一种含纤维蛋白原的稳定化混合物制造技术

一种含样品的纤维蛋白原稳定化溶液，特别是一种生物活性成分（ＢＡＣ）的稳定化溶液，所述溶液是一种从血浆获得的蛋白质溶液，其中包含纤维蛋白原，氨甲环酸和精氨酸或赖氨酸或精氨酸与赖氨酸的混合物，它们的药用盐以及构成以水为介质的缓冲溶液的任意物质。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种含纤维蛋白原的混合物，特别涉及一种生物活性成分(BAC)的稳定化溶液，分别含成分A和B的一种双成分组织胶以及可由A与B成分的混合而得到的一种血纤蛋白凝块。含纤维蛋白原的样品可用于各种应用，例如在双成分组织胶或血纤维胶中使用。生物活性成分(BAC)是含纤维蛋白原的蛋白质黏液，一般每毫升含约50毫克纤维蛋白原，该溶液从冷沉淀的血浆获得。此类BAC在94/22503中曾有描述。由于对病毒灭活和浓缩所使用的方法导致所述冷沉淀物中的蛋白水解增加，需要用抗蛋白水解的试剂稳定最终产物。某些这种蛋白水解酶以酶原(酶的无活性前体)形式存在并通过所述冷沉淀物中存在的微量活化的酶而激发其活性。已发现在分离所述冷沉淀物期间施用的温度范围促进蛋白水解酶前体的激活。这种激活推测以一种“级联反应”序列发生，由此蛋白酶激活其他蛋白水解酶的前体形式，包括从前体纤溶酶原产生溶血纤的纤溶酶。已发现抑制纤溶和其他蛋白水解活性能减少VIII因子和其他凝集与黏附性蛋白质的降解。在2-6℃存放1天，BAC可能已发生自动凝集。温度较低时，这个过程变慢；在-18℃存放数月后，未经进一步处理的BAC在融溶后形成固体凝块而不能被复原。用未纯化的冷沉淀物亦观察到同样现象。在所述生产过程中，通过氢氧化铝移出纤溶酶原和其他维生素K依赖性蛋白酶。然而，某些蛋白酶留在终产物中。需要使包含在一种混合物中特别是一种BAC溶液中的纤维蛋白原稳定化以确保在临床手术应用时，安全使用所述产品。意外的是，该目的通过含纤维蛋白原，4-(氨甲基)环己基-羧酸以及精氨酸，赖氨酸或其组合物的混合物达到。这种混合物优选作为纤维蛋白原，氨甲环酸(tranexamic acid)(4-(氨甲基)-环已烷-羧酸)以及精氨酸，赖氨酸或其组合物的溶液存在。在优选实施方案中，本专利技术包括一种生物活性成分(BAC)的溶液，所述溶液已用氨甲环酸及其生理盐和精氨酸或赖氨酸或者精氨酸与赖氨酸组合物的一种组合物稳定化。所述溶液优选被缓冲到与生理相容的pH值。氨甲环酸是一种蛋白酶抑制剂，其科学命名是4-(氨甲基)环己烷-羧酸。按照本专利技术，优选含甘氨酸的缓冲液。按照本专利技术，精氨酸以及赖氨酸可采用常用盐，例如盐酸盐。所述BAC优选从EP-A-534178公开的病情检查(being worked up)后浓缩的冷沉淀物获得。在该文章中已描述精氨酸作为治疗性蛋白质浓缩物的稳定剂。然而，氨甲环酸与精氨酸以及赖氨酸的组合物所提供的协同作用是出人意料的。在BAC溶液中氨甲环酸的量优选约为重量的1-20％。精氨酸或赖氨酸盐酸化物的量优选为重量的0.1-4％。更优选形式氨甲环酸的量约为重量的5-15％，特别优选约为重量的8-12％。一般可使用约为重量的10％。精氨酸或赖氨酸盐酸化物的量更优选在重量的约1-3％的范围，特别优选是重量的约2％。含纤维蛋白原的样品，特别是BAC溶液优选从WO-A-94/22503中描述的超滤浓缩的冷沉淀物获得。所述BAC优选包含约15-150毫克/毫升纤维蛋白原含量，特别优选含约20-80毫克/毫升。纤维蛋白原的量可按照Clauss的方法进行测量(Clauss，A.，“Gerinnungsphysiologische Schnellmethode zur Bestimmung desFibrinogens”，Acta.Haematol.，17，237-247，1957)。使用从浓缩的冷沉淀物获得的BAC是有利的，因为这种组分除了纤维蛋白原外还含有价值的血液成分，所述成分在一种蛋白水解酶如人类凝血酶与BAC溶液接触时对血液凝集起重要作用。有价值的成分是因子VIII，因子XIII，纤连蛋白，玻连蛋白，von Willebrand因子(vWF)等。所述成分优选从冷沉淀物，特别是从浓缩的冷沉淀物获得。然而，也可通过重组方法制备纤维蛋白原，因子VIII，因子XIII，纤连蛋白，von Willebrand因子(vWF)，玻连蛋白成分。此类制剂，例如因子VIII可购买到。据发现，氨甲环酸与精氨酸或赖氨酸的组合物对含纤维蛋白原的混合物，特别是生物活性成分BAC溶液起稳定化作用(在2-6℃，保持至少50％的纤维蛋白原活性至少14天)。当仅使用所述成分之一时，所述样品就明显不稳定。而且，意外的是使用氨甲环酸与精氨酸或赖氨酸的盐酸化物对从按照本专利技术稳定的BAC获得的血凝块的性质没有不利影响。例如在各个样品在存放14天后仍保持最大拉伸率并且张力几乎保持在同样水平。而且，在加入氨甲环酸和精氨酸或赖氨酸时，所述BAC中因子VIII的活性没有受到反面影响。特别是，本专利技术的生物活性成分BAC的稳定化溶液十分适合制备双成分组织胶。本专利技术的组织胶被理解为在患者需要时，例如为避免外科手术中的严重出血可由患者使用或在患者身上使用的一种系统。这种组织胶还被称为血纤蛋白胶并基本上类似于天然的血液凝集级联反应。在外科手术中应用之前，所述组织胶从两种成分获得。一种成分含纤维蛋白原，其在接触到纤溶酶如人类凝血酶时形成血纤蛋白，后者是形成天然血凝块的基础物质。在外科手术期间，应用所述两种成分，例如通过尽可能快速混合所述两种成分并避免阻塞供应管线同时排空两只注射器。本专利技术的溶液有利于制备一种双成分血纤蛋白胶，因为纤维蛋白原溶液不必新配制，而可存放在-18℃冰箱中，既不失去其凝集能力又不失去其优越的机械性质。纤维蛋白原活性的程度可通过在所述溶液中提供较高量的纤维蛋白原来平衡为的是不妨碍含溶液(BAC)的纤维蛋白原的适当使用。因此，本专利技术的主题也是一种分别含成分A和成分B的双成分组织胶，其中成分A含权利要求1到10中描述的实施方案的溶液，而成分B含能与纤维蛋白原反应(或分别与BAC反应)形成血纤蛋白的蛋白水解酶溶液。所述蛋白水解酶优选是人类凝血酶，特别是具有约2到4,000IU/ml活性的人类凝血酶。凝血酶活性按照凝血检测法(EuropeanPharmacopoeia)进行测试。技术人员应能理解，血纤蛋白胶可由其血凝性蛋白质的含量进行定义，而不是根据血凝性纤维蛋白原定义。为提供混合成分A与B的平衡溶液，向成分B加入约同样浓度的氨甲环酸和精氨酸可能是有利的。成分A和B的使用方式优选是等体积的两种成分被混合并给患者施用在伤口侧面。当然，应能理解，所述双成分组织胶不仅可在手术期间使用，而且还可在其他必须止血的情况使用。两种成分优选以1∶1的比例施用。下述实施例阐明氨甲环酸与精氨酸的稳定化组合物的优越性。这些实施例并非任何限制而是对本专利技术的更详尽解释。实施例1检测物质的制备从生产线收到样品后立即向800毫升样品中加入0.8克粉末状叠氮钠(0.1％)，以控制细菌生长。加入抑菌剂对防止污染是必要的，因为样品中高浓度的纤维蛋白原是难于过滤的。通过加入所述两种固体成分的混合物到100毫升一份的样品中临时准备各被测浓度。随着温和搅拌(多点瓷性搅拌平板)在烧杯中加入氨甲环酸和盐酸精氨酸共进行10分钟。以相应方式制备全部制剂并通过加入缓冲液B调其纤维蛋白原浓度到50毫克/毫升。 继续搅拌5分钟后，按5毫升一份装入硅化玻璃试管中。全部试管被同时冷冻并存放在-80℃直到使用。在实验前，将它们放置在2-6℃(“0”日为时间基线)。每组取两只试管保持本文档来自技高网...

【技术保护点】
含纤维蛋白原，４（氨甲基）－环己烷－羧酸（氨甲环酸）以及精氨酸，赖氨酸或其组合物的一种混合物。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：I努尔，L巴，O利伯曼，
申请(专利权)人：奥姆里克斯生物化学品公司，
类型：发明
国别省市：BE[比利时]