哺乳动物EPO模拟CH1缺失模拟体、组合物、方法和用途技术

本发明专利技术涉及至少一种新的ＥＰ０人ＣＨ１缺失模拟体或特定部分或变体，包括编码至少一种ＣＨ１缺失模拟体或特定部分或变体的分离核酸、ＣＨ１缺失模拟体或特定部分或变体、载体、宿主细胞、转基因动物或植物，及其制备和使用方法，包括治疗组合物、方法和装置。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

技术介绍
专利
本专利技术涉及对生物学上的活性蛋白、片段或配体具有特异性的哺乳动物EPO模拟CH1缺失模拟体、特定部分或变体，EPO模拟CH1缺失模拟体编码核酸和互补核酸、宿主细胞，及其制备和使用方法，包括治疗配方、施用和装置。相关技术重组蛋白是一类新兴的治疗剂。这种重组体疗法在蛋白质配方和化学修饰方面已取得进展。这种修饰可潜在地增强治疗性蛋白质的治疗效用，例如通过延长半衰期(例如，通过阻碍其暴露于蛋白水解酶)，增强生物活性或减少有害副作用。一种这样的修饰是利用被融合至受体蛋白，如enteracept的免疫球蛋白片段。人们也曾利用Fc区构建治疗性蛋白质，试图提供较长的半衰期或整合诸如Fc受体结合、A蛋白结合和补体结合的功能。哺乳动物造血系统的一个特殊且重要的作用是生成红细胞，该红细胞可将氧转运至动物体内的多个组织。生成红细胞的过程(“红细胞生成”)不间断地发生在动物的整个一生中，以弥补被破坏的红细胞。典型的红细胞具有相对短的寿命，通常为100-120天。红细胞生成是一个被精确控制的生理学机制，因而可以生成足量的红细胞，以实现恰当的组织氧合，但不会多至阻碍循环。目前，已知红细胞生成主要受一种酸性糖蛋白，即多肽促红细胞生成素(EPO)的控制。促红细胞生成素的生成是位于哺乳动物染色体中的单拷贝基因表达的结果。重组人类EPO(“rHuEPO”)的氨基酸序列基本上与获得自人尿来源的EPO的氨基酸序列一致。但rHuEPO的糖基化与尿EPO和人类血清EPO的糖基化不同。在健康哺乳动物体内，当组织被现有数量的循环红细胞充分氧合时，EPO在血浆中的浓度非常低。EPO的存在刺激了新的红细胞的生成，以替代那些在老化过程中损失的红细胞。另外，EPO的生成在低氧条件下被促进，其中，尽管血液足以充满组织，但对肌体组织的供氧仍然低于正常生理水平。低氧可能是出血、辐射诱发的红血球破坏、各种贫血、高海拔或长期无意识造成的。与之相反，循环中的红细胞数量超过正常组织氧合所需数量时，EPO的生成便减少了。不过，某些疾病状态涉及异常红细胞生成。许多国家在治疗中利用了重组人类EPO(rHuEPO)。在美国，美国食品及药物管理局(FDA)已批准了rHuEPO在治疗与末期肾病相关的贫血方面的应用。为治疗该病症而接受血液透析的患者典型地患有严重贫血，这是透析治疗所导致的红细胞破裂和成熟前死亡造成的。EPO也被应用在其它类型贫血的治疗中。例如，可采用EPO治疗化学疗法诱发的贫血、与脊髓发育不良相关的贫血、与多种先天性失调相关的贫血、AIDS相关贫血和与早熟相关的贫血。此外，EPO在其它领域也可发挥作用，如促进骨髓移植患者、准备自体输血的患者和铁过载失调患者体内更快地恢复正常血细胞比容。促红细胞生成素(EPO)是由165个氨基酸和4条糖链组成的糖蛋白激素，且通过与红细胞前体细胞表面的特定受体结合，对红细胞生成发挥了主要调节因子的作用。该结合表明它们将增殖并分化为成熟红细胞。促红细胞生成素受体是对促红细胞生成素具有高亲和性，且含有484个氨基酸的糖蛋白。对该促红细胞生成素受体而言，配体诱发的均二聚化可能是控制活化的关键事件之一。促红细胞生成素具有相对短的半衰期。静脉内施用的促红细胞生成素的清除率符合一级动力学，其在CRF患者体内的循环半衰期约为3-4小时。在治疗剂量范围内，血浆促红细胞生成素的可检测水平被维持至少24小时。皮下施用促红细胞生成素后，5-24小时内达到峰值血清水平，并在之后缓慢降低。促红细胞生成素施用后的Cmax和t1/2分别为1.80±0.7U/mL和19.0±5.9小时。促红细胞生成素的起始剂量范围是50-150U/kg，每周三次。促红细胞生成素的剂量必须针对不同个体施用，以使血细胞比容维持在上述建议目标范围内。对外科患者而言，促红细胞生成素的推荐剂量为在手术前皮下注射10天、手术当天和手术后皮下注射4天的300U/kg/天，或可选的每周一次皮下注射600U/kg(手术前21、14和7天)，外加手术当天第四次施用该剂量。若干研究小组通过从任意噬菌体展示肽文库中筛选出对促红细胞生成素受体具有亲和性的肽，从而鉴定出促红细胞生成素的小肽模拟物。其序列与促红细胞生成素无同源性。在功能性试验中，有若干种上述肽显示了活性，但仅为重组促红细胞生成素的活性的1/100,000。尽管人们通过制备肽模拟物的共价二聚体或多聚体，为提高上述肽的效价进行了若干尝试，但上述化合物的活性按摩尔计仍然比促红细胞生成素低1,000-10,000倍。促红细胞生成素来源的肽序列也已被权利要求为是增效的。也有报导表明包含多个或全部天然促红细胞生成素序列的二聚化序列的活性被提高了。这些化合物具有很低或者无口服生物利用率，且其活性也使其在目前的商业上不具有可行性。因此，需要提供EPO治疗性蛋白质的改良和/或修饰版本，以克服上述一个或多个难题，以及本领域已知的其它难题。专利技术概述如此处所描述和/或实践的方法，并结合本领域所已知的方法，本专利技术提供了分离的人类EPO模拟CH1缺失模拟体，包括修饰的免疫球蛋白、裂解产物和其它特定部分及其变体，也提供了EPO模拟CH1缺失模拟体组合物、编码或互补核酸、载体、宿主细胞、组合物、配方、装置、转基因动物、转基因植物，及其制备和应用方法。本专利技术也提供了如此处所描述和/或本领域已知的至少一种分离EPO模拟CH1缺失模拟体或特定部分或变体。该EPO模拟CH1缺失模拟体可任选地包含至少一个CH3区，该CH3区与至少一个CH2区直接相连，该CH2区与至少一个铰链区或其片段直接相连，该铰链区或其片段与至少一个部分V区直接相连，该部分V区与任意接头序列直接相连，该接头序列与至少一个治疗性肽直接相连，该治疗性肽则任选地进一步与至少一个可变抗体序列的至少一个部分直接相连。在一对具有任选N末端抗体序列的CH3-CH2-铰链-部分J序列-接头-治疗性肽的一种优选实施方案中，是任选地通过缔合或共价键，例如，但不仅限于Cys-Cys二硫键连接成对。一种实施方案中，EPO模拟CH1缺失模拟体包括分子式(I)(V1(n)-Pep(n)-Flex(n)-V2(n)-pHinge(n)-CH2(n)-CH3(n))(m)，其中V1为免疫球蛋白可变区N末端的至少一个部分，Pep为至少一个具有生物活性的EPO模拟多肽，Flex为通过使模拟体具有可选取向和结合特性，从而提供了结构柔性的多肽，V2为免疫球蛋白可变区C末端的至少一个部分，pHtinge为免疫球蛋白可变铰链区的至少一个部分，CH2为免疫球蛋白CH2恒定区的至少一个部分，CH3为免疫球蛋白CH 3恒定区的至少一个部分，n和m可为1-10中的整数，模拟不同类型的免疫球蛋白分子，例如，但不仅限于IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2、IgM、IgD、IgE等，或其组合。因此，本专利技术的EPO模拟CH1缺失模拟体在保持固有特性和功能的情况下，模拟了抗体或免疫球蛋白结构或功能的至少一个部分，同时还提供了一种治疗性肽及其体外、体内或原位所固有或获得的特性或活性。采用此处描述的方法，并结合本领域已知的方法，可改变本专利技术抗体的多个部分和至少一种EPO模拟CH1缺失模拟体的治疗性肽部分。本专利技术一方面提供了包含特定多核本文档来自技高网...

【技术保护点】
至少一种ＥＰＯ模拟ＣＨ１缺失模拟体核酸，包含编码ＳＥＱＩＤＮＯ：５０－５１中至少一种氨基酸序列的至少一种多核苷酸，或与其互补的多核苷酸。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：GA希纳，DM奈特，J格拉耶，BJ斯卡伦，TC内斯珀尔，KA库托洛斯基，
申请(专利权)人：森托科尔公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]