罗非鱼源无乳链球菌重组CBP蛋白疫苗的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种罗非鱼源无乳链球菌重组CBP蛋白疫苗的制备方法及其应用。所述重组CBP蛋白疫苗由罗非鱼源无乳链球菌重组CBP蛋白制备得到。所述罗非鱼源无乳链球菌重组CBP蛋白的氨基酸序列如序列2所示。本发明专利技术以罗非鱼源无乳链球菌为研究对象，从罗非鱼源无乳链球菌基因组中克隆到Cbp基因，与pET28a(+)载体连接构建表达载体，在E.coliBL21(DE3)中进行原核表达和纯化，获得一种特异性强、具有免疫保护效力为56.35％±8.09％的重组CBP蛋白疫苗，为罗非鱼无乳链球菌病的免疫防治奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
罗非鱼源无乳链球菌重组CBP蛋白疫苗的制备方法及其应用
本专利技术属于分子疫苗学
更具体地，涉及一种罗非鱼源无乳链球菌重组CBP蛋白疫苗的制备方法及其应用。
技术介绍
无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)是一种人畜鱼共患革兰氏阳性菌，能引起新生儿脑膜炎、牛乳腺炎和鱼类脑膜脑炎。无乳链球菌能感染多种海水、淡水鱼类并引起死亡，给我国乃至世界水产养殖业造成重大经济损失。因此，研究无乳链球菌相关的防治技术具有很重要的现实意义。目前，在国内已有一些与链球菌疫苗相关的专利。申请号：200580013779.X，专利技术名称：无乳链球菌疫苗公布了一种β溶血性无乳链球菌的完整灭活细胞和该菌培养物的浓缩提取物制备的组合疫苗通过注射和浸泡两种方式对罗非鱼抗无乳链球菌的免疫保护效果分别为80％和35％。申请号：200780025577.6，专利技术名称：抗链球菌的联合疫苗公布了一种联合疫苗，当难辨链球菌和海豚链球菌在疫苗制剂中的比例(基于细胞∶细胞)为20∶1或40∶1时，可得到抗难辨链球菌的64％的相对保护率和抗海豚链球菌的71％的相对保护率。申请号：2010800471本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种罗非鱼源无乳链球菌Cbp基因，其特征在于，其核苷酸序列如序列1所示。

【技术特征摘要】
1.一种罗非鱼源无乳链球菌Cbp基因，其特征在于，其核苷酸序列如序列1所示。2.一种罗非鱼源无乳链球菌重组CBP蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如序列2所示。3.根据权利要求1所述罗非鱼源无乳链球菌重组CBP蛋白，其特征在于，所述重组CBP蛋白是由权利要求1中所述罗非鱼源无乳链球菌Cbp基因编码得到。4.权利要求2或3所述罗非鱼源无乳链球菌重组CBP蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.利用引物对CBP-F和CBP-R，将CBP基因克隆到原核表达系统中，得到含重组质粒pET28a-CBP的工程菌；S2.将含重组质粒pET28a-CBP的工程菌进行扩大培养，纯化回收获得重组CBP蛋白；其中，所述引物CBP-F的序列如序列3所示，引物CBP-R的序列如序列4所示；所述Cbp基因的序列如序列1所示。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤S1的具体方法是：S11.克隆Cbp基因：以罗非鱼源无乳链球菌基因组DNA为模板，以引物CBP-F和CBP-R进行PCR克隆Cbp基因；S12.构建CBP克隆菌株：将克隆的Cbp基因连接到pET28a载体，并转化E.coliDH5α感受态细胞，利用卡那青霉素筛选得到含有重组质粒pET28a-CBP的阳性CBP菌株；S13.构建C...

【专利技术属性】
技术研发人员：李安兴，李云，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东,44