表达人源化免疫球蛋白的转基因动物中B细胞凋亡的抑制制造技术

技术编号:7334862 阅读:205 留言:0更新日期:2012-05-11 18:02
本申请涉及表达人源化免疫球蛋白的转基因动物中B细胞凋亡的抑制。本发明专利技术提供了提高非人转基因动物中的免疫球蛋白表达的新方法。例如,本发明专利技术提供了提高经遗传工程改造而表达一个或数个人的或人源化的免疫球蛋白转基因座的动物中的人源化免疫球蛋白生成的方法。这可以通过在动物的B细胞中特异性的过量表达凋亡抑制剂即兔bcl-2(其表达是由B细胞特异性启动子驱动的),由此增强B细胞的存活来进行。本发明专利技术进一步涉及用于选择性增强外源B细胞也就是表达任何免疫球蛋白转基因基因座的B细胞的存活胜过不表达转基因基因座的内源B细胞的存活的方法。选择性是通过只在外源B细胞中表达凋亡抑制剂而实现的,就是说,通过将外源免疫球蛋白表达与凋亡抑制剂表达偶联在一起。这后一种方法容许提高转基因所编码的(一种或多种)产物的表达和生成胜过转基因动物内源生成的免疫球蛋白。本发明专利技术还提供了新的凋亡抑制剂,兔bcl-2。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于增强经历短期淋巴细胞生成(lymphopoiesis)的动物中的B细胞存活的方法。本专利技术进一步涉及用于增强表达外源免疫球蛋白或免疫球蛋白链转基因基因座的转基因动物的B细胞存活以提高免疫球蛋白生成的方法。本专利技术进一步涉及用于选择性增强表达任何免疫球蛋白转基因基因座的外源B细胞的存活胜过不表达转基因基因座的内源B细胞的方法,其通过只在表达转基因所编码的免疫球蛋白的外源B细胞中但不在表达内源免疫球蛋白的B细胞中选择性表达任何凋亡抑制剂来实现。此方法容许提高转基因所编码的(一种或多种)产物的表达和生成胜过转基因动物内源生成的免疫球蛋白。本专利技术还提供了新的凋亡抑制剂,兔bcl-2。
技术介绍
表达人-小鼠嵌合抗体的小鼠的产生记载于Pluschke et al. , Journal of Immunological Methods 215:27-37(1998)。表达人免疫球蛋白多肽的小鼠的产生记载于 Neuberger et al. , Nature 338 :350-2(1989) ;Lonberg et al., Int. Rev. Immunol. 13(1) 65-93(1995) ;Bruggemann et al. , Curr. Opin.Biotechnol. 8(4) :455_8(1997)。贞用 BAC 克隆产生转基因小鼠记载于Yang et al.,Nat. Biotechnol. 15 :859-65 (1997)。表达人抗体的牛的产生记载于 Kuroiwa et al. , Nature Biotech. 20(9) :889-894(2002) 动物中的基因转移(transgenesis)记载于 Wall RJ, Theriogenology 57(1) 189-201(2002) 转基因兔的产生记载于 Fan J et al.,Pathol. Int. 49 :583-94 (1999); Brem et al.,Mol. R印rod. Dev. 44 :56-62 (1996)。转基因鸡的产生记载于 Etches et al., Methods in Molecular Biology 62 :433-450 (1997) ;Pain et al. , Cells Tissues Organs 165(3-4) :212-9(1999) ;Sherman et al. , Nature Biotech. 16:1050—1053(1998)。免疫球蛋白表达受损的兔记载于Chen et al.,J. Immunol. 150 2783-2793(1993) ;Lamoyi E and Mage RG, J. Exp. Med. 162 1149-1160 (1985) 无 y 球蛋白血症鸡记载于 Frommel et al. , J. Immunol. 105(1) :1-6(1970) ;Benedict et al. , Adv. Exp. Med. Biol. 88 (2) 197-205 (1977)。自细胞克隆动物记载于 T. Wakayama et al.,Nature 394 :369-374 (1998); J. B. Cibelli et al. , Science 280:1256-1258 (1998) ;J. B. Cibelli et al., Nature Biotechnology 16:642-646(1998) ;Α.Ε.Schnieke et al. , Science 278 2130-2133(1997) ;K. H. Campbell et al. , Nature 380:64-66(1996)。兔的核转移克隆记载于 Stice et al. , Biology of Reproduction 39:657-664(1988) ;Cha 11 ah-Jacques et al. , Cloning and Stem Cells 8(4) :295-299(2003) 表达人/人源化免疫球蛋白转基因座的非人转基因动物的产生和抗体自此类转基因动物的产生详细记载于PCT出版物WO 92/03918、WO 02/12437、及美国专利55,545,807、5,814,318和5,570,429。嵌合哺乳动物宿主的同源重组例示于美国专利 5,416,2600用于将DNA引入胚胎的方法记载于美国专利5,567,607。胚胎干细胞的维持和扩增记载于美国专利5,453,357。包含2A肽序列的病毒蛋白质的切割活性记载于I^lmenberg et al. , Virology 190 :754-762(1992) ;Ryan et al.,J Gen Virol 72 :2727-2732(1991) ;Donnelly et al., J Gen Virol 82:1027-1041(2001) ;Donnelly et al. ,J Gen Virol82 :1013-1025(2001); Szymaczak et al. , Nature Biotech 22(5) :589-594(2004)。迄今为止,关于受凋亡抑制剂bcl-2调控的细胞存活机制的相对贡献的研究主要是在小鼠中进行的。bcl-2表达对细胞存活的影响记载于McDonnell et al. , Cell 57: 79-88, (1989) ;Strasser et al.,Current Topics in Microbiology and Immunology 166 :175-181, (1990) ;Knott et al. ,Hybridoma 15(5) :365-371, (1996) ;Smith et al., J.Exp. Med. 191(3) :475-784(2000) ;Strasser et al. , PNAS88 :8661-8665, (1991) ;Kumar et al. , Immunology Letters 65:153-159,(1999)。凋亡抑制剂表达对细胞存活的影响记载于 Takahashi et al. , J. Exp. Med. 190(3) :399-409 (1999)。B细胞发育诸如持续的和短期的B淋巴细胞生成的机制综述于Larming D, Osborne ΒΑ, Knight KL, Immunoglobulin genes and generation of antibody repertoires in higher vertebrates :a key role of GALT. Molecular Biology of B-cells. Alt FW,Honjo T,Nueberger MS,编,Elsevier London,ρ 443 (2004) ;Flajnik MF, Comparative analysis of immunoglobulin genes surprises and portents. Nat. Rev. Immunol. 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员:罗兰·比洛约瑟夫·普拉策
申请(专利权)人:人类多克隆治疗股份有限公司
类型:发明
国别省市:

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1
相关领域技术