营养不良性疾病的高效全身治疗制造技术

包含用于治疗受试者，优选人类中的营养不良性疾病的基因治疗产品的组合物，其中：所述基因治疗产物包含编码功能性微肌营养不良蛋白的核酸序列；所述组合物是全身施用的。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】营养不良性疾病的高效全身治疗本专利技术提供一种用于营养不良性疾病，特别是在人和狗中的营养不良性疾病的高效基因治疗产品，其特征在于编码微小肌营养不良蛋白的序列，以及递送载体和给药途径。专利技术背景杜氏肌营养不良症(DMD)是最常见的渐进性肌肉退行性疾病，影响大约每3500至5000出生男性中的一个。DMD是由位于X染色体上编码肌营养不良蛋白的基因缺失或突变引起的。肌营养不良蛋白是肌营养不良蛋白-糖蛋白复合物的装配所必需的，并为肌纤维的细胞骨架和细胞外基质之间提供机械和功能性连接。功能性肌营养不良蛋白的缺乏引起纤维变性、炎症、坏死和肌肉被疤痕和脂肪组织替代，导致进行性肌无力和在生命的第二和第四个十年由于呼吸和心脏衰竭导致的过早死亡(Moser,H.,HumGenet,1984.66(1):第17-40页)。所谓Becker型肌营养不良(BMD)疾病的一个温和形式与DMD的区别在于延迟发作，后来就是依赖于轮椅上的支持，以及较长的寿命跨度。BMD是由保持阅读框和该基因的最关键的部分突变造成的，导致截短的但仍有功能的肌营养不良蛋白(MuntoniF等,LancetNeurol,2003)。目前没有可用于DMD(Rodino-Klapac,L.R.等,CurrNeurolNeurosciRep,2013.13(3):p.332)或BMD的治愈或有效治疗方法。常规疗法仅限于支持治疗，部分地减轻症状和体征，但不直接靶向疾病机制也不反转表型。当前正在开发用于DMD的多种治疗策略，包括体内基因治疗、细胞移植治疗、药物救援DMD无义突变和外显子跳跃策略以修复DNA基因阅读框。所有这些策略都有需要克服的问题，包括靶向不同的肌肉群、递送的优化，转基因的长期表达和潜在的免疫应答(Jamin等,ExpertOpinBiolTher,2014)。肌营养不良蛋白基因是人类基因组中最大的已知基因，并且由于太大以至于不能容纳在已知的基因治疗载体系统内。因此，就今天而言，实质有2种用病毒载体的DMD基因治疗策略：i)反义寡核苷酸的组成性表达以促进外显子跳跃，这仅适合于某些突变，以及ii)编码功能性、缩小尺寸的肌营养不良蛋白(“微肌营养不良蛋白”，也称为”小型营养蛋白”)的cDNA的组成型表达。这两种策略，使用小型反义序列或使用微肌营养不良蛋白的，解决在DMD基因治疗中使用AAV载体的主要障碍，即他们的包装能力。AAV载体可容纳约4.7kb，而野生型肌营养不良蛋白的cDNA的大小约为14kb。为了克服这个问题，许多研究已经开发了部分缺失，但高度功能性的肌营养不良蛋白基因，其可以成功包装于AAV载体内，并显示出改善，尽管不能完全正常化动物模型中的肌营养不良表型。mdx小鼠模型通常用于测试编码微肌营养不良蛋白新构建体。然而，这种模型也有缺点，因为mdx小鼠显示所述疾病的一个较不严重的形式，没有免疫反应。其它动物模型是GRMD狗，这被认为更可靠的预测基因治疗产物在人体中的治疗潜力(Kornegay等.,MammGenome,2012)。在所有提出的微肌营养不良蛋白的序列中，FosterH.等(MolTher,2008.16(11):p.1825-32)在小鼠中，在重组AAV载体(rAAV2/8)中，在肌肉特异性启动子(Spc5-12)的控制下，比较了微小肌营养不良蛋白(microdystrophin)基因的两种不同配置ΔAB/R3-R18/ΔCT和ΔR4-R23/ΔCT。据报道，微小肌营养不良蛋白(microdystrophin)的密码子人类优化改善了在mdx小鼠模型中的基因转移和肌肉功能。静脉注射3.1011vg总rAAV/8允许高效心脏基因转移和在骨骼肌和隔膜内显著地肌营养不良蛋白的表达。关于CXMDj狗，OhshimaS.等(MolTher,2009.17(1):第73-80页)报道了通过肢体灌注，即在压力下静脉内注射，将在CMV启动子控制下的编码M3微小肌营养不良蛋白(microdystrophin)的rAAV8施用到狗。ZhangY.等(HumMolGenet,2013.22(18):第3720-29页)研究了在DMD小鼠中的全身(5.1012vg总)双重AAV9基因治疗。通过同源重组，通过尾静脉注入的双重AAV载体重构含有肌营养不良蛋白重复R16和R17的nNOS结合微小肌营养不良蛋白。同样地，OdomG.等(MolTher,2011.19(1):第36-45页)论证了在小鼠中，重构编码ΔH2-R19微小肌营养不良蛋白的表达盒，随后血管内共递送两种共享一个中央同源重组的区域的rAAV6载体(2.1012vg总)。WangB.等(JOrthopRes.2009；27(4):第421-6页)在新生小鼠(dKO和mdx)中腹膜内(i.p.)注射3.1011vg总rAAV1载体。这些AAV载体编码微小肌营养不良蛋白(microdystrophin)Δ3990，其置于MCK或CMV启动子控制之下。Koppanati等(Genetherapy.2010；17(11):第1355-62页)报道了在mdx小鼠子宫内基因转移，通过腹膜内注射(i.p.)6.4.1011vg总rAAV8载体，其编码置于CMV启动子控制之下的犬微小肌营养不良蛋白。Schinkel等(HumanGenetherapy.2012；23(6):第566-75页)报道了在mdx小鼠中心脏基因治疗，通过静脉内(IV)注射1012vg总rAAV9载体，其编码置于CMV启动子或心脏特异性MLC0.26启动子控制下的微小肌营养不良蛋白。Gregorevic等(Mol.Therapy2008；16(4):第657-64页)报道了在mdx小鼠中肌肉基因治疗，通过静脉内(IV)注射1013vg总rAAV6载体，其编码置于CMV启动子控制下的ΔR4-R23/ΔCT微小肌营养不良蛋白。Shin等(GeneTherapy2011；18(9):第910-19页)报道了在mdx小鼠中心脏基因治疗，通过静脉内(IV)注射3.1012vg总rAAV9载体，其编码置于CMV启动子控制下的hΔCS2微小肌营养不良蛋白。Shin等(J.ofGeneMedicine2008；10(4):第449页)在小鼠中比较了通过皮下注射或静脉内注射对于编码置于CMV启动子控制下的ΔCS2微小肌营养不良蛋白rAAV8的递送效率。Colgan等(Mol.Therapy2014；22(S1):第S197页)报道了在dKO小鼠中，微小肌营养不良蛋白和卵泡抑素(follistatin)通过静脉注射rAAV6载体的组合基因递送。在DMD的情况下，有价值的治疗的解决方案是具有以下特征的基因治疗产品：-可以合理的剂量(即，在靶组织中适当的基因转移)并可能通过独特的注射全身施用的产品；-在所述剂量下具有可接受的毒性，并且特别是不会诱导针对肌营养不良蛋白的不良免疫应答的产品；-具有满意的向性，即在骨骼肌、而且还包括隔膜和心肌的大区域内具有广泛的基因转移的产品；-能够改善人类的营养不良疾病的产品。在实践中，以前的报道表明，这是一个非常具有挑战性的任务，并且和若干尝试已经失败：使用CMV启动子下编码人类特异性，但不是密码子优化的微小肌营养不良蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于治疗人或狗的营养不良性疾病的包含基因治疗产品的组合物，其中：‑所述基因治疗产品包含携带编码ΔR4‑R23/ΔCT微肌营养不良蛋白的核酸序列的腺相关病毒(AAV)载体；‑所述组合物是全身施用的。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.27 EP 14174848.3;2015.04.24 EP PCT/EP2015/1.用于治疗人或狗的营养不良性疾病的包含基因治疗产品的组合物，其中：-所述基因治疗产品包含携带编码ΔR4-R23/ΔCT微肌营养不良蛋白的核酸序列的腺相关病毒(AAV)载体；-所述组合物是全身施用的。2.根据权利要求1所述的用于其用途的组合物，其中所述组合物通过血管内注射，有利地通过静脉注射施用。3.根据权利要求1-2中任一所述的用于其用途的组合物，其中所述编码微肌营养不良蛋白的核酸序列是人或犬来源的，有利地是优化用于人或狗的序列。4.根据权利要求1-3中任一所述的用于其用途的组合物，其中所述编码微肌营养不良蛋白的核酸序列的表达处于肌肉特异性启动子的控制下，有利地为Spc5-12。5.根据权利要求1-4中任一所述的用于其用途的组合物，其中所述基因治疗产品包含与SEQIDNO：1或SEQIDNO：290％同源的序列。6.根据权利要求5所述的用于其用途的组合物，其中所述基因治疗产品包含SEQIDNO：1或SEQIDNO：2的序列。7.根据权利要求1-6中任一所述的用于其用途的组合物，其中所述AAV载体是血清型2,...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·迪克逊，T·沃伊特，P·穆利耶，C·拉·吉内，
申请(专利权)人：吉尼松公司，皇家霍洛威和贝德福德新学院，
类型：发明
国别省市：法国,FR