一种快速检测大肠菌群的测试片及其制备方法、检测方法技术

本发明专利技术提供一种快速检测大肠菌群的测试片，包括下层底板，珍珠纸，上层薄膜组件和大肠菌群特征显色液体培养基，所述珍珠纸中间具有圆形凹槽，所述圆形凹槽内均匀分布有大肠菌群特征显色液体培养基。本发明专利技术快速检测大肠菌群的测试片具有目标菌落易于分辨，显色清晰，结果判定简单、检测结果可靠、检测时间短、操作简便、成本低廉等优势，可在微生物检测中发挥重要作用。

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测大肠菌群的测试片及其制备方法、检测方法
本专利技术属于快速检测领域，涉及微生物检测技术，具体涉及一种快速检测大肠菌群的测试片，以及该测试片制备方法、检测方法。
技术介绍
大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。目前国内进出口食品中大肠菌群检测方法主要采用国家标准和原国家商检局制订的行业标准。国标和行标两个方法在检测程序上略有不同，国标法具体操作参见GB4789.3-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》，行业标准法具体操作参见SN0169-92《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》，这两种检测方法具有检测结果准确、可靠的特点，是经典的微生物检测和鉴定方法，但是这两种方法耗时长、培养基需要现配置，操作步骤繁琐，难以满足快速检测的实际需求。纸片法的出现，弥补了国标方法检测的缺点，逐步成为微生物检测和鉴定的主要方法和标准，2007年，PetrifilmTM测试片被正式列为中国出入境检验检疫行业标准，该方法正逐渐被越来越多的食品生产加工企业及各类检测机构所认可。目前，国内长沙市宇驰检测技术有限公司2014年09月17日公开了一项授权公开号为CN203833945U，名称为大肠菌群和/或大肠菌群测试片的技术专利，该专利采用位于底片上的印有方格的无纺布层，位于无纺布层上的培养基和含有葡萄糖苷酶指示剂的盖膜，该技术专利技术存在目标菌落在无纺布上扩散生长菌落边缘模糊，影响检测结果判读的缺点。
技术实现思路
为了解决现有技术存在的大肠菌群测试片存在的目标菌落在无纺布上扩散生长，菌落边缘模糊，结果判读不准的问题，本专利技术提供了一种快速检测大肠菌群的测试片及其制备方法、检测方法。技术方案：一种快速检测大肠菌群的测试片，包括下层底板4，珍珠纸2，上层薄膜组件1和大肠菌群特征显色液体培养基，所述珍珠纸2中间具有圆形凹槽3，所述下层底板4、珍珠纸2、上层薄膜组件1通过不干胶粘贴，所述圆形凹槽3内均匀分布有大肠菌群特征显色液体培养基。所述大肠菌群特征显色液体培养基每100mL含有胰蛋白胨1.0～3.0g、氯化钠0.1～1.0g、乳糖1.5～3.5g、胆盐0.1～0.4g、酵母膏粉0.2～1.0g、磷酸氢二钾0.15～0.5g、磷酸二氢钾0.15～0.5g、冷水可溶性凝胶0.5～2g，抑菌剂混合物150～500IU/mL、显色酶解底物混合剂0.02～0.05g。所述显色酶解底物混合剂由5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷、2,3,5-三苯基氯化四氮唑、3-吲哚基-beta-D-吡喃半乳糖苷按重量比2:1:1混合组成。所述抑菌剂混合物为胆盐与结晶紫的混合物，胆盐：结晶紫重量比为80:1。所述的测试片上层薄膜组件1上方粘贴有测试片标签5。本专利技术的另一个目的还提供了一种快速检测大肠菌群的测试片的制备方法，包括如下步骤：a.配制大肠菌群特征显色液体培养基：每100mL按照以下方式配制，称量胰蛋白胨1.0～3.0g、氯化钠0.1～1.0g、乳糖1.5～3.5g、胆盐0.1～0.4g、酵母膏粉0.2～1.0g、磷酸氢二钾0.15～0.5g、磷酸二氢钾0.15～0.5g、冷水可溶性凝胶0.5～2g，于锥形瓶中加蒸馏水100mL搅拌溶解，在121℃高压灭菌锅条件下灭菌15min，冷却至室温后，依次加入经过滤灭菌的抑菌剂混合物15000～50000IU及显色酶解底物混合剂0.02～0.05g，得到大肠菌群特征显色液体培养基，在0～4℃下冷藏备用；b.各组件的前处理上层薄膜组件1处理：辐照，剂量8KGy，使用前紫外灭菌30min；下层底板4和珍珠纸2：下层底板4与珍珠纸2粘贴贴合在一起后，辐照，剂量8KGy，使用前用紫外灭菌30min；c.大肠菌群特征显色液体培养基添加：将步骤b中经紫外灭菌后的下层底板4和珍珠纸2结合部件水平放置在水平台面上，珍珠纸2中间圆形凹槽3开口向上，吸取1～3mL大肠菌群特征显色液体培养基添加于圆形凹槽3内，使培养基均匀分布，无菌条件下烘干后，置于0～4℃的无菌冷藏箱内，备用；d.组装测试片：将经上述步骤b、c后得到的测试片组件上贴上经步骤a处理后的上层薄膜组件1，即得到快速检测大肠菌群的测试片。本专利技术还提供了一种用快速检测大肠菌群的测试片检测样品中大肠菌群的方法，包括以下步骤：a.样品前处理；b.用上述快速检测大肠菌群的测试片进行接菌培养；c.分析检测结果。有益效果：1.本专利技术快速检测大肠菌群的测试片，与现有大肠菌群测试片相比，菌落易于分辨，分布均匀，显色清楚，避免了因扩散严重而导致计数结果不准确，避免了人为操作不当引起的误差。2.通过培养基优化，获得了颜色均一，杂质少，培养效果好的培养基；通过将待测样品直接接种于测试片上，实现对待测样品中大肠菌群的快速培养和检测。3.本专利技术快速检测大肠菌群测试片具有制备方法简单，成本低廉，能够自动化生产。使用方便，可以长期存放，大大节省培养基配置、培养皿灭菌、清洗等处理的时间，降低了劳动强度，缩短了检测时间。附图说明图1为本专利技术测试片示意图；1-上层薄膜组件；2-珍珠纸；3-圆形凹槽；4-下层底板；5-测试片标签。图2为本专利技术测试片检测阳性大肠菌群样品的圆形凹槽内的显色图。具体实施方式为了进一步理解本专利技术，下面结合实施例对本专利技术优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本专利技术的特征和优点，而不是对本专利技术权利要求的限制，本专利技术试剂如无特别说明，均为常规试剂。实施例1快速检测大肠菌群的测试片的组成如图1所示，一种快速检测大肠菌群的测试片，包括下层底板4，珍珠纸2，上层薄膜组件1，测试片标签5及大肠菌群特征显色液体培养基。下层底板4，珍珠纸2及上层薄膜组件1为长方形，珍珠纸2中间有圆形凹槽3，圆形凹槽3内均匀分布有大肠菌群特征显色液体培养基。每100mL大肠菌群特征显色液体培养基中含有胰蛋白胨1.0～3.0g、氯化钠0.1～1.0g、乳糖1.5～3.5g、胆盐0.1～0.4g、酵母膏粉0.2～1.0g、磷酸氢二钾0.15～0.5g、磷酸二氢钾0.15～0.5g、冷水可溶性凝胶0.5～2g，抑菌剂混合物150～500IU/mL、显色酶解底物混合剂0.02～0.05g。抑菌剂混合物为胆盐和结晶紫，重量比为80:1。显色酶解底物混合剂为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷、2,3,5-三苯基氯化四氮唑、3-吲哚基-beta-D-吡喃半乳糖苷的混合物，重量比为2:1:1。冷水可溶性凝胶为重量比1:1的黄原胶和卡拉胶的混合物。大肠菌群特征显色液体培养基的成分，100mL，见表1表1大肠菌群特征显色液体培养基成分，100mL上述试剂药品均购置于青岛海博生物技术有限公司和广东环凯微生物科技有限公司。珍珠纸2，中间具有圆形凹槽3，长×宽×厚为90×70×1.5mm，圆形凹槽的R＝58mm。上本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速检测大肠菌群的测试片，其特征在于包括下层底板(4)，珍珠纸(2)，上层薄膜组件(1)和大肠菌群特征显色液体培养基，所述珍珠纸(2)中间具有圆形凹槽(3)，所述下层底板(4)、珍珠纸(2)、上层薄膜组件(1)通过不干胶粘贴，所述圆形凹槽(3)内均匀分布有大肠菌群特征显色液体培养基。

【技术特征摘要】
1.一种快速检测大肠菌群的测试片，其特征在于包括下层底板(4)，珍珠纸(2)，上层薄膜组件(1)和大肠菌群特征显色液体培养基，所述珍珠纸(2)中间具有圆形凹槽(3)，所述下层底板(4)、珍珠纸(2)、上层薄膜组件(1)通过不干胶粘贴，所述圆形凹槽(3)内均匀分布有大肠菌群特征显色液体培养基。2.根据权利要求1所述的快速检测大肠菌群的测试片，其特征在于所述大肠菌群特征显色液体培养基每100mL含有胰蛋白胨1.0～3.0g、氯化钠0.1～1.0g、乳糖1.5～3.5g、胆盐0.1～0.4g、酵母膏粉0.2～1.0g、磷酸氢二钾0.15～0.5g、磷酸二氢钾0.15～0.5g、冷水可溶性凝胶0.5～2g，抑菌剂混合物150～500IU/mL、显色酶解底物混合剂0.02～0.05g。3.根据权利要求2所述的快速检测大肠菌群的测试片，其特征在于所述显色酶解底物混合剂由5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷、2,3,5-三苯基氯化四氮唑、3-吲哚基-beta-D-吡喃半乳糖苷按重量比2:1:1混合组成。4.根据权利要求2或3所述的快速检测大肠菌群的测试片，其特征在于所述抑菌剂混合物为胆盐与结晶紫的混合物，胆盐：结晶紫重量比为80:1。5.根据权利要求1所述的快速检测大肠菌群的测试片，其特征在于所述的测试片上层薄膜组件(1)上方粘贴有测试片标签(5)。6.一种权利要求1～5任一项所述的快速检测大肠菌群的测试片的制备方法，包括如下步骤：a.配制大肠菌群特征显色液体培养基：每100mL按照以下...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯才伟，何方洋，万宇平，湛剑龙，侯璐伟，周绘，周小江，贾玲玲，付浩，席芸芸，王吉平，易重任，李文馨，
申请(专利权)人：贵州勤邦食品安全科学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州,52