本发明专利技术公开了苯醌衍生物(2,5‑二甲基对苯醌或叔丁基对苯醌)在制备抗肝纤维化药物中的应用，属于医药技术领域，研究表明2,5‑二甲基对苯醌或叔丁基对苯醌均能够通过调节TLR4信号通路，减少LPS受体蛋白CD14和TLR4及降低p‑PI3K及p‑AKt蛋白的表达来抑制LPS引起HSC细胞的活化；同时通过降低Pro‑caspase3，Bcl‑2/Bax，XIAP,FILP蛋白的表达来促使活化的HSC细胞凋亡；最终通过降低α‑SMA及Collagen Ⅰ的表达而表现出一定的抗肝纤维化的活性。因此，该类化合物在用于制备抗肝纤维化的药物时具有一定的新应用。
Application of quinone derivative in preparing medicine for resisting liver fibrosis
The present invention discloses benzoquinone derivatives (2,5 two methyl benzoquinone or tert Ding Ji benzoquinone) application in the preparation of anti fibrosis drugs, which belongs to the technical field of medicine, the research showed that 2,5 two methyl benzoquinone or tertiary benzoquinone to Ding Ji through the pathway of TLR4, reduce the LPS receptor protein CD14 and TLR4 and reduce the expression of P PI3K and P AKt protein to inhibit LPS induced activation of HSC cells; at the same time by reducing the Pro Caspase3 Bcl, 2/Bax, XIAP, FILP protein expression to induce apoptosis of activated HSC cells; finally through reducing the expression of SMA and Collagen alpha I showed some anti liver fibrosis activity. Therefore, these compounds have some new applications in the preparation of drugs against hepatic fibrosis.
【技术实现步骤摘要】
苯醌衍生物在制备抗肝纤维化药物中的应用
本专利技术属于医药
，具体涉及苯醌衍生物(2,5-二甲基对苯醌或叔丁基对苯醌)在制备抗肝纤维化药物中的应用。
技术介绍
肝纤维化是肝脏对许多慢性炎症刺激的损伤修复反应，肝纤维化是很多肝病终末期阶段复杂病症发生的基础。如不及时治疗则可能进展成为肝硬化并出现各种终末期肝病并发症，肝硬化及其并发症已经成了全球发病与死亡的主要因素。在肝纤维病变阶段，肝星状细胞(HSC)是主要的效应细胞,活化后的HSC发生形态和功能上的变化,转化为成纤维细胞或肌成纤维细胞样细胞(myofibroblasts,MFB),表达大量的α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin,α-SMA).同时HSC增殖、分化能力增强，大量分泌胶原,导致细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)的降解与沉积失衡，肝内汇管区和肝小叶内以Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维为主的纤维组织增生、沉积,引起肝纤维化的发生和发展。肝纤维化的发生和发展机制十分复杂，其中肝星状细胞(hepaticstellatecells，HSC)的激活、增殖是肝纤维化发生的中心环节，因此抑制HSC的激活，减少HSC的增殖、活化是抗肝纤维化治疗的关键步骤。近年来对肝星状细胞激活的各种信号转导途径进行了深入的研究,干扰其主要的信号转导途径为肝纤维化治疗带来了新的曙光，对于找出能作为抗肝纤维化潜在的药物来缓解肝纤维化病情具有重要的临床意义。
技术实现思路
为了克服现有制备抗肝纤维化药物的不足，本专利技术提供苯醌衍生物(2,5-二甲基对苯醌及叔丁基对苯醌)在制备抗肝纤维化药物中的新用途，即在制药中的新应用。本专利技术的目的是提供苯醌衍生物(2,5-二甲基对苯醌及叔丁基对苯醌)在制备抗肝纤维化药物中的应用。为了研究苯醌衍生物在制备抗肝纤维化药物中的应用，本专利技术选用人肝星状细胞LX-2作为实验模型，用脂多糖(LPS)处理人肝星状细胞LX-2后引发细胞内ROS含量升高而使其活化，使其具有肝纤维化细胞特性。因醌类化合物是一类具有不饱和环二酮结构的化合物，其醌的结构可以被还原为酚羟基而具有抗氧化作用，因此我们利用醌类化合物这样的性质-其抗氧化性能而发挥2,5-二甲基对苯醌及叔丁基对苯醌的抗肝纤维化活性。在本专利技术中利用循环伏安法测试了2,5-二甲基对苯醌及叔丁基对苯醌的抗氧化性能。结果发现其醌→半醌→氢化醌的两个还原过程清晰；说明其具有较好的还原性而使得其能够消除具有肝纤维化特性的细胞中过量的ROS，从而利用其抗氧化性能而发挥抗肝纤维化的作用。在生物学实验中，CCK-8实验结果表明两种苯醌衍生物在80uM以下均显示低的细胞毒性，因此在后续的生物实验中选择50uM以下的浓度进行试验，并发现具有较好的效果。从5uM起具有一定的生物活性(有效地引起LX-2细胞凋亡及引发LX-2细胞线粒体膜电位去极化)。从CCK-8试验、凋亡实验、线粒体膜电位测试、及利用流式细胞仪测定细胞中ROS含量、蛋白质印迹分析法分别检测了2,5-二甲基对苯醌及叔丁基对苯醌对于LPS处理后人肝星状细胞LX-2的抑制作用。结果表明，2,5-二甲基对苯醌及叔丁基对苯醌均可利用其化合物本身的抗氧化性能来消除细胞内由于LPS刺激而升高的ROS，从而抑制TLR4信号通路，减少LPS受体蛋白CD14和TLR4及干扰p-PI3K及p-AKt蛋白的表达来抑制LPS引起LX-2细胞的活化，同时通过降低Pro-caspase3，Bcl-2/Bax，XIAP,FILP蛋白的表达促使活化的LX-2细胞凋亡；通过降低α-SMA及CollagenⅠ的表达而具有一定的抗肝纤维化的活性。同时2,5-二甲基对苯醌及叔丁基对苯醌均表现为低毒性，这使得将其开发成抗肝纤维化药物提供了一定的理论基础。进一步地，所述的苯醌衍生物为2,5-二甲基对苯醌或叔丁基对苯醌。苯醌衍生物2,5-二甲基对苯醌及叔丁基对苯醌的结构式如下：进一步地，所述的苯醌衍生物为2,5-二甲基对苯醌或叔丁基对苯醌的摩尔浓度范围为5-80uM。更进一步地，所述的苯醌衍生物为2,5-二甲基对苯醌或叔丁基对苯醌的摩尔浓度为5-50uM。与现有技术相比，本专利技术具有如下优点：1、两种苯醌衍生物在80uM浓度范围内均表现为低毒性，并且在小浓度范围内发挥很好的效果(50uM以下)。2、利用醌在生物体内通过一系列还原酶被还原为具有抗氧化能力的氢化醌结构而使其发挥抗氧化性能而消除具有肝纤维化特性的细胞中过量的ROS调节细胞内氧化还原平衡从而发挥抗肝纤维化活性。附图说明图1为利用循环伏安法测试2,5-二甲基对苯醌及叔丁基对苯醌的氧化还原电势图；其中，Dime-Q为2,5-二甲基对苯醌；tBu-Q为叔丁基对苯醌；图2为2,5-二甲基对苯醌及叔丁基对苯醌对于人肝星状细胞的毒性的影响；其中，Dime-Q为2,5-二甲基对苯醌；tBu-Q为叔丁基对苯醌；图3为2,5-二甲基对苯醌及叔丁基对苯醌作用LX-2细胞后线粒体膜电位图；其中，a为空白对照组、b为2,5-二甲基对苯醌的摩尔浓度为5uM、c为2,5-二甲基对苯醌10uM、d为2,5-二甲基对苯醌20uM、e为2,5-二甲基对苯醌40uM、f为2,5-二甲基对苯醌50uM；A为空白对照组、B为叔丁基对苯醌5uM、C为叔丁基对苯醌10uM、D为叔丁基对苯醌20uM、E为叔丁基对苯醌40uM、F为叔丁基对苯醌50uM；图4为利用流式细胞仪测定化合物引起LX-2细胞凋亡的示意图。其中，a为空白对照组、b为2,5-二甲基对苯醌的摩尔浓度为5uM、c为2,5-二甲基对苯醌10uM、d为2,5-二甲基对苯醌20uM、e为2,5-二甲基对苯醌40uM、f为2,5-二甲基对苯醌50uM；A为空白对照组、B为叔丁基对苯醌5uM、C为叔丁基对苯醌10uM、D为叔丁基对苯醌20uM、E为叔丁基对苯醌40uM、F为叔丁基对苯醌50uM；图5为利用流式细胞仪检测2,5-二甲基对苯醌及叔丁基对苯醌作用于LPS处理后的LX-2，细胞中ROS含量的变化结果；其中，a为空白对照组、b为用LPS(11ug/ml)处理24h，c为先用LPS(1ug/ml)处理1h后再加入40uM2,5-二甲基共同孵育24h、d为先用LPS(1ug/ml)处理1h后再加入40uM叔丁基对苯醌共同孵育24h、e为a-d对应的荧光强度数值；图6为2,5-二甲基对苯醌及叔丁基对苯醌对于LPS受体蛋白表达的影响；其中，a为CD14蛋白表达条带灰度值、b为TLR4蛋白表达条带灰度值；图7为2,5-二甲基对苯醌及叔丁基对苯醌分别对于促肝纤维化蛋白表达的影响；其中，c为PI3K总蛋白表达及磷酸化p-PI3K蛋白表达条带灰度值比值、d为Akt总蛋白表达及磷酸化Akt蛋白表达条带灰度值比值、e为胶原蛋白I(CollagenI)蛋白表达条带灰度值、f为α-平滑肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达条带灰度值；图8为2,5-二甲基对苯醌及叔丁基对苯醌分别对于凋亡相关蛋白表达的影响；其中，g为FILP蛋白表达条带灰度值、h为XIAP蛋白表达条带灰度值、i为Pro-Caspase3蛋白表达条带灰度值、j为Bax蛋白及Bcl-2蛋白表达条带灰度值比值。具体实施方式实施例1：循环伏安法测2,5-二甲基对苯醌及叔丁基本文档来自技高网...
【技术保护点】
苯醌衍生物在制备抗肝纤维化药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.苯醌衍生物在制备抗肝纤维化药物中的应用。2.如权利要求1所述的苯醌衍生物在制备抗肝纤维化药物中的应用，其特征在于，所述的苯醌衍生物为2,5-二甲基对苯醌或叔丁基对苯醌。3.如权利要求2所述的苯醌衍生物在制备抗肝纤维化药物中...
【专利技术属性】
技术研发人员：周鑫，苗宇，柳志学，吴学，
申请(专利权)人：延边大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22
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