雪菊提取物及雪菊总黄酮在制备治疗肝纤维化药物的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种雪菊提取物及雪菊总黄酮在制备治疗肝纤维化药物的应用。本发明专利技术通过细胞实验和动物实验，将雪菊提取物分别给予肝星状细胞系LX-2以及CCl4诱发的肝纤维化大鼠模型后：细胞实验结果显示，雪菊提取物可以显著降低NF-kappa B的DNA结合能力，下调纤维化标志物α平滑肌肌动蛋白和细胞基质蛋白I型胶原，促进LX-2细胞凋亡；体内结果显示，与模型组比较，雪菊提取物可降低肝纤维化大鼠的AST和ALT含量，降低肝胶原蛋白含量，减少α-SMA和ECM表达，超声破碎肝组织形成匀浆悬液，可见NF-kappa B的DNA结合能力显著降低；所述的雪菊提取物可作为NF-kappa B信号通路抑制剂用于治疗肝纤维化的药物或者功能食品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及雪菊的新用途，特别是雪菊提取物的新用途，即在制备治疗肝纤维化药物或者功能食品方面的新用途。
技术介绍
肝纤维化由多种致病因子引发的慢性肝损伤导致，包括慢性病毒性肝炎、酒精毒性、自身免疫性疾病及遗传性代谢紊乱，其引起肝内纤维结缔组织异常增生，细胞外基质过度沉淀。肝纤维化的主要效应细胞是肝星状细胞hepaticstellatecells,HSCs)。生理情况下，HSCs位于肝窦与肝窦壁之间的Disse间隙内，具有存储维生素A等功能。然而，肝脏受损后HSCs被激活，转化成为具有收缩功能的肌纤维母细胞，分泌平滑肌α肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原，合成大量的细胞外基质，促进肝纤维化的形成。NF-κB是炎症应答的主要介导者，NF-κB信号通路对于肝星状细胞的存活和肝脏内环境的自我平衡至关重要。NF-κB信号活化可以促进HSCs增殖，产生分泌平滑肌α肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原，合成大量的细胞外基质，促进肝纤维化的形成。抑制NF-κB活化可介导HSCs凋亡，抑制诸如α肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原产生，从而阻断肝纤维化的发展进程。因此，抑制NF-κB信号通路可能会作为一个潜在的肝纤维化治疗手段。雪菊系菊科金鸡菊属植物，主要产地为新疆昆仑山，是一种珍贵药食两用植物。雪菊含有300多种天然成分，包括黄酮、维生素、氨基酸、多糖、有机酸、萜烯类等。现代药理学研究发现，雪菊是一种很强的抗氧化植物，<br>其生物黄酮、萜类物质等成分可有效地清除体内的氧自由基，防止细胞变性衰老以及恶性转化，对于调节血压，降低血脂、预防糖尿病、肿瘤等疾病有积极的保健作用。“新疆昆仑雪菊水提液对大鼠血脂的影响”《新疆农业大学学报》(2013,36:366-70)崔康康等人研究报道昆仑雪菊水提液可以显著下降SD大鼠血脂水平。“ChemicalandnutraceuticalpropertiesofCoreopsistinctoria”《JournalofFunctionalFoods》(2015,13:11-20)LiminGuo等人报道当前雪菊的医学效应主要有抗衰老、降低血糖改善糖耐受、降血脂、降血压、抗氧化、抗凝等。目前未检索到雪菊、雪菊提取物可用于治疗肝纤维化的文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供雪菊提取物在制备治疗肝纤维化药物方面的新用途。本专利技术的另一目的是提供雪菊提取物及其雪菊总黄酮作为NF-κB信号通路抑制剂在制备治疗肝纤维化药物方面的新用途。本专利技术的目的是通过下列的技术方案实现的：本专利技术原料来源：雪菊coreopsistinctoria：系菊科金鸡菊属植物，又名两色金鸡菊，原产美国中西部地区，主要分布在中国新疆昆仑山北麓海拔3000米雪线的部分地区。一年生草本植物，有降血压、降血脂和降血糖之功效。本专利技术通过体外实验，给予人肝星状细胞LX-2雪菊总黄酮后，抑制LX-2增殖，促进LX-2凋亡，α-SMA和I型胶原表达量随着药物剂量增加逐渐减少。同时，雪菊总黄酮降低NF-κB的DNA结合活性，从而抑制NF-κB信号驱动的下游基因表达，导致促凋亡基因mRNA表达增多(如：BCL-XS，RIP1)，抗凋亡基因mRNA表达减少(如：A20，FLIP)，从而造成肝星状细胞LX-2凋亡。本专利技术通过体内试验，分别给予经CCl4诱导的肝纤维化大鼠雪菊总黄酮以及雪菊提取物处理，发现大鼠血清AST和ALT水平显著降低，α-SMA和ECM表达减少，肝组织细胞匀浆经检测其NF-κB的DNA结合活性显著下降，表明雪菊提取物及其雪菊总黄酮具有抗大鼠肝纤维化，保护肝细胞，改善肝功能的功效。本专利技术不仅证实雪菊提取物及其雪菊总黄酮具有对肝纤维化大鼠肝保护作用，而且证明其作用机理与雪菊提取物及其雪菊总黄酮可以抑制炎性转录因子NF-κB生物学活性，从而实现肝纤维化治疗的机理。雪菊作为一种传统的药食两用植物，临床应用和日常保健的安全性非常高，在治疗肝纤维化药物治疗中不失为一种好的手段，拓宽了治疗肝纤维化的新方法，而且雪菊由于具有多重健康效应，为患者提供了非常有益的治疗选择。因此，本专利技术提供雪菊、雪菊提取物、雪菊总黄酮能够用于治疗肝纤维化药物方面的新用途。本专利技术还公开了雪菊提取物在制备治疗肝纤维化药物方面的应用，所述雪菊提取物的制备包括以下步骤：将雪菊花干燥,采用PULVERISETTE14在15000rpm转速条件下粉碎后，沸水浴1小时，离心，取上清，通过直径0.22微米滤膜过滤，收集滤液。然后再向沸水浴锅内添加沸水，重复上述步骤2次，将3次滤液合并后置于旋转蒸发仪浓缩成水浸液，浓缩，干燥，得到雪菊提取物。雪菊中含有绿原酸、邻苯二酚等具有邻苯二羟基结构，碱性环境下与铝离子形成络合物，可能会对黄酮的测定造成干扰。芦丁是一种结构与功能较清楚的黄酮类化合物槲皮素的糖苷,以芦丁为标准品，采用AlCl3法测得雪菊总黄酮得率为18.47％本专利技术还公开了雪菊总黄酮在制备治疗肝纤维化药物方面的应用，所述雪菊总黄酮的制备包括以下步骤：将雪菊花干燥，采用PULVERISETTE14在15000rpm转速条件下后粉碎，沸水浴1小时，离心，取上清，通过直径0.22微米滤膜过滤，收集滤液。然后再向沸水浴锅内添加沸水，重复上述步骤2次，将3次滤液合并后置于旋转蒸发仪浓缩成水浸液，浓缩，干燥，获得雪菊提取物。将该提取物减压浓缩至最小体积后用石油醚脱脂，再用正丁醇萃取，减压回收正丁醇，水层减压浓缩，真空干燥，得到雪菊总黄酮。同样地以芦丁为对照品,采用AlCl3法测得雪菊总黄酮得率为17.38％。雪菊总黄酮给药方式为口服,剂量为20mg/kg。附图说明图1是本专利技术实验中雪菊总黄酮对LX-2细胞的增殖抑制率；图2A-1是本专利技术实验中雪菊总黄酮诱导lX-2细胞凋亡的一次流式细胞术检测代表性结果；图2A-2是本专利技术实验中雪菊总黄酮诱导lX-2细胞凋亡的三次独立流式细胞术检测实验的统计结果；图2B是本专利技术实验中对照组，给予雪菊黄酮5mg/L处理LX-2细胞凋亡蛋白PARP检测；图3是本专利技术实验中雪菊总黄酮下调LX-2细胞纤维化蛋白α-SMA和ECM(typeIcollagen)表达；图4是本专利技术实验中雪菊总黄酮抑制LX-2细胞NF-κB的DNA结合活性ELISA分析；图5A-1、5A-2、5A-3分别是促凋亡基因FAS、BCL-XS和RIP1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种雪菊提取物在制备治疗肝纤维化药物的应用。

【技术特征摘要】
1.一种雪菊提取物在制备治疗肝纤维化药物的应用。
2.根据权利要求1所述的雪菊提取物在制备治疗肝纤维化药物的应用，其特
征在于，所述雪菊提取物按照以下步骤制备：将雪菊花干燥,粉碎后，沸
水浴1小时，离心，取上清，通过直径0.22微米滤膜过滤，收集滤液；
然后再向沸水浴锅内添加沸水，重复上述步骤2次，将3次滤液合并后置
于旋转蒸发仪浓缩成水浸液，再经浓缩、干燥后得到雪菊提取物。
3.根据权利要求1雪菊提取物在制备治疗肝纤维化药物的应用，其特征在于
所述的雪菊提取物作为NF-kappaB信号通路抑制剂。
4.根据权利要求1雪菊提取物在制备治疗肝纤维化药物的应用，其特征在于，
所述的雪菊提取物抑制人肝星状细胞LX-2的增殖或促进人肝星状细胞
LX-2的凋亡。
5.根据权利要求1雪菊提取...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵辉，只德贤，张鹏，
申请(专利权)人：天津商业大学，
类型：发明
国别省市：天津;12