【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开广义上涉及一种用于检测sars-cov-2特异性抗体存在的纳米传感器。还提供了一种包括多个纳米传感器的测定法，以及涉及使用纳米传感器的多种方法。
技术介绍
1、由sars-cov-2导致的持续流行凸显了快速、准确且符合成本效益的诊断测定法的必要性，以遏制covid-19在国家和全球范围内的传播。除了分子和抗原测试法之外，血清学测定法在实现及时处理和有效应对疫情爆发方面也发挥着关键作用。(1)此类测试法检测因sars-cov-2感染而产生的抗体，在一些患者中，早在症状出现后2天即可检测到这些抗体。(2,3)由于抗体在生物体液中的存留比病毒rna或抗原长得多，因此抗体的存在可以为当前的暴露、病情进展以及过去的感染或免疫提供信息。(4)因此，血清学测试在流行病学监测中至关重要，用于识别因无症状感染或病情轻微而尚未确诊的sars-cov-2感染个体，从而为更好地了解covid-19传播动态提供重要信息。(5,6)免疫学测定法还可以补充抗原或分子测试法，特别是在感染的后期，此时病毒载量在脱落和血清转换后显著降低。(7-9)另外，由于在许多国家已经施用了covid-19疫苗剂量，因此血清学测定法可以成为评估疫苗接种后疫苗有效性和体液应答动力学的关键工具。(10-12)。
2、迄今为止，大多数检测sars-cov-2特异性抗体的血清学测试法都是基于采用重组冠状病毒蛋白的酶联免疫吸附测定法(elisa)或化学发光测定法(clia)。(13,14)。然而，就测定形式而言，经典的免疫测定法是劳动密集型的，并且需要多种试剂以及长时间
技术实现思路
1、一方面，提供了一种用于检测sars-cov-2抗体的纳米传感器，其包括使用一种或多种源自sars-cov-2的刺突(s)蛋白或核衣壳(n)蛋白的b细胞线性肽表位官能化的金属纳米颗粒。
2、在一个实施方案中，一种或多种表位与纳米颗粒表面缀合：
3、a)通过生物素-链霉亲和素相互作用，或者
4、b)通过巯基-金属相互作用，其中纳米颗粒涂覆有包含至少4个氨基酸和至少一个半胱氨酸残基的间隔子。
5、在一个实施方案中，一种或多种表位通过生物素-链霉亲和素相互作用而缀合，例如其中金属纳米颗粒涂覆有链霉亲和素(sa)并且表位经过生物素化。
6、在一个实施方案中，一种或多种表位通过巯基-金属相互作用而缀合，例如其中金属纳米颗粒涂覆有巯基化的间隔子并且表位经过巯基化。
7、在一个实施方案中，间隔子包含氨基酸序列calnn。
8、在一个实施方案中，金属选自于由下列组成的组，即金、银以及金和银的组合，例如au50ag50。有利的是，本专利技术人已经证明包含这些金属的金属纳米颗粒特别适用于所公开的纳米传感器。
9、在一个实施方案中，金属纳米颗粒是金纳米颗粒(aunp)。
10、在一个实施方案中，表位源自刺突(s)蛋白。
11、在一个实施方案中，表位源自刺突蛋白的s1或s2亚基。
12、在一个实施方案中，表位源自刺突蛋白的s2亚基。
13、在一个实施方案中，表位包含选自于由下列组成的组中的氨基酸序列：
14、·tesnkkflpfqqfgrdia(s14p5)(seq id no:3)、
15、·giaveqdkntqevfaqvk(s20p2)(seq id no:4)、
16、·pskpskrsfiedllfnkv(s21p2)(seq id no:5)、
17、·nnaaivlqlpqgttlpkg(n4p5)(seq id no:6)，以及
18、·与上述之一存在至少95％同一性的氨基酸序列。
19、在一个实施方案中，表位包含选自于由下列组成的组中的氨基酸序列：
20、·tesnkkflpfqqfgrdia(s14p5)(seq id no:3)、
21、·giaveqdkntqevfaqvk(s20p2)(seq id no:4)、
22、·pskpskrsfiedllfnkv(s21p2)(seq id no:5)，以及
23、·与上述之一存在至少95％同一性的氨基酸序列。
24、在一个实施方案中，表位包含选自于由下列组成的组中的氨基酸序列：
25、·tesnkkflpfqqfgrdia(s14p5)(seq id no:3)、
26、·pskpskrsfiedllfnkv(s21p2)(seq id no:5)，以及
27、·与上述之一存在至少95％同一性的氨基酸序列。
28、在一个实施方案中，表位包含氨基酸序列tesnkkflpfqqfgrdia(s14p5)或与其存在至少95％同一性的氨基酸序列。
29、在一个实施方案中，使用至少两种不同的表位对纳米颗粒进行官能化，诸如2至20种不同的表位，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种不同的表位。
30、在一个实施方案中，使用两种不同的表位对纳米颗粒进行官能化。
31、在一个实施方案中，至少一种表位源自刺突蛋白的s1亚基，并且至少一种其他表位源自刺突蛋白的s2亚基。
32、在一个实施方案中，两种不同的表位是tesnkkflpfqqfgrdia(s14p5)(seq id no:3)或与其存在至少95％同一性的氨基酸序列，以及pskpskrsfiedllfnkv(s21p2)(seq idno:5)或与其存在至少95％同一性的氨基酸序列。
33、在一个实施方案中，两种不同的表位是tesnkkflpfqqfgrdia(s14p5)或与其存在至少95％同一性的氨基酸序列，以及giaveqdkntqevfaqvk(s20p2)(seq id no:4)或与其存在至少95％同一性的氨基酸序列。
34、在一个实施方案中，使用适于钝化纳米颗粒以对抗生物流体(例如血清、血液或血浆)的物质对纳米颗粒进行钝化，例如通过使用聚合物层来涂覆纳米颗粒。
35、在一个实施方案中，通过使用聚乙二醇(peg)涂覆纳米颗粒来钝化纳米颗粒。
36、一方面，提供了一种用于检测样品中sars-cov-2特异性抗体的存在的体外测定法，包括多个如上文定义的纳米传感器。
37、在一个实施方案中，该测定法进一步包括以下一种或多种：稳定剂(例如tween20)、缓冲剂(例如pbs)、对照抗体(例如sars-cov-2抗体、sars-cov抗体或正常人igg)、微孔板及其组合。
38、一方面，提本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于检测SARS-CoV-2特异性抗体的纳米传感器，其包含用源自SARS-CoV-2的刺突(S)蛋白或核衣壳(N)蛋白的一个或多个B细胞线性肽表位官能化的金属纳米颗粒。
2.根据权利要求1所述的纳米传感器，其中所述一个或多个表位通过以下与所述纳米颗粒表面缀合：
3.根据权利要求2所述的纳米传感器，其中所述一个或多个表位通过生物素-链霉亲和素相互作用缀合，例如其中所述金属纳米颗粒涂覆有链霉亲和素(SA)并且所述表位是生物素化的。
4.根据权利要求2所述的纳米传感器，其中所述一个或多个表位通过巯基-金属相互作用缀合，例如其中所述金属纳米颗粒涂覆有巯基化的间隔子并且所述表位是巯基化的。
5.根据权利要求2或4所述的纳米传感器，其中所述间隔子包含氨基酸序列CALNN。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的纳米传感器，其中所述金属选自下组：金、银以及金和银的组合，例如Au50Ag50。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的纳米传感器，其中所述金属纳米颗粒是金纳米颗粒(AuNP)。
8.根据权利要求1
9.根据权利要求1至8中任一项所述的纳米传感器，其中所述表位源自刺突蛋白的S1或S2亚基，特别是S2亚基。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的纳米传感器，其中所述表位包含选自下组的氨基酸序列：
11.根据权利要求1至10中任一项所述的纳米传感器，其中所述表位包含选自下组的氨基酸序列：
12.根据权利要求1至11中任一项所述的纳米传感器，其中所述表位包含选自下组的氨基酸序列：
13.根据权利要求1至12中任一项所述的纳米传感器，其中所述表位包含氨基酸序列TESNKKFLPFQQFGRDIA(S14P5)(SEQ ID NO:3)或与其至少95％相同的氨基酸序列。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的纳米传感器，其中使用至少两种不同的表位对所述纳米颗粒进行官能化，诸如2至20种不同的表位，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种不同的表位。
15.根据权利要求14所述的纳米传感器，其中使用两种不同的表位对所述纳米颗粒进行官能化。
16.根据权利要求14或15所述的纳米传感器，其中至少一个表位源自刺突蛋白的S1亚基，并且至少一个其他表位源自刺突蛋白的S2亚基。
17.根据权利要求14至16中任一项所述的纳米传感器，其中所述两种不同的表位是TESNKKFLPFQQFGRDIA(S14P5)(SEQ ID NO:3)或与其至少95％相同的氨基酸序列，以及PSKPSKRSFIEDLLFNKV(S21P2)(SEQ ID NO:5)或与其至少95％相同的氨基酸序列。
18.根据权利要求14至16中任一项所述的纳米传感器，其中所述两种不同的表位是TESNKKFLPFQQFGRDIA(S14P5)(SEQ ID NO:3)或与其至少95％相同的氨基酸序列，以及GIAVEQDKNTQEVFAQVK(S20P2)(SEQ ID NO:4)或与其至少95％相同的氨基酸序列。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的纳米传感器，其中所述纳米颗粒经过钝化，例如用适于钝化所述纳米颗粒以对抗生物流体(例如血清、血液或血浆)的物质来涂覆所述纳米颗粒，例如通过用聚合物层来涂覆所述纳米颗粒。
20.根据权利要求19所述的纳米传感器，其中通过用聚乙二醇(PEG)涂覆纳米颗粒来钝化所述纳米颗粒。
21.一种用于检测样品中SARS-CoV-2特异性抗体的存在的体外测定法，其包括多个根据权利要求1至20中任一项所述的纳米传感器。
22.根据权利要求21所述的测定法，其进一步包括以下一项或多项：稳定剂(例如Tween20)、缓冲剂(例如PBS)、对照抗体(例如SARS-CoV-2抗体、SARS-CoV抗体或正常人IgG)、微孔板及其组合。
23.一种检测样品中SARS-CoV-2特异性抗体的存在的体外方法，其包括使所述样品与多个根据权利要求1至20中任一项所述的纳米传感器接触，并检测纳米颗粒聚集的程度。
24.一种诊断受试者患有SARS-CoV-2感染的体外方法，其包括：
25.一种治疗经鉴定为患有SARS-CoV-2感染的受试者的方法，其包括：
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述治疗剂选自下组：PaxlovidTM(奈玛特韦和利托那韦)、莫努匹韦...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于检测sars-cov-2特异性抗体的纳米传感器，其包含用源自sars-cov-2的刺突(s)蛋白或核衣壳(n)蛋白的一个或多个b细胞线性肽表位官能化的金属纳米颗粒。
2.根据权利要求1所述的纳米传感器，其中所述一个或多个表位通过以下与所述纳米颗粒表面缀合：
3.根据权利要求2所述的纳米传感器，其中所述一个或多个表位通过生物素-链霉亲和素相互作用缀合，例如其中所述金属纳米颗粒涂覆有链霉亲和素(sa)并且所述表位是生物素化的。
4.根据权利要求2所述的纳米传感器，其中所述一个或多个表位通过巯基-金属相互作用缀合，例如其中所述金属纳米颗粒涂覆有巯基化的间隔子并且所述表位是巯基化的。
5.根据权利要求2或4所述的纳米传感器，其中所述间隔子包含氨基酸序列calnn。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的纳米传感器，其中所述金属选自下组：金、银以及金和银的组合，例如au50ag50。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的纳米传感器，其中所述金属纳米颗粒是金纳米颗粒(aunp)。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的纳米传感器，其中所述表位源自刺突蛋白。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的纳米传感器，其中所述表位源自刺突蛋白的s1或s2亚基，特别是s2亚基。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的纳米传感器，其中所述表位包含选自下组的氨基酸序列：
11.根据权利要求1至10中任一项所述的纳米传感器，其中所述表位包含选自下组的氨基酸序列：
12.根据权利要求1至11中任一项所述的纳米传感器，其中所述表位包含选自下组的氨基酸序列：
13.根据权利要求1至12中任一项所述的纳米传感器，其中所述表位包含氨基酸序列tesnkkflpfqqfgrdia(s14p5)(seq id no:3)或与其至少95％相同的氨基酸序列。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的纳米传感器，其中使用至少两种不同的表位对所述纳米颗粒进行官能化，诸如2至20种不同的表位，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种不同的表位。
15.根据权利要求14所述的纳米传感器，其中使用两种不同的表位对所述纳米颗粒进行官能化。
16.根据权利要求14或15所述的纳米传感器，其中至少一个表位源自刺突蛋白的s1亚基，并且至少一个其他表位源自刺突蛋白的s2亚基。
17.根据权利要求14至16中任一项所述的纳米传感器，其中所述两种不同的表位是tesnkkflpfqqfgrdia(s14p5)(seq id no:3)或与其至少95％相同的氨基酸序列，以及pskpskrsfiedllfnkv(s21p2)(seq id no:5)或与其至少95％相同的氨基酸序列。
18.根据权利要求14至16中任一项所述的纳米传感器，其中所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：T·T·S·林，欧先扬，苏小笛，L·苏塔莉，K·M·M·昂，L·F·P·恩格，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。