制备低过敏性天然橡胶胶乳和脱蛋白天然橡胶胶乳的方法及低过敏性天然橡胶和脱蛋白天然橡胶技术

一种制备低过敏性天然橡胶胶乳的方法，包括在天然橡胶胶乳中加入具有肽链端解酶活性的蛋白酶，将天然橡胶胶乳陈化，从而将胶乳中的蛋白质分解到检测不到数均分子量为４５００或更高的蛋白质及其分解产物的程度；一种制备低过敏性脱蛋白天然橡胶胶乳的方法，包括在天然橡胶胶乳中加入碱性蛋白酶，分解胶乳中的蛋白质，加入具有肽链端解酶活性的蛋白酶，进一步分解胶乳中的蛋白质及其分解产物，并去除蛋白质及其分解产物；一种通过蛋白质分解处理得到的低过敏性天然橡胶，其中检测不到数均分子量为４５００或更高的蛋白质及其分解产物；及一种通过蛋白质分解处理和去除处理得到的脱蛋白天然橡胶。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及引起过敏性反应可能性较小的天然橡胶胶乳的制备方法和引起过敏性反应可能性较小的脱蛋白天然橡胶胶乳的制备方法，及涉及低过敏性天然橡胶和脱蛋白天然橡胶。
技术介绍
因为如大拉伸、高弹性和强膜强度这样的特征，天然橡胶被广泛应用于各种领域，例如家用器具如手套，医用器具如外科手套及各种导管，哺乳器具，避孕设备等。最近报道当使用天然橡胶制造的医用器具如外科手套和各种导管时，引起直接(I型)过敏性反应，它显示如呼吸困难症状和过敏性反应症状(例如血管水肿、荨麻症、发绀等)，认为直接过敏性反应是由天然橡胶中作为一种抗原的蛋白质引起的。因此，最近进行了高度去除天然橡胶胶乳中蛋白质的试验，及日本专利号2,905,005叙述了一种在天然橡胶胶乳中加入蛋白水解酶如碱性蛋白酶和一种表面活性剂的方法进行脱蛋白处理，并通过离心处理充分洗涤胶乳。根据上述专利发表的方法，天然橡胶中的蛋白质可被高度分解和去除。具体地，天然橡胶中所含蛋白质的数量用氮含量(N％)来表示，由Kjeldahl的方法测定，蛋白质可被控制到非常低的数值如0.02％或更少。一般认为天然橡胶是具有数均分子量<Mn>1,000,000～2,500,000的高分子组分和具有数均分子量100,000～200,000的低分子组分的混合物，低分子组分通过天然橡胶所含的肽分子相互结合而形成前者高分子组分。认为低分子组分是通过原始生物合成形成的，假设其分子量是100,000，及一个分子间结合一个肽分子，即以低分子组分的一个橡胶分子为基础结合一个氮原子(原子量14)，则天然橡胶的氮含量是0.014％。因此认为，即使经过高度脱蛋白处理，它不可避免地剩余大约0.02％的氮。在经过上述发表方法的脱蛋白处理的情况下，由处理过的天然橡胶胶乳形成的橡胶薄膜的红外吸收光谱中未观察到在328℃m-1的多肽特征峰。因此发现通过上述发表的方法达到了蛋白质的高度分解和去除。然而，最新研究表明，即使通过包括上述发表方法的各种常规已知的脱蛋白处理来分解和去除蛋白质，仍然存在显示过敏性反应的可能性。
技术实现思路
根据本专利技术者(i)通过蛋白质分析系统完成分析，以确定经过常规方法脱蛋白处理的天然橡胶胶乳中剩余蛋白质及其分解产物的程度，蛋白分析系统包括一个飞行时间(TOF)型质谱仪和一个二维表面修饰芯片(decorativechip)的组合，和(ii)基于抗原-抗体反应用人类患者血清完成体外测定，代替常规的肤斑试验体内测定，以确定经过常规方法脱蛋白处理的天然橡胶胶乳的过敏性反应。结果发现(I)剩余具有数均分子量<Mn>为大约4500～4700的蛋白质或蛋白质分解产物，并且该蛋白质没有充分分解，及(II)含有过敏性蛋白质，甚至在脱蛋白处理后其数量仍足以引起直接过敏性反应。在本专利技术中术语“过敏性蛋白质”的定义如下天然橡胶胶乳样品中任何蛋白质及其分解产物(下文中称作“全蛋白质”)包含“抗原蛋白质”，该“抗原蛋白质”能够在人血清中产生抗体。在人血清中产生的抗体被归类为IgE-抗体，IgE-抗体能够引起过敏性反应，而不同于IgE-抗体的抗体不能引起过敏性反应。在“抗原蛋白质”中，能够产生引起过敏性反应的IgE-抗体的抗原蛋白质被称作“过敏性蛋白质”，以区别其他于抗原蛋白质。这样，本专利技术的一个目标是提供一种制备低过敏性天然橡胶胶乳的方法，该胶乳基本上不包含过敏性蛋白质，因此引起过敏性反应的可能性较小。本专利技术的另一个目标是提供一种制备脱蛋白天然橡胶胶乳的方法，该胶乳基本上不包含过敏性蛋白质，因此引起过敏性反应的可能性较小。本专利技术的再一个目标是提供一种天然橡胶胶乳，因为蛋白质高度分解，该胶乳引起过敏性反应的可能性较小。本专利技术进一步的目标是提供一种脱蛋白橡胶胶乳，因为蛋白质高度分解和去除，该胶乳引起过敏性反应的可能性较小。专利技术概述(I)本专利技术制备低过敏性天然橡胶胶乳的方法具有的特征是该方法包括在天然橡胶胶乳中加入一种有肽链端解酶活性的蛋白酶并将该天然橡胶胶乳陈化，从而使胶乳中的蛋白质分解到检测不到数均分子量为4500或大于4500的蛋白质和蛋白质分解产物的程度。(II)本专利技术制备脱蛋白天然橡胶胶乳的方法具有的特征是该方法包括在天然橡胶胶乳中加入一种碱性蛋白酶，从而分解胶乳中的蛋白质；加入有肽链端解酶活性的蛋白酶，从而进一步分解胶乳中的蛋白质及其分解产物，并去除蛋白质及其分解产物。(III)本专利技术的低过敏性天然橡胶具有的特征是通过分解处理蛋白质得到的天然橡胶中检测不到数均分子量为4500或大于4500的蛋白质和蛋白质分解产物。(IV)本专利技术脱蛋白天然橡胶具有的特征是通过蛋白质的分解处理和去除处理得到的天然橡胶中，蛋白质的含量依据氮含量为0.02％或更少，红外吸收光谱上辨认不到在3280cm-1的吸收，及检测不到数均分子量为4500或大于4500的蛋白质和蛋白质分解产物。用于常规脱蛋白处理的蛋白酶(蛋白水解酶)是主要由细菌产生的蛋白酶，该蛋白酶具有的最佳pH在碱性范围，并还具有肽链内切酶活性，但不显示肽链端解酶活性。碱性蛋白酶被主要用于常规的脱蛋白处理有下列原因(a)田间胶乳作为天然橡胶是以所谓氨胶乳的形式供给的，氨胶乳是通过浓缩胶乳并加入氨来制备的，加氨的目的是防止胶乳的凝结和腐败，并且胶乳本身呈现碱性；(b)及因此，有必要使用最佳pH在碱性范围的所谓碱性蛋白酶以避免橡胶分子的凝结。表1显示了商业上有售的用于常规脱蛋白处理的碱性蛋白酶的特征。 制造商1Kao Corp，2Novo-Nordisk Bioindustri A/S，3AmanoEnzyme，Inc.，4Nagase Biochemicals，Ltd. 活性◎非常高；○高；-无活性有关产生酶的细菌的商业名称，上栏表示属类，而下栏表示品种。本专利技术者使用具有肽链端解酶活性的蛋白酶代替常规的碱性蛋白酶做了实施蛋白质分解处理的试验。作为结果，他们惊奇地发现一个新的事实，即蛋白质可被分解到基本上不存在数均分子量<Mn>为4500或4500以上的蛋白质和蛋白质分解产物的程度，从而有可能得到一种不大可能引起过敏性反应的天然橡胶胶乳。这样，就完成了上述本专利技术(I)的制备低过敏性天然橡胶胶乳的方法。从另一个观点看，本专利技术者除了使用常规的碱性蛋白酶分解处理蛋白质外，还使用具有肽链端解酶活性的蛋白酶做了实施分解处理蛋白质和去除处理蛋白质及其蛋白质分解产物的试验。作为结果，他们惊奇地发现一个新的事实，即蛋白质可被分解和去除到基本上不存在数均分子量<Mn>为4500或4500以上的蛋白质和蛋白质分解产物的程度，从而有可能得到一种脱蛋白的橡胶胶乳，它不大可能引起过敏性反应。这样就完成了上述本专利技术(II)的制备低过敏性天然橡胶胶乳的方法。在本专利技术中通常使用质谱检测蛋白质和蛋白质分解产物，优选使用蛋白质分析系统来测定，分析系统包括飞行时间(TOF)型质谱仪和二维表面修饰芯片的组合。根据蛋白质芯片TM系统，可以检测到痕量的蛋白质，如每1mL天然橡胶胶乳中大约0.1μg的量。日本发表的未审查专利(Kokai Tokkyo Koho Hei)号9-71604中叙述了天本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备低过敏性天然橡胶胶乳的方法，它包括在天然橡胶胶乳中加入具有肽链端解酶活性的蛋白酶，并将天然橡胶胶乳陈化，从而将胶乳中的蛋白质分解到检测不到数均分子量在４５００或４５００以上的蛋白质及蛋白质分解产物的程度。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：市川直哉，宫本芳明，林正治，
申请(专利权)人：住友橡胶工业株式会社，花王株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]