一种腺病毒抗原制备方法及利用该抗原制备的检测腺病毒抗体的快速检测试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种腺病毒基因工程表达人工抗原；制备该抗原的方法，该方法包括人工合成优化的腺病毒五邻体基因序列，构建原核表达载体，大肠杆菌表达腺病毒五邻体抗原，采用透析法、梯度稀释法和凝胶层析法复性包涵体，获得具有三维结构和免疫活性的重组腺病毒五邻体抗原；一种检测腺病毒抗体的快速检测方法，该方法包括应用腺病毒五邻体抗原；一种用于腺病毒抗体检测的快速检测试剂盒，该试剂盒包含腺病毒五邻体抗原，包括检测装置上具备滤血膜，可以直接用来全血检测。本发明专利技术提供了一种腺病毒抗原，该抗原具有高度的特异性；本发明专利技术提供了制备该抗原的方法，快速测定腺病毒抗体的方法，以及用于快速测定腺病毒抗体的试剂盒。

Preparation method of adenovirus antigen and rapid detection kit for detection of adenovirus antibody by using the antigen

The present invention relates to artificial antigen expression of an adenovirus gene engineering; the preparation method of the antigen, adenovirus five neighbor gene sequences of this method include synthetic optimization, construction of prokaryotic expression vector, recombinant adenovirus five neighbor antigen of Escherichia coli, by dialysis method, gradient dilution method and gel chromatography renaturation of inclusion body, obtained with a three-dimensional structure and immune activity of recombinant adenovirus five neighbor antigen; rapid detection method for detection of adenovirus antibody, the method includes the application of adenovirus five neighbor antigen; a kit for rapid detection of adenovirus antibody, the kit contains five adenovirus penton antigen. Including blood filtration film detection device, can be directly used for blood test. The present invention provides an adenovirus antigen, which has a high degree of specificity; the present invention provides a method for preparing the antigen, a method for rapidly detecting adenovirus antibodies, and a kit for rapidly determining adenovirus antibodies.

【技术实现步骤摘要】
一种腺病毒抗原制备方法及利用该抗原制备的检测腺病毒抗体的快速检测试剂盒
本专利技术属于临床医学检测领域，涉及免疫层析检测技术，具体涉及一种用于诊断腺病毒感染的腺病毒抗原，制备该抗原的方法，用该抗原检测腺病毒抗体的快速检测试剂盒。
技术介绍
腺病毒(Adenovirus,Adv)是世界各地病毒性肺炎的主要病原之一，儿童或青年人感染腺病毒仅引起上呼吸道疾病，但是在婴幼儿中可引起严重的急性腺病毒肺炎。腺病毒性肺炎首先于1958年由Chang等报道，后续的研究发现引起婴幼儿腺病毒性肺炎流行的病原体主要是腺病毒3、7型，轻症及大龄儿童预后较好，重症感染和腺病毒性肺炎预后不良的病死率较高。腺病毒是一种没有包膜的直径为70～90nm的颗粒，由252个壳粒呈廿面体排列构成。每个壳粒的直径为7～9nm。衣壳里是线状双链DNA分子，约含35000bp。腺病毒可感染呼吸道、胃肠道、尿道和膀胱、眼、肝脏等器官。已知的腺病毒有6个亚型（A～F）和55个不同的血清型（按病毒基因组分型）。已知约20余种血清型可感染人类。腺病毒肺炎多发于6月-2岁小儿，多为3型和7型腺病毒感染。腺病毒肺炎感染的潜伏期为2-14天，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种腺病毒抗原，它是一种采用基因工程技术表达，包涵体复性得到的大小为67.6 kDa的重组抗原。

【技术特征摘要】
1.一种腺病毒抗原，它是一种采用基因工程技术表达，包涵体复性得到的大小为67.6kDa的重组抗原。2.一种腺病毒五邻体抗原的复性与纯化方法，其特征在于：室温条件下用10mmol/L，pH7.2的PBS缓冲液对腺病毒五邻体重组表达蛋白8M尿素的溶解液进行梯度透析稀释，按溶液中尿素浓度分别为6mol/L、4mol/L、3mol/L控制稀释梯度，每个梯度稀释的时间分别为3-4h，将完成稀释复性的含3mol/L尿素的溶解液4℃放置24h，稀释复性的溶液10000r/min离心除去沉淀物质，上清液通过以S-300为介质的凝胶层析分离法进行纯化，从而获得重组腺病毒五邻体抗原，所得重组腺病毒五邻体抗原组分进行SDS-PAGE，以确定蛋白质的分子量及蛋白纯度，电泳条件，浓缩胶浓度为5%，分离胶浓度为12%，蛋白染色为考马斯亮蓝染色法，考马斯亮蓝R-250染色液染色3h，乙酸-乙醇脱色液脱色至背景无色为止，主蛋白条带出现在67.6kDa处，蛋白纯度达到95%以上。3.一种腺病毒抗体快速检测方法，包括应用权利要求1中的腺病毒抗原固定到硝酸纤维素膜，胶体金属颗粒或彩色胶乳颗粒标记抗体（二抗）接触，若待测样品中存在腺病毒抗体，则腺病毒抗体与标记二...

【专利技术属性】
技术研发人员：李克生，杜惠芬，曾潮宁，许菲菲，范丽赟，
申请(专利权)人：兰州雅华生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：甘肃,62