一种凝血因子Ⅹ激活剂效价测定方法技术

本发明专利技术提供了一种凝血因子Ⅹ激活剂效价的测定方法，本发明专利技术的方法依据单位时间内生成ρNA的物质的量计算FⅩA的活性。本发明专利技术的方法不使用FⅩA和FⅩa标准品间接计算待测品效价，减少了测试过程中误差，准确、方便、快捷,本发明专利技术的方法具有较好的重复性、精密度、耐用性和线性，能够稳定的测定FⅩA的效价。

A coagulation factor X activator potency determination method

The present invention provides a method for the determination of coagulation factor XIII activation potency, calculation of F x A P NA material production method according to the invention of the amount of activity per unit time. The method of the invention does not use the F x A and F x a standard indirect calculation of potency test, reduce the error in the process of testing, accurate, convenient and fast, the method of the invention has good repeatability, precision, durability and linear, stable titer determination of F x A.

【技术实现步骤摘要】
一种凝血因子Ⅹ激活剂效价测定方法
本专利技术属于生物制品、药物分析
，具体地涉及一种凝血因子Ⅹ激活剂的效价测定方法。
技术介绍
蛇毒中含有多种能够影响哺乳动物凝血系统的酶类，这些酶类与凝血机制级联放大反应中的各个凝血因子之间有比较严格的专一性作用，其中凝血因子Ⅹ激活剂是一种能够直接作用于凝血因子Ⅹ的具有蛋白水解酶特性的酶类，在蝰亚科、蝮亚科、眼镜蛇科等蛇毒中分布广泛。人体正常的血液系统处于促凝-抗凝之间的动态平衡，当机体受到外源伤害或疾病干扰时，机体的凝血平衡被打破，启动凝血瀑布级联放大反应以抵抗外来因素的影响。然而无论是外源凝血途径还是内源凝血途径，最终均是凝血因子Ⅹ（CoagulationFactorⅩ，FⅩ）被激活为活化状态，即活化的凝血因子Ⅹ（CoagulationFactorⅩActivated，FⅩa），FⅩa激活凝血酶原生成凝血酶，发挥凝血作用。我公司自巴西矛头蝮蛇蛇毒中分离得到凝血因子Ⅹ激活剂（CoagulationFactorⅩActivator，FⅩA），其为分子量为79000Da的单一组分的糖蛋白，含有一条重链和两条轻链，具有钙离子依赖性。体外研究表明，在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种凝血因子Ⅹ激活剂效价测定方法，其特征在于：所述方法包括：1）将凝血因子Ⅹ用缓冲溶液A稀释，得到凝血因子X的浓度为1.0U/ml～2.0U/ml的溶液1；2）将凝血因子Ⅹ激活剂用缓冲溶液B稀释，制成溶液2；3）将生色底物用去离子水溶解，得到浓度为1.5mg/ml～3.0mg/ml的溶液3；4）将溶液1、溶液2、缓冲溶液C混匀，置37℃水浴中保温8~12分钟，加入缓冲溶液D和溶液3，混匀，405nm波长下测定第0、1、2、3分钟光吸收值，以缓冲溶液B代替溶液2，同法操作，作为空白对照；所述溶液1、溶液2、溶液3、缓冲溶液C和缓冲溶液D的体积比为1∶1∶1∶1∶1；5）按计算公式计算对硝基苯胺浓...

【技术特征摘要】
1.一种凝血因子Ⅹ激活剂效价测定方法，其特征在于：所述方法包括：1）将凝血因子Ⅹ用缓冲溶液A稀释，得到凝血因子X的浓度为1.0U/ml～2.0U/ml的溶液1；2）将凝血因子Ⅹ激活剂用缓冲溶液B稀释，制成溶液2；3）将生色底物用去离子水溶解，得到浓度为1.5mg/ml～3.0mg/ml的溶液3；4）将溶液1、溶液2、缓冲溶液C混匀，置37℃水浴中保温8~12分钟，加入缓冲溶液D和溶液3，混匀，405nm波长下测定第0、1、2、3分钟光吸收值，以缓冲溶液B代替溶液2，同法操作，作为空白对照；所述溶液1、溶液2、溶液3、缓冲溶液C和缓冲溶液D的体积比为1∶1∶1∶1∶1；5）按计算公式计算对硝基苯胺浓度，得到凝血因子Ⅹ激活剂效价；其中，所述缓冲溶液A是以Na+离子含量计浓度为0.02mol/L的磷酸氢二钠缓-磷酸二氢钠冲液、以三羟甲基氨基甲烷含量计浓度为0.02mol/L的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液或以Na+离子含量计浓度为0.02mol/L的柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液，均含有0.1mol/L氯化钠和0.001mol/L盐酸苯甲脒，pH为7.4；所述缓冲溶液B是以Na+离子含量计浓度为0.01mol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、以三羟甲基氨基甲烷含量计浓度为0.01mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液或以Na+离子含量计浓度为0.01mol/L柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液，pH为8.0；所述缓冲溶液C是以Na+离子含量计浓度为0.1mol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、以三羟甲基氨基甲烷含量计浓度为0.1mol/L的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液或以Na+离子含量计浓度为0.1mol/L的柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液，均含有0.3mol/L氯化钠、0.002mol/L盐酸苯甲脒和0.01mol/L氯化钙，pH为7.5；所述缓冲溶液D是以...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔亮亮，孙东，丁忠福，李秀娜，李秀琳，石皎，薛雁，薛百忠，王宏英，
申请(专利权)人：辽宁远大诺康生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁,21