利用静电纺丝技术制备促进EGF持续性释放纳米纤维的方法及产品技术

本发明专利技术涉及利用静电纺丝技术制备促进EGF持续性释放纳米纤维的方法及产品，具体方法是将左旋聚乳酸溶于氯仿中得左旋聚乳酸溶液，然后将透明质酸溶于氯仿与甲酸体积比为2:1的溶液中，得透明质酸溶液；然后将左旋聚乳酸溶液与透明质酸溶液混合，然后加入司盘，搅拌过夜，得油相，然后向油相中逐滴加入含有EGF的水相，边加边搅拌至形成稳定的乳液；然后将乳液进行静电纺丝，得促进EGF持续性释放的纳米纤维；制得的纳米纤维能够促进EGF的持续性释放，并且能够避免EGF与有机溶剂的直接接触，保证了其生物活性，能够用于皮肤创伤的修复，为临床提供了新型有前景的创伤辅料。

Method and product for promoting sustained release of nanofibers by electrospinning using EGF Technology

The present invention relates to a preparation method of promoting sustained release EGF nanofibers by electrospinning technology and products, the specific method is poly-L-lactic acid soluble in chloroform in poly-L-lactic acid solution, then the hyaluronic acid soluble in chloroform and acid volume ratio of 2:1 solution, to hyaluronic acid solution; then the PLLA solution mixed with hyaluronic acid solution, then add our dish, stir overnight, oil phase, water phase and oil phase was added dropwise containing EGF, while stirring to form stable emulsion; then the emulsion electrospinning, to promote sustained release of EGF nano fiber; nano fiber prepared to continue to promote the release of EGF, and can avoid the direct contact of EGF with organic solvent, ensure its biological activity, can be used for the repair of skin wound, for clinical provides New promising trauma excipients.

【技术实现步骤摘要】
利用静电纺丝技术制备促进EGF持续性释放纳米纤维的方法及产品
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及利用静电纺丝技术制备促进EGF持续性释放纳米纤维的方法，还涉及由该方法制得的产品。
技术介绍
皮肤是人体的最大组织器官，大面积的创伤不仅给患者带来了生理上的疼痛还会破坏人体免疫系统，如何加速创伤面的愈合和减轻疤痕的产生是近年来研究的热点。组织工程是一门将生物学与材料学交叉起来的一门学科，创伤敷料是用于皮肤组织工程的材料，传统的创伤敷料具有保护创面、阵痛止血、促进创面愈合且减轻疤痕产生的功效。利用静电纺丝技术制备的纳米纤维支架在组织工程领域也受到了很多关注。EGF是一种单链多肽生长因子，因其对表皮具有促进生长的作用，被称为表皮生长因子。EGF已经在了临床上取得了广泛的应用，但其半衰期短，生物活性易损等特点使其应用受到了很大的限制。如何在保证其生物学活性的情况下使其持续性的释放以达到对皮肤的修复作用受到广泛关注。目前关于持续性释放多肽的研究较少，多集中于对纳米纤维材料支架的研究上。李雨华等利用生物材料和多肽药物相结合的方法制备出一种可持续性释放多肽的组合物，但是这仅仅适用于亲水性的多肽类，多肽和高分子聚合物直接结合，不利于保留多肽的生物学活性，并且此方法中多肽释放速率较低。因此，在皮肤组织工程中如何保证多肽EGF的生物学活性并促进其释放用于持续性修复皮肤组织是必须解决的难题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种利用静电纺丝技术制备促进EGF持续性释放纳米纤维的方法，本专利技术采用乳液静电纺丝技术，采用油包水的乳化体系，将透明质酸与左旋聚乳酸作为油相，EGF水溶液作为水相，制备出促进EGF持续性释放纳米纤维(PLLA/HA/EGF纳米纤维)；本专利技术的目的之二在于提供由该方法制得的PLLA/HA/EGF纳米纤维，制得的纳米纤维既保证了高分子聚合物的力学性质同时又具有了天然大分子的生物学功能，同时使EGF持续性释放，解决了EGF半衰期短的难题。为解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：1、利用静电纺丝技术制备促进EGF持续性释放纳米纤维的方法，将左旋聚乳酸溶于氯仿中得左旋聚乳酸溶液，然后将透明质酸溶于氯仿与甲酸体积比为2:1的溶液中，得透明质酸溶液；接着将左旋聚乳酸溶液与透明质酸溶液混合，再加入司盘，搅拌过夜，得油相，然后向油相中逐滴加入含有EGF的水相，边加边搅拌至形成稳定的乳液；最后将乳液进行静电纺丝，得促进EGF持续性释放的纳米纤维。优选的，所述左旋聚乳酸溶液浓度为8～10％(g/ml)。优选的，所述透明质酸浓度为1.5％～2％(g/ml)。优选的，左旋聚乳酸溶液与透明质酸溶液的体积比为10:1。优选的，所述司盘加入量相当于左旋聚乳酸溶液体积的0.01～0.02倍。优选的，所述含有EGF的水相由浓度为1μg/μl的EGF溶液用质量分数0.2％的BSA溶液稀释而得。优选的，所述静电纺丝在流速1～1.2ml/h、电压16～18kV、滚筒转速300转/分钟条件下操作。2、所述方法制得的促进EGF持续性释放纳米纤维。本专利技术的有益效果在于：利用静电纺丝技术制备促进EGF持续性释放纳米纤维的方法，本专利技术通过采用乳液静电纺丝技术，采用油包水的乳化体系，将透明质酸与左旋聚乳酸作为油相，EGF水溶液作为水相，制备出促进EGF持续性释放纳米纤维(PLLA/HA/EGF纳米纤维)；能够避免EGF与有机溶剂的直接接触，保证了其生物活性，并且半衰期长；同时由于HA的加入显著地提高了材料表面的亲水性，加快了EGF的释放速率，能够应用于皮肤创伤的修复，减少疤痕组织产生，为临床提供了一种新型的有前景的创伤敷料。附图说明为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：图1为纳米纤维制备原理图及表征(A：纳米纤维制备原理图；B：制备纳米纤维乳液图；C：倒置相差显微镜下纳米纤维乳液乳化体系图)图2为EDS来检测纤维的化学组成基团与元素的含量变化(A：PLLA纳米纤维；B：PLLA/HA纳米纤维；C：PLLA/HA/EGF纳米纤维)。图3为PLLA、PLLA/EGF、PLLA/HA/EGF和PLLA/HA/BSA四种纳米纤维的表征及孔径大小统计(A：SEM和TEM对纳米纤维的表面形态与内部结构进行了表征；B：对四种不同的纳米纤维进行了孔径大小与直径大小的统计分析)。图4为接触角测量仪分别检测PLLA、PLLA/EGF、PLLA/HA/EGF和PLLA/HA/BSA纳米纤维的亲水性。图5为纳米纤维支架材料PLLA/HA/EGF和PLLA/EGF纳米纤维的EGF的释放曲线。具体实施方式下面将结合附图，对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。实施例1利用静电纺丝技术制备促进EGF持续性释放纳米纤维的方法，具体步骤如图1中A所示：(1)将1g左旋聚乳酸(PLLA)溶于10ml氯仿(TCM)溶剂中，制备10％(w/v)PLLA溶液；(2)将0.02g透明质酸(HA)溶于1ml氯仿(TCM)：甲酸(FA)＝2:1(V/V)的溶剂中，制备2％(w/v)HA溶液；(3)将步骤(1)制得的PLLA溶液与步骤(2)制得的HA溶液按体积比为10:1混合，然后加入40μlSpan-80，搅拌过夜，得油相，备用；(4)向步骤(3)所得油相中逐滴加入由浓度为1μg/μl的EGF溶液用质量分数0.2％的BSA溶液稀释制得的水相，边加边搅拌至少2h至形成稳定均一得乳液，4℃冰箱中储存备用(图1中B)；(5)将步骤(4)制得乳液装入10ml注射器中，采用内径为0.6mm的22G不锈钢平头针头，在通风橱中进行电纺操作，利用开放式滚筒接收装置(直径15cm)进行收集制得的纳米纤维；针头与接收器之间的距离为10～12cm，制好的纳米纤维放入通风橱中干燥过夜备用；电纺条件为：流速1～1.2ml/h，电压16～18kV，滚筒转速300转/分钟。实施例2利用静电纺丝技术制备促进EGF持续性释放纳米纤维的方法，具体步骤如图1中A所示：(3)将0.8g左旋聚乳酸(PLLA)溶于10ml氯仿(TCM)溶剂中，制备8％(w/v)PLLA溶液；(4)将0.015g透明质酸(HA)溶于1ml氯仿(TCM)：甲酸(FA)＝2:1(V/V)的溶剂中，制备1.5％(w/v)HA溶液；(3)将步骤(1)制得的PLLA溶液与步骤(2)制得的HA溶液按体积比为10:1混合，然后加入60μlSpan-80，搅拌过夜，得油相，备用；(4)向步骤(3)所得油相中逐滴加入由浓度为1μg/μl的EGF溶液用质量分数0.2％的BSA溶液稀释制得的水相，边加边搅拌至少2h至形成稳定均一得乳液，4℃冰箱中储存备用(图1中B)；(5)将步骤(4)制得乳液装入10ml注射器中，采用内径为0.6mm的22G不锈钢平头针头，在通风橱中进行电纺操作，利用开放式滚筒接收装置(直径15cm)进行收集制得的纳米纤维；针头与接收器之间的距离为10～12cm，制好的纳米纤维放入通风橱中干燥过夜备用；电纺条件为：流速1～1.2ml/h，电压16～18kV，滚筒转速300转/分钟。同时按照相同的方法制备PLLA纳米纤维、PLLA/EGF纳米纤维和PLLA/HA/BSA纳米纤维，作为对照。本专利技术通过采用乳液静电纺本文档来自技高网...

【技术保护点】
利用静电纺丝技术制备促进EGF持续性释放纳米纤维的方法，其特征在于：将左旋聚乳酸溶于氯仿中得左旋聚乳酸溶液，然后将透明质酸溶于氯仿与甲酸体积比为2:1的溶液中，得透明质酸溶液；接着将左旋聚乳酸溶液与透明质酸溶液混合，再加入司盘，搅拌过夜，得油相，然后向油相中逐滴加入含有EGF的水相，边加边搅拌至形成稳定的乳液；最后将乳液进行静电纺丝，得促进EGF持续性释放的纳米纤维。

【技术特征摘要】
1.利用静电纺丝技术制备促进EGF持续性释放纳米纤维的方法，其特征在于：将左旋聚乳酸溶于氯仿中得左旋聚乳酸溶液，然后将透明质酸溶于氯仿与甲酸体积比为2:1的溶液中，得透明质酸溶液；接着将左旋聚乳酸溶液与透明质酸溶液混合，再加入司盘，搅拌过夜，得油相，然后向油相中逐滴加入含有EGF的水相，边加边搅拌至形成稳定的乳液；最后将乳液进行静电纺丝，得促进EGF持续性释放的纳米纤维。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述左旋聚乳酸溶液浓度为8～10％(g/ml)。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述透明质酸浓度为1.5％～2％(...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘连红，王振北，张永慧，庞毅，
申请(专利权)人：重庆三峡医药高等专科学校，
类型：发明
国别省市：重庆,50