胰高血糖素样肽-2及其治疗应用制造技术

一种药用组合物，包含一种ＧＬＰ－２肽和一种符合药用要求的载体，ＧＬＰ－２肽选自脊椎动物ＧＬＰ－２或脊椎动物ＧＬＰ－２的肠营养性类似物，后者与脊椎动物ＧＬＰ－２的不同之处在于其具有至少一个氨基酸的增加、缺失、替换或含Ｎ－端或Ｃ－端氨基酸封闭基团的氨基酸。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
与有关申请的相互参照本申请为1995年4月14日所提交申请(系列号08/422,540)的部分继续申请，原申请内容在此一并收入，以资参照。专利
本专利技术涉及胰高血糖素相关性肽，这些肽具有促进胃肠组织生长的特性。本专利技术还涉及这些肽的治疗应用，用于治疗由于胃肠组织特别是肠组织和胰腺组织生长不良或丢失所引起的各种疾病。专利技术背景胰高血糖素基因的表达产生组织特异性不同的多种肽产物，这些肽产物来自于160个残基的胰高血糖素原产物的加工过程。自 、大鼠、仓鼠和牛的胰腺制备前胰高血糖素原cDNA，并对其进行分子克隆，已经阐明这些肽在胰高血糖素原前体中的结构组成。这些分析显示，前胰高血糖素原不仅含有胰高血糖素和肠高糖素的序列，而且还含有另外两种胰高血糖素样肽(GLP-1和GLP-2)，两个间隔或插入肽(IP-I和IP-II)将这两种胰高血糖素样肽相互隔离并将它们与胰高血糖素分开。这些肽的两侧为数对碱性氨基酸，具有典型的激素原裂解部位的特征，这表明胰高血糖素原在经翻译后加工之后，可将这些肽游离出来(Drucker，《胰腺)》(Pancreas)，1990，5卷4期484页)。例如，对从朗罕氏胰岛中胰高血糖素原游离出来的肽进行分析，表明游离的胰腺肽主要是29个氨基酸的胰高血糖素，而肠高糖素、泌酸调节素、IP-II和胰高血糖素样肽更多见于小肠和大肠。在肠内发现胰高血糖素样肽促使人们对这些新发现的肠肽的精确结构和假定功能进行了研究。大多数研究集中在GLP-1，因为几个方面的证据都表明GLP-1可能是一种新的重要的调节肽。确实，已经证实GLP-1是已知最强的刺激胰岛素释放的肽能刺激物，其通过与胰腺β细胞上的受体相互作用以葡萄糖依赖方式发挥作用。对GLP-1及其衍生物在糖尿病治疗方面应用的开发正在进行之中。肠高糖素和泌酸调节素，即所谓的“肠道胰高血糖素”的生理作用，特别是在酸分泌调节和肠细胞生长方面的作用，也正在研究之中。泌酸调节素能抑制五肽胃泌素刺激的胃酸分泌，这种作用呈剂量依赖性。对于肠高糖素在引致肠适应性改变及肠粘膜生长方面的作用已进行了研究，在1994年8月31日出版的EP 612,531上Matsuno等报道了肠高糖素的肠营养效应及其治疗应用。与GLP-1和其它胰高血糖素相关性肽相比，尽管已人人类、大鼠、牛、猪、豚鼠、仓鼠和八齿鼠等种系动物中分离到多种GLP-2同源物并弄清了它们的序列，但对于胰高血糖素样肽(GLP-2)的生理作用仍知之甚少。以人工合成的GLP-2制备抗血清，多个研究组用这种GLP-2抗血清检测，已经证明GLP-2主要存在于肠提取物中，而不是胰腺提取物(参见Mojsov等，《生物学和化学杂志》(J.Biol.Chem.)，1986，261卷25期11880页；Orskov等，《内分泌学)》(Endocrinology)，1986，119卷4期1467页及《糖尿病学》(Diabetologia)，1987，30卷874页及《FEBS通讯》(FEBSLetters)，1989，247卷2期193页；George等，《FEBS通讯》(FEBSLetters)，1985，192卷2期275页)。关于GLP-2的生物学作用，Hoosein等报道(《FEBS通讯》(FEBS Letters)，1984，178卷1期83页)GLP-2既不与胰高血糖素竞争结合到大鼠肝组织和脑组织，也不刺激肝脏质膜腺苷酸环化酶的产生；但难以理解的是，当GLP-2浓度在30-50pM时就能刺激下丘脑膜和垂体膜的腺苷酸环化酶。因此，阐明GLP-2的生理作用显得很有必要。专利技术概述目前已证实，GLP-2作为一种营养剂，促进胃肠组织的生长。GLP-2的效应尤以促进小肠生长为明显，因此，本专利技术将这种效应称之为“肠营养”效应。值得注意的是，GLP-2的生长促进效应也表现在促进胰岛生长，特别是引起胰岛的增大和增殖。据此，本专利技术总的目的是，开发GLP-2及GLP-2类似物在治疗及其它相关方面的应用。更具体地，根据本专利技术之一方面，提供了一种符合药用剂型的GLP-2或GLP-2类似物，这种剂型适合于处方配药以及随后给病人用药。另一方面，本专利技术提供了一种药用组合物，该组合物包含GLP-2或GLP-2类似物和一种药用载体。再另一方面，本专利技术还提供了一种促进胃肠组织包括小肠和胰岛组织生长和增殖的方法，这种方法用于治疗有这方面需要的病人，该方法包括给病人施以促进胃肠组织生长剂量之GLP-2或GLP-2类似物的步骤。本专利技术之另一方面，提供了一种用于鉴定新的肠营养性GLP-2类似物的方法，包括以下步骤1) 获取一种肠营养性GLP-2的类似物，该类似物至少有一个氨基酸替换、缺失、增加，或一个含封闭基团的氨基酸；2) 以该类似物治疗一种哺乳动物，所用治疗方案能引起如同大鼠GLP-2产生的肠营养效应；以及3) 与模拟治疗对照哺乳动物相比较，确定该类似物对小肠重量和/或腺管加绒毛高度和/或胰岛大小的影响，由此，肠营养性肽即可视为一种类似物，其能引起上述重量和/或高度和/或大小的增加。另一方面，本专利技术提供了新的GLP-2类似物，这些类似物的类型为脊椎动物GLP-2的肠营养性类似物。这些GLP-2类似物促进胃肠组织包括小肠组织和胰岛组织的生长和增殖。本专利技术之另一方面，提供了一种方法，用该方法治疗病人以修复胃肠组织，治疗包括以下步骤(1)以促进组织生长剂量的GLP-2或GLP-2类似物培养上述组织或细胞，而后(2)将该组织或细胞植入待治病人体内。在另一相关方面，本专利技术提供了一种培养胃肠组织或细胞的方法，其包括将该组织或细胞置于培养液中进行培养的步骤，培养液中添加有促进生长剂量的GLP-2或GLP-2类似物。附图简述附图说明图1示出GLP-2剂量-效应结果。给动物注射大鼠GLP-2，检测其对小肠重量(BW-A图)、近端空肠腺管加绒毛高度(PJ-B图)、远端空肠腺管加绒毛高度(DJ-C图)及远端回肠腺管加绒毛高度(DI-D图)的影响，以检测结果与大鼠GLP-2剂量的关系制图。图2示出配药用赋形剂对GLP-2肠营养活性的影响。以大鼠GLP-2溶于明胶(G)或盐水(PBS)给药，分别检测小肠重量(BW)、近端空肠腺管加绒毛高度(PJ)、远端空肠腺管加绒毛高度(DJ)及远端回肠腺管加绒毛高度(DI)。不含大鼠GLP-2的明胶溶液作为对照组(C)。图3示出给药途径对GLP-2肠营养活性的影响。以皮下(SC)、肌内(IM)或腹腔(IP)注射大鼠GLP-2后，检测小肠重量改变的百分率。标以T的矩形条表示样品来自用GLP-2治疗的大鼠，C表示样品来自用盐水注射的对照组大鼠。图4示出给药频率对GLP-2活性的影响。如图中X轴所示，给动物皮下注射PBS每12小时一次、2.5μg大鼠GLP-2每12小时一次(q12h)、5μg大鼠GLP-2每天一次(qd)或10μg大鼠GLP-2隔天一次(qod)。对于每一给药方案，检测小肠重量(BW)、近端空肠腺管加绒毛高度(PJ)、远端空肠腺管加绒毛高度(DJ)及远端回肠腺管加绒毛高度(DI)。图5示出GLP-2用药时间长短对活性的影响。给动物注射5μg溶于10％明胶的大鼠GLP-2或单纯注射10％明胶，每天一次，连用4周(A图)、8周(B图)或12本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：D·J·德鲁克尔，
申请(专利权)人：一一四九三三六安大略公司，
类型：发明
国别省市：