中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量快速检测试剂盒，属于临床医学检测领域。所述试剂盒包括卡盒、比色卡和试纸条三部分：卡盒包括盒盖（8）与盒底（15）两部分，卡盒内置比色卡（9）和试纸条。卡盒正面可见检视窗（1）、加样孔（4）和比色窗（7），盒盖正面印有结果标识（2）、加样孔标识（3）、品名标识（5）及信息记录栏（6）。本实用新型专利技术应用免疫层析技术，以高效中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体或多克隆抗体作为捕获抗体和检测抗体，用比色卡进行靶物质浓度半定量，用滤血垫和渗滤垫过滤红血球和颗粒物质，制备一种半定量快速检测试剂盒，可快速简便的半定量检测血清、血浆、全血和尿液中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白。

Neutrophil gelatinase associated carrier protein semi quantitative assay kit

The utility model discloses a semi quantitative quantitative detection kit for neutrophil gelatinase associated lipid carrier protein, which belongs to the field of clinical medicine testing. The reagent box comprises a card box, a color ratio card and a test paper strip three parts: a card box comprises a box cover (8) and a box bottom (15) two parts. The card box is provided with a color ratio card (9) and a test paper strip. The front of the card box is provided with a view window (1), an adding sample hole (4) and a colorimetric window (7), and the box cover is printed with a result identification (2), a sample hole sign (3), a commodity name identification (5) and an information recording column (6). The utility model has the advantages of application of immunochromatographic technology to efficient neutrophil gelatinase associated lipocalin monoclonal antibody or polyclonal antibody as capture antibody and detection antibody, with color target concentration by semi quantitative blood filtration pad and infiltration of red blood cells and particulate matter filter filtration, preparation of rapid detection kit and a half it is easy to quantitative and semi quantitative detection of serum, plasma, blood and urine neutrophil gelatinase associated lipocalin.

【技术实现步骤摘要】
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量检测试剂盒
本技术属于临床医学检测领域，涉及免疫层析检测技术，具体涉及一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量快速检测试剂盒。
技术介绍
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Neutrophilgelatinasesociatedlipocalin,NGAL)，又称人脂质运载蛋白2(lipocalin2,Ln2)或噬铁蛋白(siderocalin)，是人脂质运载蛋白家族的一个新成员。NGAL是1993年Kjedsen等在研究中性粒细胞时发现的一种特殊颗粒组分，与明胶酶B，即基质金属酶9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)密切相关。NGAL是一种小分子蛋白，正常生理状态下，中性粒细胞、肾小管上皮细胞、肺泡巨噬细胞、支气管上皮粘液细胞等可分泌少量NGAL。NGAL的生理功能尚不完全清楚，可能参与不同生理、病理过程，涉及胚胎发育、细胞分化、肿瘤的发生发展、细胞凋亡、炎症免疫应答、脂质代谢等。研究表明，在各种原因引起的肾损伤中，血液和尿液中NGAL显著升高，尤其在损伤2小时内即可迅速升高，早于其他肾功能检测指标，因此，NGAL作为一种高灵敏度的急性肾损伤早期诊断指标备受业界关注。丹麦Bioproto公司的一项研究结果表明，健康志愿者EDTA血浆中NGAL浓度范围为37-106ng/ml，平均值63ng/ml，尿液中NGAL的浓度范围为0.7-9.8ng/ml，平均值5.3ng/ml。而ICU病房中急性肾损伤(Acutekidneyinjury,AKI)患者NGAL浓度在血清中为66-922ng/ml，尿液中为110-40000ng/ml。各种临床试验研究证明：(1)NGAL可作为急性肾损伤的标志物，急性肾损伤时患者血、尿NGAL浓度通常会迅速升高，2小时最明显(比临界值升高几十到几百倍)，血清肌酐(sCr)、尿酶等传统指标往往要在24-72小时后才显著升高，因此NGAL可用于AKI的早期诊断，同时也可作为AKI的预后指标之一；(2)NGAL可以预测慢性肾病(Chronickidneydisease,CKD)的进展，CKD患者血清、尿NGAL水平显著高于正常人群，并与肾小球滤过率(GFR)呈密切负相关，但是sCr与GFR的相关程度不及NGAL。因此，CKD患者NGAL水平不仅是优于sCr反映GFR下降的指标，更是评价CKD患者肾损伤程度的标志。I、Ⅱ型糖尿病患者血清、尿NGAL水平在尿微清蛋白(mAIb)升高前就已显著增加，因此，NGAL是诊断糖尿病并发肾损伤的敏感性指标。NGAL也是优于抗dsDNA抗体滴度的狼疮肾病诊断指标，及IgA肾病小管间隙损伤的早期诊断指标；(3)NGAL可以作为肾脏疾病的疗效评价指标。自2005年丹麦Bioproto公司推出NGALELISA商品试剂盒以来，美国R&DSystems公司随即推出了NGALELISA试剂盒，美国博适公司推出了用于血浆或全血NGAL检测的Triage分析仪(双抗体夹心免疫荧光层析法)，美国雅培公司推出了用于尿液NGAL检测的全自动免疫分析仪(化学发光法)。相比较这些依靠仪器检测和结果分析的检测方法，床旁检验(Pointcareoftesting，POCT)对NGAL的检测能更快速的提供检测结果，有利于临床诊断和治疗。POCT中侧向流免疫层析检测技术具有快速、简便、结果读取简单等特点，适合NGAL的临床检测，但其唯一的缺点就是定量困难。
技术实现思路
本技术旨在提供一种基于免疫层析技术的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量快速检测试剂盒，可适用于血清、血浆、全血及尿液样本中NGAL的半定量检测。该技术操作简便，样本无需任何处理即可直接检测，检测结果可提供半定量的浓度范围，便于临床参考，可广泛用于各级医疗机构的临床检测。本技术通过以下技术方案实现：一种基于中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量快速检测试剂盒，由卡盒、试纸条和比色卡三部分组成。所述卡盒包括盒盖和盒底两部分，卡盒内设置试纸条和比色卡，盒盖设置有检视窗、加样孔和比色窗、结果标识、加样孔标识、品名标识及信息记录栏，盒底中间设置有试纸条槽和比色卡槽；所述试纸条由基板上用双面胶依次黏贴的样品垫、标记抗体垫、反应膜、吸水垫组成，放置在试纸条槽内；所述比色卡设置有比色卡标识、色带及对应浓度说明，比色卡由比色卡插口插入卡盒中间的比色卡槽。所述比色卡由300克以上白色光面铜板纸构成，铜板纸上印有比色卡标注和色带及对应浓度说明。所述卡盒材料可由ABS树脂(丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物)或塑料(聚苯乙烯、聚乙烯、聚氯乙烯等)构成。所述基板材质可由PVC塑料(聚氯乙烯)或PS板构成。所述样品垫，其特征在于：针对不同的检测样品，样品垫采用不同组合，对血清或血浆样品，样品垫直接由玻璃纤维或无纺布组成；对全血样品，样品垫由玻璃纤维或无纺布和滤血样品垫组合构成，所述滤血样品垫由经抗人血红细胞单克隆抗体或多克隆抗体固化处理的玻璃纤维或无纺布构成；对尿液样品，样品垫由玻璃纤维或无纺布和过滤膜组合构成。所述标记抗体垫是将标记物标记的抗NGAL单克隆抗体或多克隆抗体固化在玻璃纤维或无纺布上构成，所述标记物为胶体金属颗粒或彩色乳胶颗粒。所述反应膜由硝酸纤维素膜构成，其上设有检测线(T线)和质控线(C线)，所述检测线由包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体或多克隆抗体构成，所述质控线由包被羊或兔抗鼠IgG多克隆抗体或检测线所包被多克隆抗体的二抗构成。所述吸水垫由吸水滤纸或滤油纸构成。本技术的创新效果主要体现在：(1)采用比色法对NGAL免疫层析检测结果进行半定量分析，估计出样本中NGAL的浓度范围，便于临床参考。此方案可以通过如下过程来实现：首先在试剂盒的敏感度范围(可检出最低浓度和最高浓度)内将NGAL质控品进行梯度稀释，用NGAL免疫层析检测试纸条检测，对不同浓度质控品，试纸条检测线(T线)会呈现不同的显色度，依据试纸条检测线(T线)对不同浓度质控品显色度，制备比色卡，比色卡上每条色带对应一个NGAL浓度。比色估计NGAL浓度范围，检测结束后将比色卡沿卡槽缓慢上下移动，将比色卡上的色带与检测线进行色度比较，与检测线色度接近的色带对应的浓度范围即为样品中NGAL浓度范围。(2)本技术实现的NGAL免疫层析半定量快速检测试剂盒对抗凝全血样本可直接检测，无需血浆或血清分离，其实现的原理在于，在样品垫增加一层滤血膜，滤血膜中固化有抗人血红细胞抗体(单抗或多克隆抗体)，检测时，当抗凝血全血进入滤血膜后血液中红细胞被抗体结合到滤血膜上，血浆渗入样品垫，完成检测。(3)本技术实现的NGAL免疫层析半定量快速检测试剂盒对浑浊的尿液样本可直接检测，无需离心分离处理，其实现的原理在于，在样品垫增加一层渗滤膜，渗滤膜可以过滤尿液中的细胞和大颗粒物质，避免其对检测结果的影响，检测时，当尿液进入渗滤膜后尿液细胞和大颗粒物质被过滤下来，过滤后的尿液进入样品垫，完成检测。本技术采用固相免疫检测技术，抗体蛋白被固化在NC膜或玻璃纤维或无纺布上，在这种固化干燥的状态下抗体蛋白较稳定，对环境温度要求不高，试剂盒可在常温下(4-30℃)保存，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量免疫层析检测试剂盒，其特征在于试剂盒由卡盒、试纸条和比色卡三部分组成；所述卡盒包括盒盖和盒底两部分，卡盒内设置试纸条和比色卡，盒盖设置有检视窗、加样孔和比色窗、结果标识、加样孔标识、品名标识及信息记录栏，盒底中间设置有试纸条槽和比色卡槽；所述试纸条由基板上用双面胶依次黏贴的样品垫、标记抗体垫、反应膜、吸水垫组成，放置在试纸条槽内；所述比色卡设置有比色卡标识、色带及对应浓度说明，比色卡由比色卡插口插入卡盒中间的比色卡槽。

【技术特征摘要】
1.一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量免疫层析检测试剂盒，其特征在于试剂盒由卡盒、试纸条和比色卡三部分组成；所述卡盒包括盒盖和盒底两部分，卡盒内设置试纸条和比色卡，盒盖设置有检视窗、加样孔和比色窗、结果标识、加样孔标识、品名标识及信息记录栏，盒底中间设置有试纸条槽和比色卡槽；所述试纸条由基板上用双面胶依次黏贴的样品垫、标记抗体垫、反应膜、吸水垫组成，放置在试纸条槽内；所述比色卡设置有比色卡标识、色带及对应浓度说明，比色卡由比色卡插口插入卡盒中间的比色卡槽。2.根据权利要求1所述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量免疫层析检测试剂盒，其特征在于：所述比色卡由300克以上白色光面铜板纸构成，铜板纸上设有比色卡标注和色带及对应浓度说明。3.根据权利要求1所述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量免疫层析检测试剂盒，其特征在于：针对不同的检测样品，样品垫采用不同组合，对血清或血浆样品，样品垫直接由玻璃纤...

【专利技术属性】
技术研发人员：李克生，杜惠芬，曾潮宁，许菲菲，
申请(专利权)人：兰州雅华生物技术有限公司，
类型：新型
国别省市：甘肃,62