，黄华学，
申请(专利权)人：湖南华诚生物资源股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43