一种基于血清miRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种基于血清miRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒及其用途，所述试剂盒包括RNA提取缓冲液，加Poly(A)反应液，逆转录反应液，血清miRNA上游引物组合、内参上游引物、通用下游引物以及荧光定量RT‑PCR反应液；其中，所述血清miRNA组合物由4个差异表达的血清miRNAs组成：hsa‑miR‑21‑5p、hsa‑miR‑92a‑3p、hsa‑miR‑125a‑5p和hsa‑miR‑148b‑3p，其序列分别为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示；所述内参为hsa‑miR‑16，序列为SEQ ID NO:5所示。本发明专利技术的试剂盒对治愈肺结核病检测的灵敏度65.38％，特异性80.77％，特异性强、灵敏度高，并具有较高的准确性，且操作简便，效率高，样本状态受限小，优于目前临床所采用的痰培养，为肺结核病的疗效评价提供了一种新的评估方法。

Pulmonary tuberculosis curative effect evaluation kit based on serum miRNA composition and use thereof

The invention discloses a kit for the curative effect of pulmonary tuberculosis and the use of evaluation based on the composition of serum miRNA, the kit includes RNA extraction buffer, Poly (A) reaction liquid, reverse reaction liquid, serum miRNA upstream primers, primers and universal reference upstream downstream primers and fluorescent quantitative RT PCR reaction liquid; among them, the composition of serum miRNAs serum miRNA expression by 4 different components: HSA miR 21 5p, HSA miR 92a 3P, HSA miR 125A 5p and HSA miR 148b 3P, the sequences were SEQ NO:1, SEQ ID ID NO:2 SEQ, ID NO:3 and SEQ ID NO:4 shows; the reference to HSA miR 16, as shown in SEQ ID sequence NO:5. 65.38% the sensitivity of the kit of the invention to cure tuberculosis detection, 80.77% specificity, strong specificity, high sensitivity, and has high accuracy and simple operation, high efficiency, small sample state constraints, better than the clinical use of sputum culture, a new evaluation method for the curative effect of pulmonary tuberculosis disease evaluation.

【技术实现步骤摘要】
一种基于血清miRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒及其用途
本专利技术属于疾病疗效评价领域，特别涉及一种基于血清miRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒及其用途。
技术介绍
肺结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性肺部感染性疾病，严重威胁人类健康，在中国的流行形势十分严峻。目前我国尚无明确的肺结核病疗效评价指标，导致14％的出院患者尚未完全治愈；也导致另一部分患者过度治疗，造成药物毒副反应增加，经济负担加重，医药资源浪费等。目前，对肺结核病的疗效评价主要通过临床医生的经验判断和痰培养实验。然而通过胸部X片/CT影像学改变等经验判断主观性太强，容易误诊；痰培养检查又耗时太长，需要4-8周，分辨功效差，特异性仅为57.8％。因此，亟需建立一种敏感、高效、准确的肺结核疗效评价新判定方法。miRNAs不易在血液中被酶降解，且具有组织和细胞特异性，能够用于疾病分子诊断和预后预测，适合作为疾病的候选检测标志物。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提出一种基于血清miRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒及其用途，该试剂盒可以高效、准确的评价肺结核病患者的治疗效果，特异性强、敏感性高。基于上述本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于血清miRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒，其特征在于，包括RNA提取缓冲液，加Poly(A)反应液，逆转录反应液，血清miRNA上游引物组合、内参上游引物、通用下游引物以及荧光定量RT‑PCR反应液；其中，所述血清miRNA组合物由4个差异表达的血清miRNAs组成，这4个血清miRNAs的名称和序列分别如下所示：hsa‑miR‑21‑5p：UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA，其为SEQ ID NO:1序列；hsa‑miR‑92a‑3p：UAUUGCACUUGUCCCGGCCUGU，其为SEQ ID NO:2序列；hsa‑miR‑125a‑5p：UCCCUGAGACCCU...

【技术特征摘要】
1.一种基于血清miRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒，其特征在于，包括RNA提取缓冲液，加Poly(A)反应液，逆转录反应液，血清miRNA上游引物组合、内参上游引物、通用下游引物以及荧光定量RT-PCR反应液；其中，所述血清miRNA组合物由4个差异表达的血清miRNAs组成，这4个血清miRNAs的名称和序列分别如下所示：hsa-miR-21-5p：UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA，其为SEQIDNO:1序列；hsa-miR-92a-3p：UAUUGCACUUGUCCCGGCCUGU，其为SEQIDNO:2序列；hsa-miR-125a-5p：UCCCUGAGACCCUUUAACCUGUGA，其为SEQIDNO:3序列；hsa-miR-148b-3p：UCAGUGCAUCACAGAACUUUGU，其为SEQIDNO:4序列；所述内参为hsa-miR-16，序列为：UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG，其为SEQIDNO:5序列。2.根据权利要求1所述的基于血清miRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒，其特征在于，所述RNA提取缓冲液包括：BIOZOL、氯仿、无水乙醇、浓度为75％的乙醇溶液和RNAase-free水；所述加Poly(A)反应液包括：总RNA、5U/μL的大肠杆菌Poly(A)聚合酶、10×Poly(A)聚合酶缓冲液、5×rATP溶液和RNase-Free水；所述逆转录反应液包括：Poly(A)反应液、10×通用逆转录引物、10×通用逆转录引物缓冲液、2.5mM的dNTPs、40U/μL的RNase抑制剂、反转录酶和RNase-Free水；所述血清miRNA上游引物组合由hsa-miR-21-5p的上游引物、hsa-miR-92a-3p的上游引物、hsa-miR-125a-5p的上游引物和hsa-miR-148b-3p的上游引物组成；所述荧光定量RT-PCR反应液包括：2×miRcutemiRNA预混物、目的上游引物、通用下游引物、50×ROX染液、cDNA模板和RNase-Free水；其中所述目的上游引物为hsa-miR-21-5p的上游引物、hsa-miR-92a-3p的上游引物、hsa-miR-125a-5p的上游引物或hsa-miR-148b-3p的上游引物。3.根据权利要求1所述的基于血清miRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒，其特征在于，加Poly(A)反应液体系以20.0μL计为：总RNA：0.1～13.6μL；5U/μL的大肠杆菌Poly(A)聚合酶：0.4μL；10×Poly(A)聚合酶缓冲液：2.0μL；5×rATP溶液：4.0μL；RNase-Free水：补足至20.0μL；其中，总RNA在该反应体系中浓度为2.0μg。4.根据权利要求1所述的基于血清miRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒，其特征在于，逆转录反应液体系以20.0μL计为：Poly(A)反应液：2.0μL；10×通用逆转录引物：2.0μL；10×通用逆转录引物缓冲液：2.0μL...

【专利技术属性】
技术研发人员：李继承，王冲，
申请(专利权)人：李继承，
类型：发明
国别省市：浙江,33