一种棉花多基因聚合育种的分子检测方法技术

本发明专利技术公开了一种快速实现转FBP：：IaaM亲本及其与转Bt抗虫棉花材料杂交、回交等不同世代材料的FBP：：IaaM与Bt基因的分子检测方法，其包括以下步骤：（1）利用卡那霉素对棉花进行抗性鉴定；（2）提取含有目的基因棉花的基因组DNA；（3）以第（1）步提取的基因组DNA为模板，用SSR引物进行PCR扩增；（4）对扩增产物进行凝胶电泳；（5）对电泳结果进行分析，发现可以同时检测转FBP：：IaaM亲本及其与转Bt抗虫棉花材料杂交、回交等不同世代材料的FBP：：IaaM与Bt基因。本发明专利技术方法技术可靠、操作简便、结果准确、成本低等有优点，有利于大规模的快速检测，对棉花高产、多抗等性状的多基因分子聚合育种具有重要意义。

Molecular detection method for multiple gene pyramiding breeding of cotton

The invention discloses a fast implementation of FBP:: IaaM and Bt transgenic cotton and its parental materials of different hybrid and backcross generation materials FBP:: IaaM Bt gene and molecular detection method, which comprises the following steps: (1) - to identify the resistance of cotton using kanamycin; (2) extraction the genomic DNA containing the gene of cotton; (3) to (1) of the extraction of genomic DNA as template for PCR amplification with SSR primer; (4) the PCR product was gel electrophoresis; (5) the electrophoresis results were analyzed, that can simultaneously detect FBP:: IaaM and Bt and its parents Bt cotton hybrid and backcross generation materials of different materials: FBP: IaaM and Bt gene. The method of the invention is reliable, simple and accurate, low cost advantages, is conducive to the rapid detection of large-scale, multi gene has important significance on cotton yield, resistance traits breeding.

【技术实现步骤摘要】
一种棉花多基因聚合育种的分子检测方法
本专利技术属于棉花分子育种
，涉及到一种棉花多基因聚合育种材料的分子检测方法，是一种快速棉花育种材料的分子检测方法，主要用于转高产（高衣分FBP：：IaaM）和抗虫等重要基因棉花品系聚合育种过程中棉花材料的分子检测。
技术介绍
棉花是关系国计民生的重要战略物资，是仅次于粮食的第二大农作物，涉及到农业和纺织工业两大产业，在国民经济中起着重要作用。近年来，在国家重点基础研究发展计划（973计划）、高技术研究发展计划（863计划）和转基因生物新品种培育重大专项等项目的支持下，以改良品质、提高产量、增强抗逆性等为特征的在第二代转基因技术在棉花遗传改良中取得了突破性进展，中国农业科学院棉花研究所、西南大学、复旦大学等单位在转基因高衣分棉花材料（转FBP：：IaaM基因）（ZhangM.etal.Spatiotemporalmanipulationofauxinbiosynthesisincottonovuleepidermalcellsenhancesfiberyieldandquality,NatureBiotechnology,2011,29(5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速实现转FBP：：IaaM亲本及其与转Bt抗虫棉花材料杂交、回交不同世代材料的FBP：：IaaM与Bt基因的分子检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）采用喷雾加涂抹的方法对棉花抗性进行卡那霉素鉴定；（2）提取提取含有目的基因棉花基因组DNA；（3）以第（2）步中提取的基因组DNA为模板，将FBP：：IaaM转基因系基因检测特异性引物（P1）、Bt毒蛋白基因（B1）和内标基因Sad1基因引物S1，分别进行单一PCR扩增和多重PCR扩增，其中，2个SSR特征引物碱基序列为：引物B1：Cry‑F：5’‑GAAGGTTTGAGCAATCTCTAC‑3’；Cry‑R：5’‑CGATCAGCCTA...

【技术特征摘要】
1.一种快速实现转FBP：：IaaM亲本及其与转Bt抗虫棉花材料杂交、回交不同世代材料的FBP：：IaaM与Bt基因的分子检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）采用喷雾加涂抹的方法对棉花抗性进行卡那霉素鉴定；（2）提取提取含有目的基因棉花基因组DNA；（3）以第（2）步中提取的基因组DNA为模板，将FBP：：IaaM转基因系基因检测特异性引物（P1）、Bt毒蛋白基因（B1）和内标基因Sad1基因引物S1，分别进行单一PCR扩增和多重PCR扩增，其中，2个SSR特征引物碱基序列为：引物B1：Cry-F：5’-GAAGGTTTGAGCAATCTCTAC-3’；Cry-R：5’-CGATCAGCCTAGTAAGGTCGT-3’；引物P1：G-P1：5’-ttttggtgaaattctggtctgc-3’G-P2：5’-aaaacagggcttggattag-3’（4）对扩增产物进行凝胶电泳；（5）对电泳结果进行分析：卡那霉素抗性的植株初步认定为携带有Bt基因或/和转FBP：：IaaM基因材料，进入下一步试验；分别使用引物P1、引物B1和S1的目的片段与该三对引物的多重PCR目的片段的大小一致，说明该方法结果可靠；使用引物组合B1/P1，以FBP：：IaaM基因纯系与转基因抗虫棉F1代植株、非转基因纯系为模板时，在F1的5个单株中，均可以扩增出相应的目的条带，而非转基因系则未见...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁有禄，商海红，葛群，张震，刘爱英，石玉真，巩万奎，龚举武，李俊文，陈婷婷，王艳玲，
申请(专利权)人：中国农业科学院棉花研究所，
类型：发明
国别省市：河南,41