BACE1的肽抑制剂制造技术

本发明专利技术提供以非经典方式结合活性位点的BACE1的肽抑制剂，以及使用其的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】BACE1的肽抑制剂序列表本申请包含序列表，其已经通过EFS-Web以ASCII格式提交，并且通过引用完全结合在本文中。所述ASCII副本，于2012年9月27日生成，命名为GNE0394P.txt，大小为52,415字节。专利
本专利技术一般涉及作为BACE1拮抗剂的肽，例如，其抑制或减少BACE1活性，并且涉及包含所述肽的组合物。另外的实施方案包括治疗多种神经疾病或病症的方法，以及减少患者中的Aβ多肽的方法。背景淀粉状变性(Amyloidosis)不是一种单一的疾病实体，而是多样化组的进行性疾病过程，其特征在于称为淀粉状蛋白的蜡状、淀粉样蛋白的细胞外组织沉积，淀粉状蛋白积聚在一个或多个器官或机体系统中。随着淀粉状蛋白沉积的积聚，它们开始干扰所述器官或机体系统的正常的功能。存在至少15种不同类型的淀粉状变性。主要形式为没有已知前例的原发性淀粉状变性、伴随一些其他状况的继发性淀粉状变性和遗传性淀粉状变性。多种衰老疾病是基于淀粉状蛋白样蛋白或与淀粉状蛋白样蛋白相关，并且部分特征在于淀粉状蛋白或促进发病机制以及疾病进展的淀粉状蛋白样物质的细胞外沉积的积聚。这些疾病包括，但不限于，神经病症，诸如阿尔茨海默病(Alzheimer′sDisease，AD)，雷维小体痴呆(Lewybodydementia)；唐氏综合征(Down’ssyndrome)；遗传性脑出血伴淀粉状变性(hereditarycerebralhemorrhagewithamyloidosis)(荷兰型)；关岛帕金森-痴呆并发症(GuamParkinson-Dementiacomplex)。基于或与淀粉状蛋白样蛋白相关的其他疾病是进展性核上性麻痹(progressivesupranuclearpalsy)、多发性硬化(multiplesclerosis)、克-雅病(CreutzfeldJacobdisease)、帕金森病、HIV相关的痴呆(HIV-relateddementia)、ALS(肌萎缩性脊髓侧索硬化症(amyotropiclateralsclerosis))、成年型糖尿病(AdultOnsetDiabetes)、老年性心脏淀粉状变性(senilecardiacamyloidosis)、内分泌肿瘤以及其他，包括黄斑变性(maculardegeneration)。多肽β-淀粉状蛋白(Aβ)可能在阿尔茨海默病(AD)的发病机制中起重要作用。Vassar等，J.Neurosci.(神经科学杂志)29：12787-12794(2009)。Aβ多肽在CNS中的积聚导致突触功能障碍、轴突变性和神经元死亡。AD患者的脑表现出显著的神经病理学损伤的特征性病理学，诸如神经原纤维缠结(NFTs)和富含淀粉状蛋白的老年斑。淀粉状蛋白斑的主要成分是Aβ。这些损伤与中枢神经系统(CNS)神经元群体的大量损失相关，并且其进展伴有与AD相关的临床痴呆。Aβ是前体蛋白β淀粉状蛋白前体蛋白(β-APP或APP)的蛋白水解产物。APP是I型跨膜蛋白，其相继被两种蛋白酶，即β-和γ-分泌酶切割。β-分泌酶，被称为β-位淀粉状蛋白前体蛋白切割酶1(β-siteamyloidprecursorproteincleavingenzyme1，BACE1)，其首先切割APP以暴露Aβ的N-端，由此产生称为C99的膜结合的片段。Vassar等，J.Neurosci.(神经科学杂志)，29：12787-12794(2009)和UniProtKB/Swiss-ProtEntryP56817(BACE1_HUMAN)。然后γ-分泌酶能够切割C99产生成熟的Aβ多肽。产生的Aβ具有长度为38个氨基酸至43个氨基酸范围内的异源C端。42个氨基酸形式的Aβ(Aβ42)是原纤维形式的Aβ，并且在患有唐氏综合症的患者中过量产生，并且已经提示其在AD的早期发病机制中起作用。Vassar等，J.Neurosci.(神经科学杂志)29：12787-12794(2009)。因此，由于对其的抑制可能抑制Aβ产生，BACE1已经成为治疗靶标。事实上，BACE1敲除小鼠(BACE1-/-)不产生脑Aβ，这证实了BACE1是负责脑中产生Aβ的主要的酶(如果不是唯一的酶)。Roberds等，HumanMol.Genetics(人分子遗传学)10：1317-1324(2001)。此外，AD模型中的BACE1敲除小鼠不形成淀粉状蛋白斑；认知缺陷和胆碱功能性功能障碍也得到恢复。McConlogue等，J.Biol.Chem.(生物化学杂志)282：26326-26334(2007)；Ohno等，Neuron(神经元)41：27-33(2004)；和Laird等，J.Neurosci.(神经科学杂志)25：11693-11709(2005)。另外，BACE1杂合敲除小鼠具有减少的斑形成，这表明斑减少不需要BACE1活性的完全抑制。McConlogue等，J.Biol.Chem.(生物化学杂志)282：26326-26334(2007)。BACE-1(Hussain，I.等(1999)MolCellNeurosci(分子细胞神经科学)14：419-27；Sinha，S.等(1999)Nature(自然)402：537-40；Vassar，R.等(1999)Science(科学)286：735-41；Yan，R.等(1999)Nature(自然)402：533-7；Lin，X.等(2000)ProcNatlAcadSciUSA(美国国家科学院学报)97：1456-60)及其与底物样拟肽抑制剂OM99-2的复合的结构(Hong，L.等(2000)Science(科学)290：150-3)的发现开启了制药研发的新时代，促进多种类型的BACE1抑制剂的研发。第一波抑制剂是小分子拟肽(Luo，X.等IntJClinExpPathol(临床实验病理学杂志)3：618-28)，其尚待显示临床成功性，部分是由于穿过血脑屏障(BBB)的挑战。随后，多种基于片段和非肽方法已经产生了更适于穿过BBB递送至中枢神经系统(CNS)的化合物(Silvestri，R.(2009)MedResRev(医药研究综述)29：295-338；Luo，X.等(2010)IntJClinExpPathol(国际临床实验病理学杂志)3；618-28)。最近，已经出现了抗体的研发(Pul，R.等(2011)ExpertOpinBiolTher(生物治疗的专家观点)11：343-57)。第一类靶向Aβ并且将其从循环中清除，作用为调节CNS中Aβ水平的接收池(sink)。最新一类抗体通过结合在外部靶向BACE1本身并且作用为非竞争性抑制剂(Atwal，J.K.等(2011)SciTranslMed3：84ra43；Zhou，L.等(2010)J.Biol.Chem.(生物化学杂志)286：8677-8687)。在小鼠和食蟹猴中，抗-BACE1不仅减少外周Aβ水平，而且还令人惊讶地减少在脑脊液(CSF)中的Aβ水平。进一步改造该抗体通过双特异性抗-BACE1抗-转铁蛋白抗体结合受体介导的穿过BBB的胞转作用已经导致CNS中Aβ更有效的药效学减少(Yu本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特异性结合BACE1的分离的多肽，其中所述多肽包含氨基酸序列X1‑S‑X2‑Y‑C‑R‑L‑X3‑X4‑X5‑X6‑C‑(X7)n(SEQ ID NO：6)，其中X1是谷氨酸或天冬氨酸；其中X2是甲硫氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或缬氨酸；其中X3是亮氨酸或甲硫氨酸；其中X4是甘氨酸、丝氨酸或丙氨酸；其中X5是亮氨酸、异亮氨酸或缬氨酸；其中X6是甘氨酸或丙氨酸；其中X7是甘氨酸、天冬氨酸或谷氨酸，并且其中n是0或1。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.10.14 US 61/627,5731.一种分离的多肽，其序列为NEESMYCRLLGIGCG(SEQIDNO:16)。2.权利要求1的分离的多肽，其中所述多肽与细胞毒性剂、增强细胞进入的氨基酸序列标记或通常经历通过血脑屏障的吸收介导的胞转作用或受体介导的胞转作用的蛋白的氨基酸序列缀合或融合。3.权利要求1-2中任一项的分离的多肽，其中所述多肽抑制内源性BACE1蛋白水解活性。4.编码权利要求1-3中任一项的多肽的分离的多核苷酸或其互补序列。5.包含权利要求4的多核苷酸的载体。6.包含权利要求5的载体的宿主细胞。7.一种制备多肽的方法，所述方法包括在多核苷酸表达的条件下培养权利要求6的宿主细胞。8.特异性结合权利要求1-3中任一项的多肽的抗体。9.包含权利要求1-3中任一项的多肽的试剂盒。10.包含权利要求1-3中任一项的多肽和药用载体的药物制剂。11.有效量的权利要求1-3中任一项的多肽在制备治疗患有神经疾病或病症的个体的药物中的应用。12.有效量的权利要求1-3中任一项的多肽在制备减少患有或有风险患上神经疾病或病症的患者中的淀粉状蛋白斑的药物中的应用。13.有效量的权利要求1-3中任一项的多肽在制备抑制患有或有风险发生神经疾病或病症的患者中的淀粉状蛋白斑形成的药物中的应用。14.权利要求11-13中任一项的应用，其中所述神经疾病或病症选自由下列组成的组：阿尔茨海默病(AD)，外伤性脑损伤，卒中，青光眼，肌营养不良(MD)，多发性硬化(MS)，肌萎缩侧索硬化(ALS)，囊性纤维化，安吉尓曼综合征，利德尔综合征，佩吉特病，雷维小体病，脊髓灰质炎后综合征，夏伊-德雷格综合征，橄榄体脑桥小脑萎缩，帕金森病，多系统萎缩，纹状体黑质变性，核上性麻痹，牛海绵状脑病，痒病，克-雅综合征，库鲁病，格-施-沙病，慢性消耗性疾病，家族致命性失眠症，延髓性麻痹，运动神经元病，卡纳范病，亨廷顿病，神经元蜡样质脂褐质沉积病，亚历山大病，图雷特综合征，门克斯扭结发综合征，科凯恩综合征，哈勒沃登-施帕茨综合征，拉福拉病，雷特综合征，肝豆状核变性，莱施-奈恩综合征和翁-隆综合征，皮克病和脊髓小脑性共济失调。15.权利要求11-13任一项的应用，其中所述神经疾病或病症是痴呆。16.权利要求14的应用，其中所述神经疾病或病症选自由阿尔茨海默病、卒中、外伤性脑损伤和青光眼组成的组。17.有效量的权利要求1-3中任...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗伯特·A·拉扎勒斯，张映楠，王伟茹，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH