截短的神经胶质细胞系来源的神经营养因子制造技术

具有氨基酸序列Ｘ－［Ｃｙｓ↑［４１］－Ｃｙｓ↑［１３３］］－Ｙ的截短的神经胶质细胞系来源的神经营养因子（ＧＤＮＦ）蛋白质产物，及其添加，取代和内部缺失变异体和衍生物， 其中：［Ｃｙｓ↑［４１］－Ｃｙｓ↑［１３３］］代表图１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）所述的Ｃｙｓ↑［４１］到Ｃｙｓ↑［１３３］的氨基酸序列； Ｙ代表Ｃｙｓ↑［１３３］的羧基末端基团或Ｉｌｅ↑［１３４］的羧基末端氨基酸残基； Ｘ代表Ｃｙｓ↑［４１］的甲硫氨酰化的或非甲硫氨酰化的氨基或选自下列基团的氨基末端氨基酸残基： Ｇ ＲＧ ＮＲＧ ＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３） ＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４） ＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５） ＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６） ＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７） ＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８） ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９） Ｇ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０） ＫＧ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１） ＧＫＧ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２） ＲＧＫＧ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３） ＳＲＧＫＧ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４） ＮＳＲＧＫＧ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５） ＥＮＳＲＧＫＧ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６） ＰＥＮＳＲＧＫＧ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７） ＮＰＥＮＳＲＧＫＧ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８） ＡＮＰＥＮＳＲＧＫＧ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９） Ａ ＡＮＰＥＮＳＲＧＫＧ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０） ＡＡ ＡＮＰＥＮＳＲＧＫＧ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１） ＡＡＡ ＡＮＰＥＮＳＲＧＫＧ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２） ＱＡＡＡ ＡＮＰＥＮＳＲＧＫＧ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３） ＲＱＡＡＡ ＡＮＰＥＮＳＲＧＫＧ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４） ＮＲＱＡＡＡ ＡＮＰＥＮＳＲＧＫＧ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５） ＲＮＲＱＡＡＡ ＡＮＰＥＮＳＲＧＫＧ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６） ＥＲＮＲＱＡＡＡ ＡＮＰＥＮＳＲＧＫＧ ＲＲＧＱＲＧＫＮＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７） ＲＥ…。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

一般来说，本专利技术涉及本文称为神经胶质细胞系来源的神经营养因子(也称为胶质来源的神经营养因子或GDNF)的蛋白质，其特征在于促进多巴胺被多巴胺神经元的吸收及支持在帕金森氏病中死亡的神经元的存活的能力。更具体地说，本专利技术涉及新的截短的GDNF蛋白质。专利技术背景神经营养因子是在神经系统中或由神经系统支配的非神经组织中发现的蛋白质，其功能是促进存活和维持神经和/或神经胶质细胞的表型分化(Varon等，神经科学年鉴1327，1979；Thoenen等，科学，229238，1985)。由于该生理学作用，神经营养因子在治疗各种神经退化性疾病中出现的神经细胞的退化和分化功能的丧失中有用。为了便于将具体的神经营养因子有效地用于治疗神经损伤，损伤的神经细胞的类型或种类应对该因子有效应。不同的神经营养因子典型地影响明显不同类型的神经细胞。因此，拥有各种不同的神经营养因子来治疗在不同形式的疾病或损伤中出现的各种类型的损伤的神经元具有优势。神经营养因子可保护效应神经元抵抗各类无关损害。例如，神经生长因子(NGF)从经过切断其轴突突起引起的死亡中(Rich等，神经细胞学杂志16261 1987；Otto等，神经科学杂志83156，1987)，从胚胎发育期间的个体发育死亡中(Hamburger等，神经科学杂志4767，1984)和从施用紫杉醇或顺式铂氨引起的损伤中(Apfel等，神经学年鉴，2987，1991)挽救有效部分的感觉神经元。保护的明显普遍性产生了这样的观点如果一种神经营养因子保护效应神经元抵抗实验性损伤，那么它可用于治疗病人中涉及这些神经元损伤的疾病，即使该病原学可能是未知的。一种给定的神经营养因子除了具有正确的神经元特异性外，还必须能获得足够量以用作药物治疗。由于神经营养因子在组织中典型地以少量存在(例如，Hofer和Barde，自然331261，1988；Lin等，科学2461023 1989)可能不便于直接从动物组织制备药用量的神经营养因子。作为选择，需要使用重组表达系统生产所需的蛋白质。Lin等以前描述了筛选对灰质多巴胺能神经元的胚胎前体具有神经营养活性的生物学样品的方法(参见1994年5月23日申请的美国专利申请号08/182,183及其专利申请；1992年9月17日申请的PCT/US92/07888(WO 93/06116)和欧洲专利申请号92921022.7(公开号EP610254)，本文引用其说明书以供参考)。该生物测定在鉴定可用于治疗帕金森氏病的神经营养因子中有用(Friedman等，神经科学通讯，7965-72，1987)，因为该疾病的特征在于支配纹状体的中脑中的多巴胺能神经元的退化。Lin等进一步描述了从一种该来源，成神经胶质瘤细胞系B49的条件培养基中纯化的新神经营养因子的鉴定(Schubert等，自然249224-27，1974)。以前报道了该细胞系的条件培养基含多巴胺能神经营养活性(Bohn等，神经科学协会文摘，15277，1989)。在Lin等的文献前，神经胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)尚未作为分离的生物学活性物质被鉴定或作为基本上纯的蛋白质被分离。另外，Lin等描述了克隆编码GDNF的人基因的方法，编码GDNF的人基因的核酸序列和GDNF蛋白质的氨基酸序列。GDNF基因被亚克隆进表达载体，且该载体用于表达生物学活性GDNF。GDNF蛋白质是由2个以二硫键连接的134氨基酸，22kDa的亚基组成的同源二聚体。该描述进一步包括将GDNF用于防止和治疗神经损伤和诸如帕金森氏病的神经相关疾病。GDNF疗法有助于治疗由损伤一种或多种类型的神经细胞的存活和/或合适功能的情况引起的神经损伤。该神经损伤可从许多种类的不同原因引起。神经损伤可对一种或多种类型的神经细胞产生，它经过(1)物理损伤引起靠近损伤位点的轴突突起和/或神经细胞体退化；(2)部分神经系统的临时或永久性血流停止，如中风；(3)故意或碰巧接触神经毒素，如用于治疗癌症的化学治疗剂(例如，顺式铂氨)或用于治疗AIDS的双脱氧胞苷(ddC)；(4)慢性代谢疾病，如糖尿病或肾机能障碍；或(5)神经退化疾病，如帕金森氏病，Alzheimer氏疾病和肌萎缩性侧索硬化(ALS)，它们由特定神经元群体的退化引起。GDNF治疗特别有助于治疗涉及灰质多巴胺能神经元退化的神经退化性症状，如帕金森氏病。对于帕金森氏病的唯一流行疗法是治标，针对纹状体中增加的多巴胺水平。GDNF疗法预期的效果不是简单地在纹状体多巴胺能神经末端产生多巴胺能神经传递的增加(这将导致症状的减轻)，而且还减缓了或甚至终止了退化性突起的进展并修复损伤的黑质纹状体途径并恢复其功能。GDNF还可用于治疗病人的其它形式的多巴胺能神经细胞的损伤或不适当的功能。这种损伤或机能失常可能在精神分裂症和其它形式的精神病中出现。对这类症状的唯一常规疗法是针对有症状的且需要作用于多巴胺吸收位点的多巴胺受体，这与该疾病过程可能涉及支配具有这些受体的神经元群体的多巴胺能神经元具有不合适的功能相一致。专利技术概述在一个方面，本专利技术提供了新的截短的神经胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)蛋白产物。在一个实施方案中，以重组遗传工程技术生产截短的GDNF蛋白质。在一个另选的实施方案中，以化学技术，或重组与化学技术的结合合成该截短的GDNF蛋白质。本专利技术截短的GDNF蛋白质产物包括由氨基酸序列X--Y代表的蛋白质。附图说明图1(SEQ ID NO2)中氨基酸残基的编号方式用于帮助比较成熟GDNF蛋白质。代表图1(SEQ IDNO2)所示的Cys41到Cys133的氨基酸序列。Y代表Cys133的羧基末端基团或Ile134的羧基末端氨基酸残基。X代表Cys41的甲硫氨酰化或非甲硫氨酰化的氨基或选自下列基团的氨基末端氨基酸残基。GRGNRGKNRG(SEQ ID NO3)GKNRG(SEQ ID NO4)RGKNRG(SEQ ID NO5)QRGKNRG(SEQ ID NO6)GQRGKNRG(SEQ ID NO7)RGQRGKNRG(SEQ ID NO8)RRGQRGKNRG(SEQ ID NO9)G RRGQRGKNRG(SEQ ID NO10)KG RRGQRGKNRG(SEQ ID NO11)GKG RRGQRGKNRG(SEQ ID NO12)RGKG RRGQRGKNRG(SEQ ID NO13)SRGKG RRGQRGKNRG(SEQ ID NO14)NSRGKG RRGQRGKNRG(SEQ ID NO15)ENSRGKG RRGQRGKNRG(SEQ ID NO16)PENSRGKG RRGQRGKNRG(SEQ ID NO17)NPENSRGKG RRGQRGKNRG(SEQ ID NO18)ANPENSRGKG RRGQRGKNRG(SEQ ID NO19)A ANPENSRGKG RRGQRGKNRG(SEQ ID NO20)AA ANPENSRGKG RRGQRGKNRG(SEQ ID NO21)AAA ANPENSRGKG RRGQRGKNRG(SEQ ID NO22)QAAA ANPENSRGKG RRGQRGKNRG(SEQ ID本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：胡小芬，
申请(专利权)人：安姆根有限公司，
类型：发明
国别省市：