本发明专利技术属于生物技术检测领域，具体涉及一种用于肾脏衰竭的早期预警、治疗过程和愈后监控的三联试剂盒，并进一步公开了其制备方法和应用。所述试剂卡以血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CysC)、中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白(NAGL)及C反应蛋白(CRP)为检测标志物。本发明专利技术三联试剂卡以NGAL-CysC-CRP三联抗体为标记物，可有效监测肾衰的风险，尤其对糖尿病人、交通事故发生者的急性肾衰监测起到了意想不到的效果，其诊断急性肾衰灵敏度高、特异性强，临床监测的准确率高达95％，使糖尿病人肾病的自我检测和监测成为可能，用于肾病的早期预警，可及时阻止病人的病情恶化，减轻病人的肾损伤程度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术检测领域，具体涉及一种用于肾脏衰竭的早期预警、治疗过程和愈后监控的三联试剂盒，并进一步公开了其制备方法和应用。
技术介绍
急性肾损伤(AKI)是急性肾衰竭的连续性过程，AKI广泛发生于糖尿病人、交通事故伤害、重症患者、大手术后患者，它按FIFLE标准分为风险、损伤、衰竭、肾功能丧失和终末期肾病。急性肾损伤尽早诊断有助于对病人实施保护性治疗，降低死亡率。现有技术中，临床急性肾损伤诊断的生物标志物是肌酐、尿素氮和尿量。肌酐是骨骼肌中肌酸到磷酸肌酸，并在肝脏中转化形成，并从肾小球滤过，其中少部分肌酐分泌入尿，肌酐不能在肾小管重吸收或在肾脏代谢。血清肌酐作为急性肾损伤的标志物的局限性主要体现在：第一，肌酐产生因年龄、性别、饮食、肌肉情况、药物及激烈运动差异明显，影响了其诊断的准确性；第二，肌酐分泌约占肌酐清除的10-40％，这将导致GFR的假性降低；第三，血清肌酐试验精确性可因假象而降低；第四，肌酐出现异常时，GFR减少大都已超过50％，并且需超过24小时才能检测到血肌酐浓度。这些因素都会导致以肌酐作为急性肾损伤的早期诊断标志存在严重的局限性。尿素氮是水溶性的、低分子量的蛋白质代谢产物。它的血浓度与GFR相反，部分因素可影响它的产生和清除，这就限制了它评估GFR的可靠性。尿素氮的产生是多变的，它的值可因循环血量、蛋白质摄入、胃肠道出血等的变化而改变。肾脏尿素氮清除率也是变化的；40-50％滤过的尿素氮在肾小管重吸收。所以，尿素氮是不太适合评估GFR的，因为浓度升高需时间累积，不能及时反映GFR变化而耽搁诊断。更重要的是，由于很多AKI病人并没有出现少尿，或者很多手术及ICU病人仅出现了少尿，但并没有出现急性肾损伤。因此，这些依赖传统的生物标志物(肌酐，尿素氮，尿量)来诊断AKI，多在损伤后几小时才出现异常(肌酐，尿素氮)，同时也缺乏特异性(尿量)，这些均会造成治疗上耽搁，这也是临床AKI治疗效果不佳的重要原因之一。鉴于现有临床上面临的这些问题，新的早期急性肾损伤的生物标志物已被逐步开发出来。包括人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)，半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CyC)，C反应蛋白(CRP)，均已在AKI的诊断中发挥重要作用。中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白(NGAL)是一种小分子量分泌型蛋白，由Kjeldsedn等人于1993年发现，是Lipocalin家族的新成员。生理条件下，NCAL少量合成于骨髓中性粒细胞和肾小管等多个系统的上皮细胞，炎症反应和恶性肿瘤可诱使其在多组织(如子宫、前列腺、唾液腺、肺、肾、气道及消化道上皮等)中大量生成，几个小时内就可以达到峰值，产生速度明显快于其它相关生物标记物。NGAL在急性肾小管损伤早期就已经表达，反映肾小管功能紊乱，它浓度的升高提示肾小管损伤发生，而传统指标血肌酐升高则需24小时以上。NGAL也是目前新型AKI诊断的首选指标物。胱抑素C也称半胱氨酸蛋白酶抑制剂C，CysC分子量为13KD，由120个氨基酸组成，它编码的基因是存在于机体所有有核细胞中的一种管家基因，因此人体几乎所有的有核细胞均可以产生CysC，且产生率恒定。生理条件下，CysC抑制内源性半胱氨酸蛋白酶的活性，CysC是一种低分子量蛋白质，能经肾小球滤过而被清除，在肾小球近曲小管重吸收并被完全分解代谢，且肾脏是唯一清除CysC的器官，机体产生CysC的速率也相当恒定。研究证明，CysC是一种比较接近理想的反映肾小球滤过功能的内源性标志物。当肾小球出现轻微损伤时，CysC在血液中的浓度会迅速升高。CysC能灵敏的检测到肾小球滤过功能的改变，对肾功能早期损坏进行诊断。C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)是由肝细胞所合成，具有激活补体和促进粒细胞及吞噬细胞的吞噬作用。CRP是第一个被认为是急性时相反应蛋白，正常情况下含量极微量，在AKI、急性创伤和感染时其血浓度急剧升高。CRP浓度升高可反映体内炎症处于急性活动期,如急性炎症、组织损伤和AKI等疾病，说明有进行性组织坏死或并发感染的存在，CRP是临床上AKI最常用的急性时相反应指标。现有技术中已经开发出了诸如以NGAL、CysC或者CRP为单一指标的胶体金试纸条或免疫荧光试纸条，意在通过检测NGAL、CysC或者CRP的指标变化对肾衰的发生、发展进行监测。但是临床实践证明，上述单一指标的检测试剂，由于临床各种难于预测的情况而存在着准确性欠佳的问题，依然难于保证肾衰的快速及准确的检测，不能全面地、特异性地预警急性肾衰的发生、发展过程。而且目前以NGAL、CysC、CRP为目标物产品均以不同形式在临床上应用，制作原理及操作程序各不相同，兼容性比较差，很难在短时间内同时、快速地检测出三者的结果，极大地影响了对急性肾衰患者的准确诊断，从而造成很多病人因延误救治而病情恶化或导致死亡。因此，目前临床上急需开发一种可全面、快速、简便的诊断、监测肾衰的发生、发展的试剂，可随时监控发生肾衰的风险，避免因病情的延误而发生严重的后果。
技术实现思路
为此，本专利技术所要解决的技术问题在于现有技术中用于检测肾衰竭的试剂由于检测指标单一而导致检测结果不稳定的问题，进而提供一种可全面、快速、简便的诊断、监测肾衰的发生、发展的试剂盒，并进一步公开其制备方法及应用。为解决上述技术问题，本专利技术所述的快速检测肾衰的三联试剂卡，所述试剂卡以血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CysC)、中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白(NAGL)及C反应蛋白(CRP)为检测标志物。进一步的，所述试剂卡包括样品区、抗体结合区，检测控制区及吸水区；所述抗体结合区含有CysC、NGAL、CRP的特异性抗体，所述检测控制区含有分别与CysC、NGAL、CRP相对应的单克隆抗体、多克隆抗体，或相应的抗原。更优的，所述试剂卡包括：底板以及沿所述底板的长度方向上依次粘附在所述底板上的样品垫、结合垫、抗体承载膜和吸样垫，且所述样品垫、结合垫、抗体承载膜和吸样垫之间，依次与且仅与相邻部位相接触且部分重叠；所述抗体承载膜粘附于所述底板的中间部位，其上顺次设置有第一检测线、第二检测线、第三检测线和质控线，所述第一检测线靠近所述结合垫，所述质控线靠近所述吸样垫；所述结合垫上喷涂有CysC、NGAL、CRP三种特异性抗体；所述第一检测线、第二检测线、第三检本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种快速检测肾衰的三联试剂卡，其特征在于，所述试剂卡以血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CysC)、中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白(NAGL)及C反应蛋白(CRP)为检测标志物。
【技术特征摘要】
1.一种快速检测肾衰的三联试剂卡，其特征在于，所述试剂卡以血清
半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CysC)、中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白
(NAGL)及C反应蛋白(CRP)为检测标志物。
2.根据权利要求1所述的快速检测肾衰的三联试剂卡，其特征在于，
所述试剂卡包括样品区、抗体结合区，检测控制区及吸水区；所述抗体结
合区含有CysC、NGAL、CRP的特异性抗体，所述检测控制区含有分别与
CysC、NGAL、CRP相对应的单克隆抗体、多克隆抗体，或相应的抗原。
3.根据权利要求2所述的快速检测肾衰的三联试剂卡，其特征在于，
所述试剂卡包括：
底板(1)以及沿所述底板(1)的长度方向上依次粘附在所述底板上
的样品垫(2)、结合垫(3)、抗体承载膜(4)和吸样垫(9)，且所述样品
垫(2)、结合垫(3)、抗体承载膜(4)和吸样垫(9)之间，依次与且仅
与相邻部位相接触且部分重叠；
所述抗体承载膜(4)粘附于所述底板(1)的中间部位，其上顺次设
置有第一检测线(5)、第二检测线(6)、第三检测线(7)和质控线(8)，
所述第一检测线(5)靠近所述结合垫(3)，所述质控线(8)靠近所述吸
样垫(9)；
所述结合垫(3)上喷涂有CysC、NGAL、CRP三种特异性抗体；
所述第一检测线(5)、第二检测线(6)、第三检测线(7)分别彼此独
立的由与CysC、NGAL、CRP相对应的单克隆抗体、多克隆抗体或相应的
抗原涂层形成，且彼此不同。
4.根据权利要求3所述的快速检测肾衰的三联试剂卡，其特征在于，
所述第一检测线(5)、第二检测线(6)及第三检测线(7)相间隔平
行设置，或者彼此不重叠的并列设置。
5.根据权利要求3-4任一所述的快速检测肾衰的三联试剂卡，其特征
在于，所述质控线(8)由抗鼠IgG抗体涂层形成。
6.根据权利要求3-5任一所述的快速检测肾衰的三联试剂卡，其特征
在于，制备所述结合垫(3)的载体包括胶体金纳米颗粒、荧光胶乳、磁珠、
量子点或稀土元素。
7.根据权利要求3-6任一所述的快速检测肾...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡文波，李静，
申请(专利权)人：江苏金标世纪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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