交联脱细胞羊膜及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种交联脱细胞羊膜、复合型皮肤替代物及其制备方法和应用。所述交联脱细胞羊膜的制备方法包括如下步骤：将脱细胞羊膜浸泡于MES缓冲液中，加入水溶性碳二亚胺浓度为0.01‑0.1mmol/mg，交联反应1‑10min，清洗，真空冷冻干燥即得。本发明专利技术制备获得的交联脱细胞羊膜保留了基底膜的细胞因子，同时机械强度增强。本发明专利技术获得脱细胞羊膜作为培养基质制备的复合型皮肤替代物，能够用于创面修复。

Cross linked acellular amniotic membrane and preparation method and application thereof

The invention relates to a cross-linked acellular amnion, a composite skin substitute, a preparation method and an application thereof. A method for preparing the crosslinked acellular amniotic membrane comprises the following steps: the acellular amniotic membrane was soaked in MES buffer solution, adding water soluble carbon concentration of 0.01 two imine 0.1mmol/mg, 1 10min crosslinking reaction, cleaning, vacuum freeze drying to obtain. The cross-linked acellular amniotic membrane obtained by the invention retains the cytokines of the basal membrane and increases the mechanical strength. The invention obtains acellular amniotic membrane as a composite skin substitute prepared by a culture medium, and can be used for wound repair.

【技术实现步骤摘要】
交联脱细胞羊膜及其制备方法和应用
本专利技术涉及组织工程
，特别是涉及一种交联脱细胞羊膜及其制备方法和应用。
技术介绍
真皮替代物的研究一直是组织工程皮肤的重点和难点，也是复合型真皮替代物发展的基础。真皮替代物作为创面修复过程中的支架结构，不仅能促进表皮细胞的增殖、迁移和分化，调节基底膜的形成，而且能引导成纤维细胞和血管内皮细胞的浸润增殖，沉积新的胶原和形成新的血管，从而实现真皮结构重建。现有的真皮替代物在一定程度上能够模拟正常真皮的组织结构特点，但是除脱细胞真皮外，普遍都缺乏基底膜结构成分。即使采用脱细胞真皮，为了去除表皮细胞层和真皮中的成纤维细胞和血管内皮细胞，一般需要很强的细胞清除剂处理，会对真皮的基底膜成分产生严重的破坏。人羊膜来源于胎盘的最内层，可在分娩时获得，主要由三部分结构组成：单层立方状表皮细胞，富含细胞生长因子的厚基底膜，以及成纤维细胞散在其中的疏松网状纤维基质。羊膜基质含有I型胶原、IV型胶原、VII型胶原、弹性蛋白和糖胺聚糖等成分，类似于人体的真皮。羊膜的基底膜主要成分为层粘连蛋白、IV型和VII型胶原，与皮肤和角膜的基底膜成分相似，是人体内最厚的基底膜。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种交联脱细胞羊膜的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)浸泡：将脱细胞羊膜浸泡于25‑35ml MES缓冲液中55‑65min；(2)交联反应：向浸泡后的羊膜所在的缓冲液中加入水溶性碳二亚胺，并使碳二亚胺的浓度为0.01‑0.1mmol/mg，置于37±0.5℃的恒温摇床上，转速28‑32rpm，交联反应1‑10min；(3)蒸馏水清洗，真空冷冻干燥，即得。

【技术特征摘要】
1.一种交联脱细胞羊膜的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)浸泡：将脱细胞羊膜浸泡于25-35mlMES缓冲液中55-65min；(2)交联反应：向浸泡后的羊膜所在的缓冲液中加入水溶性碳二亚胺，并使碳二亚胺的浓度为0.01-0.1mmol/mg，置于37±0.5℃的恒温摇床上，转速28-32rpm，交联反应1-10min；(3)蒸馏水清洗，真空冷冻干燥，即得。2.根据权利要求1所述的交联脱细胞羊膜的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述脱细胞羊膜由以下步骤制备而成：在无菌条件下，从胎盘的内层剥下羊膜，放置到无菌生理盐水中，反复冲洗去除羊膜表面的脏污，并去除所述羊膜的绒毛膜，用pH为7.2-7.4的PBS溶液反复漂洗；将漂洗后的羊膜在抗生素溶液中浸泡3-7min，再在pH为7.2-7.4的PBS溶液浸泡8-12min，此过程重复多次；用pH为7.2-7.4的PBS溶液重新冲洗后，置于含DMEM：甘油体积比为1：0.5-2的溶液中，-80℃条件下储存6-8个月；取无感染的储存所得羊膜，4℃条件下，置于在质量百分比为0.1％-0.5％的trypsin-EDTA水溶液中孵育过夜；再用含有血清的DMEM培养基对其进行终止消化，用pH为7.2-7.4的PBS溶液冲洗多次，备用。3.根据权利要求2所述的交联脱细胞羊膜的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述脱细胞羊膜的制备过程，还包括复苏的步骤：将无感染的储存6-8个月的所述羊膜预先依次置于-80±5℃和37±2℃环境中反复冻融2-4次后，备用...

【专利技术属性】
技术研发人员：车七石，
申请(专利权)人：广州润虹医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44