本发明专利技术提供了杀死癌细胞的体外和体内方法，包括人体中的治疗方法，还提供了对癌特异抗原Ｃ３５特异的抗体，和编码此类抗体的多核苷酸，以及使用此类抗体的治疗和诊断方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
细胞生长是受到精密调节的过程，其应答身体的特定需要。偶然地，指挥细胞分裂规则的复杂的、并且高度调节的控制损坏。当这种情况发生时，细胞开始独立于它的稳态调节生长和分裂，导致通常称作癌症的疾病。实际上，癌症是年龄25-44岁的美国人中死亡的第二位主要原因。当前的癌症疗法包括化学疗法和放射疗法。化学治疗药物主要通过诱导细胞凋亡杀死癌细胞(Fisher，D.E.，Cell 78539-542(1994)；Fung，C.Y.，and D.E.Fisher，J.Clin.Oncol.13801-807(1995)；Lowe，S.W.，et al.，Cell 74957-967(1993))。放射疗法通过诱导细胞凋亡和通过其他机制杀死癌细胞。然而，化学疗法和放射疗法不杀死给定肿瘤中的所有细胞，并且从此类治疗幸存的细胞继续生长。从而，这些治疗对于消灭整个肿瘤通常是不够的。因此，需要用于治疗癌症的改进治疗方法。已经开发了癌症的免疫治疗策略，其使用抗体靶定肿瘤细胞中差别表达的表面膜标记(例如，美国专利号5,770,195，“MonoclonalAntibodies to the HER2 Receptor”，FiledMay 23，1995；Issued，Jun.23，1998)。然而，在肿瘤中差别表达的许多抗原不暴露于肿瘤细胞的表面上。结果，此类细胞内抗原不适于作为基于抗体的治疗剂的靶标。因此，需要用于治疗癌症的免疫治疗方法的额外靶标。专利技术概述杀死癌细胞的方法
本专利技术提供了通过施用有效量的细胞凋亡诱导疗法，和使用有效量的抗体缀合物或者抗体复合物杀死癌细胞的方法，所述抗体缀合物或者抗体复合物结合在癌细胞中细胞内表达但是在经历细胞凋亡的癌细胞的细胞表面上暴露的癌相关抗原。安排细胞凋亡诱导疗法和抗体缀合物或者抗体复合物的施用的时间使得抗体达到癌细胞时正在或者已经诱导了细胞凋亡。在优选实施方案中，癌相关抗原是异戊二烯化的蛋白质，其尽管通常在细胞内表达，但是在经历细胞凋亡的肿瘤细胞的细胞表面上暴露。在另一优选实施方案中，异戊二烯化的蛋白质是C35抗原。所述抗体缀合到或者与毒素复合，其确保所述抗体结合的细胞将被杀死，和/或暴露于毒素的周围癌细胞被杀死。在一个实施方案中，所述毒素是放射性同位素。在一个实施方案中，本专利技术涉及施用化学治疗剂，同时或者然后施用缀合到放射性试剂的抗体或者其片段或变体。在一个实施方案中，本专利技术涉及施用不缀合到毒素或者不与毒素复合的抗体，并且结合该抗体的细胞死亡。本专利技术的方法可以在体外或体内进行，并且可以用作患者，包括哺乳动物，如人中的治疗方法。针对C35的抗体和使用C35抗体的方法
本专利技术还提供了结合C35多肽的抗体。本专利技术包括抗体(包括包含或者备选地由抗体片段或其变体组成的分子)，所述抗体免疫特异地结合C35多肽或者C35多肽的多肽片段或变体，如SEQ ID NO2的C35多肽。本专利技术人已经产生了免疫特异地结合一种或多种C35多肽(例如，SEQ ID NO2)的小鼠和人抗体和编码来自这些抗体的VH和VL区的多核苷酸。从而，本专利技术包括这些多核苷酸，包括在SEQ ID NO56、58和60中给出和在下面的表2和3中列出的那些多核苷酸，其在表2和3中所列的日期保藏在美国典型培养物保藏中心(“ATCC”)并且给予表2和3中表示的ATCC保藏号。ATCC位于10801 UniversityBoulevard，Manassas，VA 20110-2209，USA。根据国际承认用于专利程序的微生物保藏的布达佩斯条约进行ATCC保藏。本专利技术还包括编码免疫特异结合一种或多种C35多肽(例如，SEQID NO2)的VH和VL区的保藏的多核苷酸克隆，包含保藏的多核苷酸的细胞，包含所保藏的多核苷酸编码的VH和/或VL区的抗体，编码此类抗体的多核苷酸，和包含此类多核苷酸的细胞。本专利技术还包括包含SEQ ID NO56、58和60的多核苷酸的细胞，包含SEQ ID NO56、58和60编码的VH和/或VL区的抗体，编码此类抗体的多核苷酸，和包含此类多核苷酸的细胞。此类抗体可以有或者没有与包含保藏的多核苷酸编码的VH和VL区的最初抗体相同的表位特异性，并且可以有或者没有与最初抗体的亲和性相同或者更高的亲和性。在一个实施方案中，本专利技术的抗体结合代表天然C35序列的残基105到115的表位。此外，本专利技术包含抗体，其包含或者备选地由这些抗体的片段或变体(例如，scFv、双链抗体(diabody)、三链抗体(triabody)、四链抗体(tetrabody)、微型抗体(minibody)、重链、VH区、VH CDR(互补决定区)、轻链、VL区或者VL CDR)组成，所述片段或变体具有本专利技术的多核苷酸编码的VH、VH CDRs、VLs、VL CDRs之一的氨基酸序列。此类抗体可以有或者没有与包含所保藏的多核苷酸编码的VH和VL区的最初抗体相同的表位特异性，并且可以有或者没有与最初抗体对C35的亲和性相同或者更高的亲和性。本专利技术还提供了结合一种或多种C35多肽的抗体或者其片段或变体，并且其偶联到可检测的标记，如酶、荧光标记、发光标记、或者生物发光标记。本专利技术还提供了抗体或者其片段或变体，其结合一种或多种C35多肽，并且偶联到治疗剂或毒素，例如，放射性物质。在一个实施方案中，本专利技术的抗体偶联到放射性同位素。本专利技术还提供了通常分离的、编码本专利技术的抗体(包括分子，如scFv、双链抗体、三链抗体、四链抗体、微型抗体、VH区或者VL区，其包含，或者备选地由抗体片段或其变体组成)的核酸分子。本专利技术还提供了用编码本专利技术的抗体(包括分子，如scFv、双链抗体、三链抗体、四链抗体、微型抗体、VH区或者VL区，其包含，或者备选地由抗体片段或其变体组成)的核酸分子转化的宿主细胞和其后代。本专利技术还提供了产生本专利技术的抗体(包括包含或者备选地由抗体片段或其变体组成的分子)的方法。本专利技术还提供了从核酸分子表达本专利技术的抗体(包括包含或者备选地由抗体片段或其变体组成的分子)的方法。本专利技术涉及治疗癌症的方法和组合物，其包括对哺乳动物，优选对人施用有效量的免疫结合C35多肽或其片段或变体的一种或多种抗体或其片段或变体，或相关分子。在优选实施方案中，本专利技术涉及用于治疗乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠癌和黑素瘤的基于抗体的方法和组合物。在优选实施方案中，本专利技术涉及用于治疗癌症的组合疗法，其包括对哺乳动物，优选对人施用有效量的化学治疗剂和有效量的缀合到毒素，例如，放射性物质的一种或多种抗体，其片段或变体。本专利技术还包括用于检测、诊断或预后癌症的方法和组合物，其包括对哺乳动物，优选对人施用有效量的免疫特异结合C35或者其片段或变体的一种或多种抗体或其片段或变体，或者相关分子。在优选实施方案中，本专利技术涉及用于检测、诊断或预后乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠癌和黑素瘤的基于抗体的方法和组合物。本专利技术的另一实施方案包括本专利技术的抗体的用途，用作监视C35在癌症中的表达的诊断工具。在某些实施方案中，该方法还可以用作证实细胞凋亡诱导方案的功效的诊断方法。在下面进一步详细描述本专利技术的这些和其他方法。附图简述附图说明图1显示了在表达C35本文档来自技高网...
【技术保护点】
对Ｃ３５特异的分离的抗体，其选自： ａ）包含克隆１Ｂ３Ｇ编码的ＶＨ区的抗体， ｂ）包含克隆１Ｂ３Ｋ编码的ＶＬ区的抗体， ｃ）包含克隆１Ｆ２Ｇ编码的ＶＨ区的抗体， ｄ）包含克隆１Ｆ２Ｋ编码的ＶＬ区的抗体， ｅ）包含克隆Ｈ０００９编码的ＶＨ区的抗体， ｆ）包含克隆Ｌ００１０编码的ＶＬ区的抗体， ｇ）包含（ａ）的ＶＨ区和（ｂ）的ＶＬ区的抗体， ｈ）包含（ｃ）的ＶＨ区和（ｄ）的ＶＬ区的抗体， ｉ）包含（ｅ）的ＶＨ区和（ｆ）的ＶＬ区的抗体， ｊ）包含ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６编码的ＶＨ区的抗体， ｋ）包含ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０编码的ＶＨ区的抗体， ｌ）包含ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８编码的ＶＬ区的抗体， ｍ）包含（ｊ）的ＶＨ区和（１）的ＶＬ区的抗体， ｎ）包含（ｋ）的ＶＨ区和（１）的ＶＬ区的抗体， ｏ）包含ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６编码的ＶＨ区的ＣＤＲ１或ＣＤＲ２的至少一个的抗体， ｐ）包含ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０编码的ＶＨ区的ＣＤＲ１或ＣＤＲ２的至少一个的抗体， ｑ）包含ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８编码的ＶＬ区的ＣＤＲ１、ＣＤＲ２或ＣＤＲ３的至少一个的抗体， ｒ）包含（ａ）或（ｃ）的ＶＨ区的嵌合抗体， ｓ）包含（ｂ）或（ｄ）的ＶＬ区的嵌合抗体， ｔ）包含（ａ）的ＶＨ区和（ｂ）的ＶＬ区的嵌合抗体， ｕ）包含（ｃ）的ＶＨ区和（ｄ）的ＶＬ区的嵌合抗体， ｖ）（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）或（ｕ）的嵌合抗体，其是人嵌合抗体， ｗ）包含（ｇ）或（ｈ）的抗体的１、２、３、４、５或６个ＣＤＲ的人源化抗体， ｘ）包含（ｉ）的抗体的１、２、３、４、５或６个ＣＤＲ的抗体， ｙ）结合（ａ）到（ｘ）任一个的抗体所结合的表位的抗体。...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：EE艾万斯，MJ帕里斯，DM萨哈斯拉布赫，ES史密斯，M扎奥德尔，
申请(专利权)人：瓦西尼斯公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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