多肽疫苗制造技术

本发明专利技术提供了用于治疗和预防癌症，尤其是预防癌症转移的多肽疫苗。还提供了治疗或预防癌症的方法，以及包含多肽疫苗的药物组合物。其中，所述多肽疫苗包含细胞内癌蛋白的多肽片段。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多肽疫苗
本专利技术涉及细胞生物学、分子生物学和生物化学的领域。本专利技术还涉及医药领域。尤其是，本专利技术涉及疾病尤其是癌症的预防和治疗，以及用于这种用途的组合物。
技术介绍
在过去的二十年中，癌症一直是详尽研究的主题。然而，关于负责癌症转移的基本原因却知之甚少并且大多数类型癌症预防仍然受到限制。因此，迫切需要用来预防癌症转移的有效方式。基于抗体的治疗已证明可有效用于癌症治疗；然而，这种方式已传统上限于由癌细胞表达的细胞外或分泌蛋白U。因此，在文献中已确定了若干潜在的癌症或肿瘤标记物和癌抗原并且对于它们中的一些已开发了抗体疗法。例如，众所周知的癌症疗法赫赛汀(曲妥珠单抗)是单克隆抗体，其可以杀伤HER2-阳性癌细胞。赫赛汀结合于在癌细胞上的HER2(人表皮生长因子受体2)抗原。同样，贝伐珠单抗(Avastin?)是单克隆抗体，其靶向血管内皮生长因子(VEGF)，其为参与新血管形成的生长因子的一种。通过抑制血管发生，贝伐珠单抗阻止肿瘤细胞接受持续供应的血液，从而阻止接受肿瘤生存所必需的氧和营养物质。然而，抗体治疗剂对于不同癌症的适用性不是通用的。已阻止抗体治疗剂的一般使用的限制的一种是抗体分子的大尺寸以及它们的随之而来的不能穿过血浆或细胞膜。在没有修饰的情况下，抗体(包括单克隆抗体)仅通常适用于靶向位于宿主细胞的表面或外部的癌抗原1415。在上述实例中，HER2受体位于细胞表面上，因而可达到通过赫赛汀的抗体结合。同样，VEGF被分泌进入血流，因而能够被贝伐珠单抗结合。大多数致癌蛋白是细胞内蛋白(如细胞内磷酸酶、细胞内激酶、转录因子等)，并且仍然是抗体疗法的方式未充分开发的。以下长期持有的观点:抗体太大以致不能穿透细胞膜，已阻碍抗体疗法的技术用于靶向细胞内蛋白。因而，迫切需要用于治疗和预防癌症转移的有效方式。抗体迄今为止还没有用于靶向细胞内抗原或癌症标记物，这是因为抗体不能穿过细胞膜以及随之而来的无法进入抗原。相比于标准化疗方案，基于抗体的疗法具有更好的特异性，因而具有改善的功效。因为抗体被视为太大以致不能接近细胞内(在细胞内)位置，所以抗体疗法已传统上靶向由癌细胞表达的细胞外(在细胞外或细胞表面)蛋白。然而，大量的致癌蛋白存在于细胞内(如细胞内磷酸酶/激酶和转录因子)，因此没有追求抗体疗法。 我们以前表明，三种不同的抗体可以分别靶向三种细胞内蛋白:PRL_3(肝再生磷酸酶3)，一种癌症相关磷酸酶；EGFP (增强的绿色荧光蛋白)，一种通用报道分子(报告子，reporter);以及mT (多瘤病毒中T (polyomavirus middle T)),多瘤病毒中T癌蛋白(W02011/065923)。然而，仅PRL-3细胞内磷酸酶(一种酶)相关于人癌症转移(参见Sahaet al.，Science294 ; 1343 (2001)和Wang et al., Cancer celll8 ;52_63 (2010))，其它两种细胞内蛋白(EGFP和中T)则用来阐明以下普遍现象:抗体可以靶向细胞内蛋白。然而，癌蛋白用作癌症疫苗是有争议的，因而需要开发改善的癌蛋白癌症疫苗，其是更加特异性的并表现出与同源蛋白的更少的交叉反应以减少副作用，同时实现类似或改善的治疗效果。致癌突变非常普遍地促进多种人癌症。然而，在细胞内蛋白或细胞表面蛋白的胞内结构域中经常检测到这些致癌突变。我们最近的工作提示一种非常规概念:可以通过治疗性抗体或肽接种疫苗来靶向细胞内癌蛋白。在这种新的考虑中，产生相对于那些特定突变的抗体或利用突变肽的接种疫苗可以特异性地除去表达相应的突变靶的癌细胞，但保留正常组织不受伤害。然而，特别相对于迄今为止发现的无数点突变来体外逐个地制备抗体是非常困难的和不实用的。因此，利用突变肽的接种疫苗可以是一个选择。
技术实现思路
如本文所描述的,借助于接种疫苗(vaccination),可以革巴向细胞内癌蛋白，以预防癌症和癌症转移。 如本文所描述的，静脉内(1.v.)注射B16R)或B16F10黑素瘤细胞，接着1.v.注射PRL-3单克隆抗体(mAb)的野生型C57BL6小鼠显示，PRL_3mAb可以减小由表达内源性PRL-3细胞内磷酸酶的B16R)黑素瘤细胞形成的肿瘤S但并不减小由并不表达PRL-3的B16F10黑素瘤细胞形成的那些肿瘤。1.v.注射EGFP-B16R)或EGFP-B16F10细胞，其中两种细胞系均被设计以过表达EGFP，接着1.v.注射EGFP单克隆抗体的C57BL6小鼠显示，不管PRL-3表达状态，EGFP mAb可以根除由EGFP-B16R)和EGFP-B16F10黑素瘤细胞系形成的肿瘤。另外，1.v.注射有mT抗体的多瘤病毒中T(Py-mT)-转基因的年轻雌性显示，mT抗体可以有效地减少表达mT的乳腺肿瘤的形成。此外，和未免疫的小鼠相比，接种有PRL-3或EGFP抗原的C57BL6小鼠显示分别表达PRL-3或EGFP蛋白的转移性肿瘤的形成的显著减少。此外，接种有mT抗原的Py_mT小鼠显著抑制在乳腺中的肿瘤形成。获自194只野生型小鼠的结果表明，借助于抗体疗法和接种疫苗，可以成功阻止由细胞内癌蛋白引起的癌症转移。如本文说明的，相比于用GST免疫的小鼠(阴性对照)，注射有中T蛋白的片段的年轻的PymT转基因小鼠表现出降低的乳腺肿瘤的发生率。此外，用Her2/neU片段(仅包含胞内结构域的片段)对小鼠进行的免疫会抑制由B16R)黑素瘤癌细胞形成的表达Her2/neu的肿瘤的形成。另外，相比于用GST免疫的小鼠(阴性对照)，接种有雌激素受体肽或接种有雌激素受体抗体的MMTV-PymT小鼠具有减少的乳腺肿瘤的负担。因而我们提供了用细胞内癌蛋白的片段来治疗癌症和预防癌症转移的方法。如在本文中所使用的，术语“细胞内癌蛋白”可以包括这样的癌蛋白，其具有胞内区。例如，膜锚定蛋白可以具有细胞外、跨膜、和胞内域(结构域，domain)或区。片段可以是癌蛋白的区(相比于野生型或非致癌蛋白，其包含突变)的片段。突变可以相关于或导致癌症(即致癌突变)。按照本专利技术的一个方面，提供了疫苗疗法的应用，包括用于接种疫苗的细胞内癌蛋白片段以刺激宿主产生其自身抗体以预防肿瘤形成。还提供了在需要其的主体中用于刺激抗细胞内癌蛋白抗体的生产的方法的多肽，该多肽是细胞内癌蛋白的片段，其具有10至150个氨基酸，优选10至100个氨基酸。还提供了在需要其的主体中刺激抗细胞内癌蛋白抗体的生产的方法，包括给予多肽，其是细胞内癌蛋白的具有10至150个氨基酸的片段。上述多肽可以是细胞内的癌蛋白的片段，或癌蛋白的胞内区的片段。上述片段可以包含致癌突变。多肽可以包含多个片段。因此，在一个多肽中可以提供癌蛋白的多于一个的片段。可以将多于一种的多肽给予患者。一些或所有那些多肽可以包含多于一种的癌蛋白片段。一个或多个癌蛋白片段可以是相同癌蛋白的片段，或可以是来自不同癌蛋白的片段。在一些情况下，多肽包含相同片段的多于一个的拷贝。按照本专利技术的另一个方面，我们提供了用于在患有或怀疑患有癌症的个体中治疗癌症，优选转移性癌症，的方法。上述方法可以包括将治疗有效量的细胞内癌蛋白的片段给予个体。细胞内癌蛋白可以已被确定为表达在个体正患有的癌症中。上述片段可以对应本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多肽，用于治疗或预防癌症的方法中，所述多肽是细胞内癌蛋白的片段，具有10至150个氨基酸，优选10至100个氨基酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.02.17 SG 201201158-1;2012.06.21 SG 201204644-1.一种多肽，用于治疗或预防癌症的方法中，所述多肽是细胞内癌蛋白的片段，具有10至150个氨基酸，优选10至100个氨基酸。2.一种多肽，用于在需要其的主体中刺激抗细胞内癌蛋白抗体产生的方法中，所述多肽是所述细胞内癌蛋白的片段，具有10至150个氨基酸，优选10至100个氨基酸。3.根据权利要求1或权利要求2所述用途的多肽，其中，所述多肽是包含致癌突变的片段。4.根据权利要求1至3中任一项所述用途的多肽，其中，所述多肽包含多个片段。5.根据权利要求4所述用途的多肽，其中，所述多肽包含相同癌蛋白的多个片段。6.根据权利要求5所述用途的多肽，其中，所述多肽包含来自两种或更多种癌蛋白的多个片段。7.根据前述权利要求中任一项所述 用途的多肽，其中，所述方法是用于预防或减少癌症转移的方法。8.根据前述权利要求中任一项所述用途的多肽，其中，所述患者患有表达所述细胞内癌蛋白的原发性癌症。9.根据前述权利要求中任一项所述用途的多肽，其中，所述多肽选自以下组:雌激素受体(ER)、HBV 蛋白、HBV X 蛋白、PRL3、PRL-1、VHZ、和 Her2。10.一种用于在癌症患者中预防癌症转移的方法，所述方法包括: a)识别对于所述患者癌症具有特异性的细胞内癌蛋白； b)将所述癌蛋白的10至150个氨基酸的片段给予所述患者。11.一种用于在人中治疗或预防癌症的方法，所述方法包括: a)确定人是否正患有、或可能发展与细胞内癌蛋白相关的癌症； b)给予所述人所述细胞内癌蛋白的片段或基于所述细胞内癌蛋白的片段的肽，所述片段或所述肽的长度是10至150个氨基酸。12.根据权利要求10或权利要求11所述的方法，其中，所述片段包含致癌突变。13.根据权利要求10至12中任一项所述的方法，其中，给予所述患者多个癌蛋白片段。14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述多个癌蛋白片段组合成一个或多个肽，其各自包含多个不同的肽，各自可选地通过肽接头加以连接。15.根据权利要求10至14中任一项所述的方法，其中，诱导所述患者以产生针对所述肽的抗体。16.根据权利要求11至15中任...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾琦，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：新加坡;SG