具有多重抗药性抑制性质的抗微生物药物组合物制造技术

本发明专利技术提供用于在受感染的受试者中治疗微生物感染的方法，包括给予所述受试者抗微生物组合物，所述抗微生物组合物包含治疗有效量的一种或多种亲脂性阳离子和任选地另外一种或多种抗微生物化合物或抗微生物剂。本发明专利技术进一步提供具有抗微生物性质的药物组合物，其包含治疗有效量的一种或多种亲脂性阳离子和另外一种或多种抗微生物化合物或抗微生物剂。

Antimicrobial drug composition with multiple drug resistance inhibiting properties

The present invention provides a method for treating a microbial infection in the infected subjects, comprising administering to the subject of anti microbial composition, the antimicrobial composition comprising a therapeutically effective amount of one or more lipophilic cations and optionally one or more anti microbial compounds or anti microbial agents. The present invention further provides pharmaceutical compositions having antimicrobial properties, comprising one or more lipophilic cations for treating effective amounts, and one or more antimicrobial compounds or antimicrobial agents.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有多重抗药性抑制性质的抗微生物药物组合物专利技术背景专利
本专利技术涉及具有抗微生物性质的药物组合物。本专利技术进一步涉及具有多重抗药性-抑制性质的所述药物组合物。相关技术概述抗生素代表了历史上医学的最伟大进步之一。不幸的是，在医学和农业中某些抗生素的过度使用已导致出现抵抗许多最常用的抗生素的病理学微生物，迫使需要尚未对所述微生物暴露的结构上不同的抗生素。所述抗生素抵抗的一种形式归因于一些抗生素能够在不同的细胞(包括真菌和细菌)中激活多重抗药性(MDR)系统。结果是，这些MDR系统泵出抗生素，从而减少它们在靶细胞中的浓度和显著减少抗生素的抗微生物作用。例如，在许多情况下，病原性真菌具有稳健的MDR系统(见参考文献1和2)。抑制微生物MDR泵的安全、方便和通用方法的开发是尚未解决的问题。有效的抗生素，其也是MDR抑制剂，预期显示对MDR-介导的抵抗较不敏感的抗细菌或抗真菌性质，因为它通过改变这些抗生素的流入/流出的平衡而增加抗生素在靶细胞中的浓度。进而，这种平衡改变和抗生素浓度增加应降低靶细胞的成活力。在过去10-15年期间，亲脂性阳离子作为线粒体靶向药物已经进行广泛地研究。这样的药物的主要作用是保护靶细胞免于氧化应激和其它应激因素(见例如Lukashev等,2014)。对于SkQ家族的许多化合物(见参考文献3，WO2011059355)以及对于缺少抗氧化剂部分的亲脂性阳离子，例如C12TPP、C12R19等(见WO2011162633和参考文献15,16)，已经显示这些保护性质。因为在这些生物的细胞的外膜上的电势，这些线粒体靶向的(即亲脂，同时带正电荷)化合物可在细菌和真菌内部蓄积。因此，可预期用这些化合物处理细菌或真菌可在应激条件下保护这些生物，和增加它们的成活力。因此，可认为这些亲脂性阳离子化合物不应用作细菌或真菌感染的治疗。因此，对还具有MDR-抑制性质的抗生素存在需要。专利技术简述本专利技术提供还具有MDR-抑制性质的抗生素的药物制剂，和它们用作抗细菌和抗真菌剂的方法。本专利技术人已出人意料地发现，之前显示对细胞具有保护性质的亲脂性阳离子化合物事实上具有对细菌和真菌的抗生素性质，同时具有MDR-抑制性质。一般来说，这样的亲脂性阳离子化合物具有结构式1：其中A是氢原子(H)或具有以下结构的抗氧化剂部分：和/或其还原(即，醌醇)形式其中m是0-3的整数；各个Y是甲基；L是接头基团，其为直链或支链烃链，所述烃链可任选地被一个或多个取代基取代和任选地含有一个或多个双键或三键；和B是亲脂性阳离子。这样的化合物是带电荷的(阳离子)，因此它们以与任何药学上可接受的阴离子(抗衡离子)的盐的形式存在。本专利技术的方法包括给予具有细菌或真菌感染的受试者药学上有效量的本专利技术的一种或多种亲脂性阳离子化合物，任选地与另外一种或多种抗微生物化合物或一种或多种抗微生物剂。附图简述图1显示Pdr5的表达水平影响对C12TPP的抗性。图1A显示本研究中使用的十二烷基三苯基膦C12TPP和其叶绿醌衍生物(SkQ1)的化学结构。图1B显示用指示浓度的C12TPP或SkQ1处理的葡萄糖培养的细胞的结果。图1C显示用指示浓度的C12TPP或SkQ1处理的半乳糖培养的细胞的结果。根据Wilcoxon符号秩非配对检验，与未处理的WT相比，*P<0.05。图2显示C12TPP或能量剥夺增强在酵母细胞中罗丹明6G蓄积。图2A显示酵母细胞的R6G染色通过低浓度的C12TPP而非FCCP得到增强。指数生长的酵母细胞在指示浓度的C12TPP或FCCP存在下用500nMR6G染色。图2B显示加入葡萄糖导致总体荧光降低。从线粒体中保留的R6G观察到弱信号(增强对比)。(代表性图片；线条，5μm)。图3显示C12TPP和SkQ1阻止R6G从酵母细胞流出。图3A显示葡萄糖-诱导的R6G从酵母细胞流出的间接测量。图3B显示葡萄糖-诱导的R6G从AD1-8(MDR-阴性)细胞流出可以忽略。图3C和D显示FCCP(2μM)、C12TPP(2μM)或SkQ1(2μM)抑制葡萄糖-诱导的R6G从酵母细胞流出。图3E显示结果的量化。纵坐标对应于a和b的斜率。图3F显示FCCP(2μM)、C12TPP(2μM)或SkQ1(2μM)抑制葡萄糖-诱导的R6G从用10mMNaN3预处理的酵母细胞流出。根据Wilcoxon符号秩非配对检验，与未处理的WT相比，*P<0.05，**P<0.01。图4显示C12TPP增强Pdr5底物环己酰亚胺D和克霉唑的作用。图4A显示在乙醇(模拟对照)、C12TPP(1μM)、环己酰亚胺D(ChD,0.05μM)或两种化学品的存在下生长的酵母细胞的加倍时间。图4B显示C12TPP(1μM)增加克霉唑(CltrA,60μM)的抑制作用。根据Wilcoxon符号秩配对检验，与未处理的WT相比，*P<0.05。图5显示PDR5基因的过表达增加C12R1从酵母细胞的有效流出。为了测量C12R1流出的相对速率，使用如Knorre等2014的荧光测定法(http://dx.doi.org/10.1016/j.bbrc.2014.07.017)，除了改为R6G能量剥夺细胞用10μMC12R1染色之外。对照实验室菌株W303-1A(WT)和菌株PGAL-PDR5在含半乳糖的培养基上生长(PGAL过表达的条件)。为了抑制PDR5基因，细胞在富含葡萄糖的培养基上生长(PGAL阻抑的条件)。图6显示C12TPP阻止C12R1从酵母细胞流出。C12R1流出速率(图1上荧光增加的斜率)在YPD(酵母蛋白胨葡萄糖；PGAL阻抑的条件)或YPGAL(酵母蛋白胨半乳糖；PGAL过表达的条件)上生长的细胞中定量。在指出时，在补充10μMC12TPP的情况下进行测量。图7显示C12R1促进克霉唑(Cltr)和苯扎氯铵(BnzCl)的抗真菌作用。酵母细胞在含指定的化学品的液体YPD培养基中生长2小时，然后将细胞接种在固体YPD上，在2天后计算出现的菌落形成单位(CFU)的数量。100%对应于添加化学品之前酵母悬浮液的CFU，对照柱对应于在没有化学品进行孵育2小时后CFU的数量。图8显示在存在和不存在SkQ1的情况下枯草芽孢杆菌(B.subtilis)和大肠杆菌(E.coli)的生长曲线，如通过600纳米处吸光度所测量的。抑制剂在零时间点以1-100μM的浓度范围加入。图9显示不同的CnTPP浓度对枯草芽孢杆菌和大肠杆菌生长的影响。零点表明CnTPP的MIC。图10显示在LB培养基中不同的式1化合物对枯草芽孢杆菌的细菌生长的影响，其通过600纳米处的吸光度测量。抑制剂在零时间点以1-100μM的浓度范围加入。图11显示SkQ1对细菌ΔTolC和ΔAcrA和ΔAcrB生长的抗细菌活性。抑制剂在零时间点加入。图12显示CnTPP对细菌ΔTolC菌株生长的抗细菌活性。抑制剂在零时间点加入。图13显示在存在SkQ1的情况下溴乙锭的蓄积。为模拟细胞膜渗漏，将细菌细胞重悬浮于去离子水中。加入溴乙锭(20μg/ml)和在Fluorat-02-Panorama上记录荧光强度变化。为了检测溴乙锭的蓄积，将SkQ1加至50μM的浓度。优选实施方案的详细描述本专利技术涉及具有抗微生物性质的药物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于在受感染的受试者中治疗微生物感染的方法，包括给予所述受试者抗微生物组合物，所述抗微生物组合物包含治疗有效量的一种或多种结构式1的亲脂性阳离子：

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.30 US 62/0051281.一种用于在受感染的受试者中治疗微生物感染的方法，包括给予所述受试者抗微生物组合物，所述抗微生物组合物包含治疗有效量的一种或多种结构式1的亲脂性阳离子：其中A是氢原子(H)或具有以下结构的抗氧化剂部分：和/或其还原(醌醇)形式，其中m是0-3的整数；各个Y是甲基；L是接头基团，其为直链或支链的烃链，所述烃链可任选地被一个或多个取代基取代和任选地含有一个或多个双键或三键；和B是亲脂性阳离子，和药学上可接受的阴离子。2.权利要求1的方法，其中所述一种或多种亲脂性阳离子是SkQ1、SkQ3、SkQ4、SkQ5、SkQR1、SkQRB1、SkQB1、SkQBP1、SkQT、SkQThy、SkQB、CnTPP(其中n是5-12)、CnR1(其中n是4-12)、CnBerb(其中n是4-12)和CnPalm(其中n是4-12)中的一种或多种。3.权利要求1或2的方法，其中所述微生物感染由细菌引起。4.权利要求3的方法，其中所述微生物感染由革兰氏阴性细菌引起。5.权利要求3的方法，其中所述疾病由革兰氏阳性细菌引起。6.权利要求3的方法，其中所述疾病由革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌引起。7.权利要求1或2的方法，其中所述疾病由真菌引起。8.权利要求1或2的方法，其中所述疾病由细菌和真菌引起。9.权利要求1、2、3、4、5、6、7或8的方法，进一步包括给予所述受试者另外一种或多种抗微生物化合物或一种或多种抗微生物剂。10.权利要求9的方法，其中所述另外一种或多种抗微生物化合物是一种或多种抗细菌性抗生素。11.权利要求9的方法，其中所述一种或多种另外的抗微生物化合物是一种或多种抗真菌性化合物。...

【专利技术属性】
技术研发人员：劳伦斯·T·弗里霍夫，MV斯库拉彻夫，FF塞夫林，DA克诺尔，JE卡拉韦瓦，PA纳扎罗夫，YN安托宁科，
申请(专利权)人：劳伦斯·T·弗里霍夫，
类型：发明
国别省市：美国,US