本发明专利技术公开了针对自身抗原和／或种属间高度保守抗原的抗体及其制备方法。该针对自身抗原和／或种属间高度保守抗原的抗体，按照下述方法制备：是用小鼠自身抗原和／或与小鼠自身抗原高度保守的异源抗原免疫ＮＺＢ／Ｗ Ｆ１小鼠，得到针对自身抗原和／或种属间高度保守抗原的多克隆抗体或单克隆抗体。本发明专利技术可广泛用于生产具有较高效价的针对小鼠自身抗原和／或人鼠间高度保守抗原的抗体。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种。
技术介绍
利用单克隆抗体治疗疾病是目前医药业的热点，而单克隆抗体药物的研发需要科研和开发两方面的有机配合。在科研方面，需要确证抗体靶点的有效性，这就需要针对鼠抗原的单克隆抗体进行动物试验。目前主要是在大鼠和豚鼠中得到抗小鼠蛋白的单克隆抗体。但大鼠与豚鼠的抗体在小鼠身上是异源蛋白，较长时间的药效学试验会产生排斥反应，而有些种属间高度保守的蛋白在大鼠与豚鼠中也难以得到单克隆抗体。在开发方面，需要针对人的蛋白产生单克隆抗体，而一些抗体药物的理想靶点在种属间是高度保守的，人源性的蛋白与鼠源性的对应蛋白非常相似。由于小鼠对自身蛋白的免疫耐受，高度保守性的蛋白作为抗原免疫小鼠时很难产生较强的免疫反应。对于同源性高于75％以上的蛋白，一般需要免疫相应的基因敲除鼠才能得到高亲和力的抗体。而基因敲除鼠的构建比较困难，很难针对每一种需要产生抗体的高度保守蛋白进行相应的基因敲除，有些基因敲除后小鼠不能存活，或者产生免疫缺陷，还是不能用于免疫。因此迫切需要一种广泛适用的方法，使得种属间高度保守的抗原能在小鼠中产生较好的免疫反应，从而筛选出高亲和力的抗体。纯系新西兰黑色小鼠(New Zealand、Black，NZB)在出生后4-6个月大多数发生自身免疫性溶血性贫血。NZB与NZW(New Zealand、white)杂交产生的F1子代动物NZB/W F1(NZB×NZW F1)，B淋巴细胞存在多克隆活化，产生过量抗体及抗自身抗原的抗体，有自发的类似狼疮性肾炎。因此，一般认为它是人类红斑狼疮的最佳天然模型(Aguas，A.P.，Esaguy，N.，Grande，N.R.，Castro，A.P.，andCastelo Branco，N.A.(1999).Acceleration of lupus erythematosus-likeprocesses by low frequency noise in the hybrid NZB/W mouse model.Aviat.Space Environ.Med.70，A132-A136；Morel，L.and Wakeland，E.K.(1998).Susceptibility to lupus nephritis in the NZB/W model system.Curr.Opin.Immunol.10，718-725；Granholm，N.A.，Graves，K.，Izui，S.，and Cavallo，T.(1985).Pathogenic role of anti-DNA antibodies in murine lupus nephritis.J.Clin.Lab Immunol.18，113-118)。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种制备针对自身抗原和/或种属间高度保守抗原的抗体的方法。本专利技术所提供的制备针对自身抗原和/或种属间高度保守抗原的抗体的方法，是用小鼠自身抗原和/或与小鼠自身抗原高度保守的异源抗原免疫NZB/W F1小鼠，得到针对自身抗原和/或种属间高度保守抗原的多克隆抗体或单克隆抗体。所述小鼠自身抗原为小鼠自身蛋白。所述与小鼠自身抗原高度保守的异源抗原是与小鼠自身蛋白具有75％以上氨基酸序列同源性的异源蛋白。所述小鼠自身蛋白和/或与小鼠自身蛋白具有75％以上氨基酸序列同源性的异源蛋白的免疫佐剂可以为雌激素。所述雌激素可为雌二醇、雌三醇、雌酚或17β雌二酯。为了提高目的蛋白抗原性，所述小鼠自身蛋白和/或与小鼠自身蛋白具有75％以上氨基酸序列同源性的异源蛋白的氨基端或羧基端还融合有T细胞特异性抗原决定簇。所述T细胞特异性抗原决定簇可为可以被小鼠T细胞特异性识别，但不能被小鼠B细胞识别的任何异源蛋白的一部分，如具有序列表中序列1的氨基酸残基序列。所述小鼠自身蛋白具体可为IL-18；所述与小鼠自身蛋白具有75％以上氨基酸序列同源性的异源蛋白具体可为人MIF或人HMGB1。所述方法中还包括纯化针对自身抗原和/或种属间高度保守抗原多克隆抗体或单克隆抗体的步骤。由上述方法制备的针对自身抗原和/或种属间高度保守抗原的多克隆抗体或单克隆抗体也属于本专利技术的保护范围。本专利技术利用NZB/W F1小鼠自发产生自身抗体的特点，避免了小鼠的免疫耐受，使得小鼠自身抗原以及人鼠间高度保守的抗原都能在这种小鼠中产生较好的免疫反应。本专利技术用皮下植入雌激素的方法进一步打破小鼠的免疫耐受，获得更高的免疫效价。本专利技术用针对鼠T细胞的细菌抗原肽与目标蛋白产生重组融合蛋白，从而为NZB/W F1小鼠体内的自身抗原特异性B细胞提供有效的T细胞帮助。本专利技术可广泛用于生产具有较高效价的针对小鼠自身抗原和/或人鼠间高度保守抗原的抗体。附图说明图1A为用重组鼠IL-18蛋白第二次免疫NZB/W F1和野生型小鼠的抗体效价结果图1B为用重组鼠IL-18蛋白第二、三、四次免疫NZB/W F1小鼠的抗体效价结果图2A为按0毫克/只，0.72毫克/只，2.5毫克/只和5毫克/只的剂量植入雌激素的NZB/W F1小鼠经重组鼠IL-18蛋白第二次免疫后的抗体效价结果图2B为按0毫克/只，0.01毫克/只，0.05毫克/只，0.18毫克/只和0.72毫克/只的剂量植入雌激素的NZB/W F1小鼠经重组鼠IL-18蛋白第三次免疫后的抗体效价结果图3为用人MIF蛋白免疫NZB/W F1小鼠的抗体效价结果图4为用HMGB1-GST和HMGB1-MT免疫NZB/W F1小鼠的抗体效价结果具体实施方式下述实验方法，如无特别说明，均为常规方法。实施例1、用鼠IL-18蛋白免疫NZB/W F1小鼠获得较高效价对3个月龄的NZB/W F1小鼠(南京大学模式动物研究所)和B6(野生型)小鼠(北京维通利华实验动物技术有限公司)进行如下四次免疫10微克重组鼠IL-18(Biosource International，Inc.，货号PMC0184)加完全弗氏佐剂皮下免疫(第一次免疫)，14天和21天后5微克重组鼠IL-18加不完全弗氏佐剂皮下免疫两次(第二次和第三次免疫)，再过14天后用5微克重组鼠IL-18静脉注射两次(隔天一次)进行第四次免疫。同时按照上述方法，用PBS(pH 7.5)免疫3个月龄的NZB/W F1小鼠和B6(野生型)小鼠四次，每次免疫剂量为0.1ml/只，作为对照。每次免疫后1天取血清，用重组鼠IL-18(10微克/毫升)包板，ELISA检测抗体效价。结果表明NZB/W F1鼠的免疫反应明显高于野生型鼠(图1A)，第四次免疫的NZB/W F1鼠的血清效价可达到6万(图1B)。图1A和图1B中，效价OD＝0.5表示ELISA读数为0.5时血清的稀释度。图1A中，BW-728、BW-729、BW-730、BW-731和BW-732表示PBS第二次免疫后的五只NZB/W F1小鼠的抗体效价；BW-733、BW-734、BW-735、BW-736和BW-737表示重组鼠IL-18第二次免疫后的五只NZB/W F1小鼠的抗体效价；B6-227、B6-229和B6-230表示PBS第二次免疫后的三只B6小鼠的抗体效价；B6-247、B6-248、B6-249和B6-250表示PBS第二次免疫后的四只B6小本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种制备针对自身抗原和／或种属间高度保守抗原的抗体的方法，是用小鼠自身抗原和／或与小鼠自身抗原高度保守的异源抗原免疫ＮＺＢ／ＷＦ１小鼠，得到针对自身抗原和／或种属间高度保守抗原的多克隆抗体或单克隆抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：唐捷，王云波，周洪哲，曾明辉，
申请(专利权)人：中国科学院生物物理研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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