一种螺旋甾碱烷型糖苷生物碱及其制备方法与用途技术

本发明专利技术提供了一种螺旋甾碱烷型糖苷生物碱(3β,5α,22α,25R)‑螺旋甾碱烷‑3‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖基‑(1→2)‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖基‑(1→4)‑β‑D‑吡喃半乳糖苷及其制备方法与用途，该螺旋甾碱烷型糖苷生物碱对人肺腺癌细胞A549、人大细胞肺癌细胞H460和人肺鳞癌细胞SK‑MES‑1均具有抑制作用，且对A549细胞的半抑制浓度为19.22μg/ml，对H460细胞的半抑制浓度为80.03μg/ml，对SK‑MES‑1细胞的半抑制浓度为54.20μg/ml，可见本发明专利技术制备得到的(3β,5α,22α,25R)‑螺旋甾碱烷‑3‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖基‑(1→2)‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖基‑(1→4)‑β‑D‑吡喃半乳糖苷及其制剂可用于治疗非小细胞肺癌。

Spiral steroidal alkali alkyl type glucoside alkaloid and preparation method and application thereof

\u672c\u53d1\u660e\u63d0\u4f9b\u4e86\u4e00\u79cd\u87ba\u65cb\u753e\u78b1\u70f7\u578b\u7cd6\u82f7\u751f\u7269\u78b1(3\u03b2,5\u03b1,22\u03b1,25R)\u2011\u87ba\u65cb\u753e\u78b1\u70f7\u20113\u2011O\u2011\u03b2\u2011D\u2011\u5421\u5583\u8461\u8404\u7cd6\u57fa\u2011(1\u21922)\u2011O\u2011\u03b2\u2011D\u2011\u5421\u5583\u8461\u8404\u7cd6\u57fa\u2011(1\u21924)\u2011\u03b2\u2011D\u2011\u5421\u5583\u534a\u4e73\u7cd6\u82f7\u53ca\u5176\u5236\u5907\u65b9\u6cd5\u4e0e\u7528\u9014\uff0c\u8be5\u87ba\u65cb\u753e\u78b1\u70f7\u578b\u7cd6\u82f7\u751f\u7269\u78b1\u5bf9\u4eba\u80ba\u817a\u764c\u7ec6\u80deA549\u3001\u4eba\u5927\u7ec6\u80de\u80ba\u764c\u7ec6\u80deH460\u548c\u4eba\u80ba\u9cde\u764c\u7ec6\u80deSK\u2011MES\u20111\u5747\u5177\u6709\u6291\u5236\u4f5c\u7528\uff0c\u4e14\u5bf9A549\u7ec6\u80de\u7684\u534a\u6291\u5236\u6d53\u5ea6\u4e3a19.22\u03bcg/ml\uff0c\u5bf9H460\u7ec6\u80de\u7684\u534a\u6291\u5236\u6d53\u5ea6\u4e3a80.03\u03bcg/ml\uff0c\u5bf9SK\u2011MES\u20111\u7ec6\u80de\u7684\u534a\u6291\u5236\u6d53\u5ea6\u4e3a54.20\u03bcg/ml\uff0c\u53ef\u89c1\u672c\u53d1\u660e\u5236\u5907\u5f97\u5230\u7684(3\u03b2,5\u03b1,22\u03b1,25R)\u2011\u87ba\u65cb\u753e\u78b1\u70f7\u20113\u2011O\u2011\u03b2\u2011D\u2011\u5421\u5583\u8461\u8404\u7cd6\u57fa\u2011(1\u21922)\u2011O\u2011\u03b2\u2011D\u2011\u5421\u5583\u8461\u8404\u7cd6\u57fa\u2011(1\u21924)\u2011\u03b2\u2011D\u2011\u5421\u5583\u534a\u4e73\u7cd6\u82f7\u53ca\u5176\u5236\u5242 Can be used in the treatment of non-small cell lung cancer.

【技术实现步骤摘要】
一种螺旋甾碱烷型糖苷生物碱及其制备方法与用途
本专利技术属于糖苷生物碱制备方法及药物用途
，具体涉及一种螺旋甾碱烷型糖苷生物碱及其制备方法与用途。
技术介绍
糖苷生物碱主要分布在茄科及百合科的植物体内，由疏水性的苷元和亲水性的寡糖链构成，其苷元包括螺旋甾碱烷、茄次碱烷和其他甾体衍生物三种，寡糖链由3～4个单糖组成，是一种甾体皂苷。植物合成糖苷生物碱主要是为了防御微生物、动物及昆虫的侵袭，因此，糖苷生物碱具有一定的毒性，但与此同时，它还具有降低胆固醇和高血压、消炎、活血镇痛、抗过敏、增强机体免疫力、抗病原微生物等多种生理活性，具有潜在的药用价值。茄科和百合科的植物在自然界中广泛存在，如白英、马铃薯和番茄等植物，具有很强的经济价值，中药白英始载于《神农百草经》，其味甘，性寒，具有清热、解毒、祛风、化瘀等功效，研究表明白英的主要化学成分为糖苷生物碱，因此，研究从中药白英中提取新型的糖苷生物碱具有重要意义。鉴于糖苷生物碱的上述药物功效，医药界对其非常重视，中国专利文献CN101450144A公开了一种白英总皂苷提取物及其制备方法和用途，该提取物为蜀羊泉苷B、蜀羊泉苷C、δ-苦茄碱和薯蓣皂苷(结构式如下)中的一种或多种，上述白英总皂苷提取物可用于治疗胃炎、胃和十二指肠溃疡、胃癌和银屑病等疾病，且具有很好的治疗效果。众所周知，白英总皂苷提取物是一种混合物，其包括了多种结构的化合物，但并不能确定每种化合物均具有相同或相应的功效，即并不能完全确认上述文献中公开的白英总皂苷提取物中包括的化合物对治疗胃炎、胃和十二指肠溃疡、胃癌和银屑病等疾病均能起到良好的协同作用，这也是中药提取物具有不可预见的副作用的原因，因此，对药用植物提取物进行进一步的精制和研究，将多种复杂的化合物进行分离和提取，并对其功效进行确认具有重要的意义，为此，如何对药用植物提取物进行有效的分离并得到具有潜在药用价值的化合物是所有医药工作者所必须面对的课题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是现有技术中药用植物提取物成分复杂，其所有成分的功效及相互影响不能完全确认的缺陷，从而提供一种单一组分的化合物螺旋甾碱烷型糖苷生物碱，进而提供其制备方法与其在制备治疗非小细胞肺癌药物中的用途。为此，本专利技术实现上述目的的技术方案为：本专利技术提供一种螺旋甾碱烷型糖苷生物碱，具有式(I)所示结构，本专利技术还提供一种上述螺旋甾碱烷型糖苷生物碱的制备方法，包括如下步骤：(1)取白英药材加入醇溶液中进行醇提，将获得的醇提取液进行精制，即得白英总碱样品，备用；(2)将步骤(1)制备得到的白英总碱样品加入醇溶液中加热溶解，以薄层层析硅胶拌样，然后上样于硅胶层析柱中进行层析分离，以体积比为(2～3):1的乙酸乙酯和乙醇水溶液形成的洗脱剂进行洗脱，所述乙醇水溶液的体积浓度为93％～97％，以盐酸水溶液改良的碘化铋钾试液为显色剂，以薄层色谱进行检测，合并相同流份，得到极性不同的两种组分；(3)将步骤(2)得到的两种组分中极性小的组分用二甲基酰胺溶解，0.45um滤膜过滤，然后采用高效液相色谱法分离纯化，色谱条件如下：C18液相色谱柱；以乙腈为流动相A，1％TFA水溶液为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0～10min，流动相A：流动相B的体积比为24％～26％：76％～74％→29％～31％：71％～69％；控制流动相流速为25～35mL/min；控制柱温为20-30℃；控制进样体积为0.5～1.5mL；通过质谱检测器检测成分，收集相对分子质量为901的成分，得到如式(I)所示结构的螺旋甾碱烷型糖苷生物碱。在所述步骤(1)中，制备白英总碱样品的具体方法为：将白英干燥全草用体积浓度为70％的乙醇水溶液回流提取，过滤，将滤液浓缩至50℃相对密度为1.05的浸膏，加入蒸馏水分散，过滤，取滤液加至D151大孔吸附树脂柱，依次用2～4倍柱体积的蒸馏水和2～4倍柱体积的体积浓度为95％乙醇水溶液洗脱，弃去洗脱液，然后用3～5倍柱体积的体积浓度为6‰的盐酸乙醇水溶液洗脱，所述盐酸乙醇水溶液中乙醇的体积浓度为95％，收集盐酸乙醇洗脱液，用氨水中和至中性，过滤，将滤液浓缩至干，用蒸馏水分散，将分散后的药液加至AB-8大孔吸附树脂，用6～10倍柱体积的蒸馏水洗脱，弃去洗脱液，然后用3～5倍柱体积的体积浓度为95％乙醇水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得白英总碱。在所述步骤(2)中，称取白英总碱样品30～40重量份，加入300-1000体积份的体积浓度为93～97％的乙醇水溶液中在温度为80～100℃下溶解，然后加入10～20重量份的薄层层析硅胶混合均匀，上样于加入780～820重量份的薄层层析硅胶的硅胶层析柱中进行层析分离；所述重量份与体积份的关系为g/mL。在所述步骤(2)中，以体积比为2.5:1的乙酸乙酯和乙醇水溶液形成的洗脱剂进行洗脱，所述乙醇水溶液的体积浓度为95％。在所述步骤(2)中，所述盐酸水溶液改良碘化铋钾试液的具体方法为：称取碱式硝酸铋0.8～0.9重量份，依次加入9～11体积份的冰醋酸、39～41体积份的水和19～21体积份的碘化钾溶液，混合均匀即得碘化铋钾试液；向所述碘化铋钾试液中加入0.6mol/L的盐酸水溶液，所述碘化铋钾试液与所述盐酸水溶液的体积比为1:2，即得所述盐酸水溶液改良的碘化铋钾试液；所述重量份与体积份的关系为g/mL。在所述步骤(3)中，流动相A：流动相B的体积比为25％：75％→30％：70％。本专利技术还提供包括上述螺旋甾碱烷型糖苷生物碱的制剂，或者包括上述制备方法制备得到的螺旋甾碱烷型糖苷生物碱的制剂，以所述螺旋甾碱烷型糖苷生物碱为有效成分，加入常规辅料，按照常规工艺制成临床上可接受的制剂。所述制剂包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂、散剂、丸剂、酊剂、酒剂、煎膏剂、锭剂或合剂。本专利技术还提供上述螺旋甾碱烷型糖苷生物碱、上述制备方法制备得到的螺旋甾碱烷型糖苷生物碱、上述螺旋甾碱烷型糖苷生物碱的制剂在制备治疗非小细胞肺癌药物中的用途。与现有技术相比，本专利技术的上述技术方案具有如下优点：1、本专利技术所述的螺旋甾碱烷型糖苷生物碱，其为一种单一组分即化学命名为(3β,5α,22α,25R)-螺旋甾碱烷-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷，其对人肺腺癌细胞A549，人大细胞肺癌细胞H460和人肺鳞癌细胞SK-MES-1均具有抑制作用，且本专利技术制备得到的螺旋甾碱烷型糖苷生物碱对A549细胞的半抑制浓度为19.22μg/ml，对H460细胞的半抑制浓度为80.03μg/ml，对SK-MES-1细胞的半抑制浓度为54.20μg/ml，可见本专利技术所述的螺旋甾碱烷型糖苷生物碱组分单一，功能确切，且可用于治疗非小细胞肺癌。2、本专利技术所述的螺旋甾碱烷型糖苷生物碱的制备方法，由于糖苷生物碱含有极性较大的糖链结构和极性较小的甾体单元，使得糖苷生物碱不溶于水、丙酮和乙酸乙酯等大多数有机溶剂，只能溶于甲醇、乙醇等少数有机溶剂，糖苷生物碱结构中含有氮原子，表现出一定的弱碱性，因此可在酸性溶液中成盐溶解，在碱性条件下沉淀析出，因此本专利技术采用盐酸乙醇-氨水沉淀法精制白英总碱，然后应用柱层析，以薄层色谱进行检测，合并相同流份，得到极性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种螺旋甾碱烷型糖苷生物碱，其特征在于，具有式(I)所示结构，

【技术特征摘要】
1.一种螺旋甾碱烷型糖苷生物碱，其特征在于，具有式(I)所示结构，2.一种权利要求1所述螺旋甾碱烷型糖苷生物碱的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取白英药材加入醇溶液中进行醇提，将获得的醇提取液进行精制，即得白英总碱样品，备用；(2)将步骤(1)制备得到的白英总碱样品加入醇溶液中加热溶解，以薄层层析硅胶拌样，然后上样于硅胶层析柱中进行层析分离，以体积比为(2～3):1的乙酸乙酯和乙醇水溶液形成的洗脱剂进行洗脱，所述乙醇水溶液的体积浓度为93％～97％，以盐酸水溶液改良的碘化铋钾试液为显色剂，以薄层色谱进行检测，合并相同流份，得到极性不同的两种组分；(3)将步骤(2)得到的两种组分中极性小的组分用二甲基酰胺溶解，0.45um滤膜过滤，然后采用高效液相色谱法分离纯化，色谱条件如下：C18液相色谱柱；以乙腈为流动相A，1％TFA水溶液为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0～10min，流动相A：流动相B的体积比为24％～26％：76％～74％→29％～31％：71％～69％；控制流动相流速为25～35mL/min；控制柱温为20-30℃；控制进样体积为0.5～1.5mL；通过质谱检测器检测成分，收集相对分子质量为901的成分，得到如式(I)所示结构的螺旋甾碱烷型糖苷生物碱。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤(1)中，制备白英总碱样品的具体方法为：将白英干燥全草用体积浓度为70％的乙醇水溶液回流提取，过滤，将滤液浓缩至50℃相对密度为1.05的浸膏，加入蒸馏水分散，过滤，取滤液加至D151大孔吸附树脂柱，依次用2～4倍柱体积的蒸馏水和2～4倍柱体积的体积浓度为95％乙醇水溶液洗脱，弃去洗脱液，然后用3～5倍柱体积的体积浓度为6‰的盐酸乙醇水溶液洗脱，所述盐酸乙醇水溶液中乙醇的体积浓度为95％，收集盐酸乙醇洗脱液，用氨水中和至中性，过滤，将滤液浓缩至干，用蒸馏水分散，将分散后的药液加至AB-8大孔吸附树脂，用6～10倍柱体积的蒸馏水洗脱，弃去洗脱液，然后用3～5倍柱体...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建农，韩林，
申请(专利权)人：中国中医科学院西苑医院，
类型：发明
国别省市：北京,11