产甘草次酸的重组酿酒酵母、其构建方法以及用途技术

本发明专利技术涉及产甘草次酸的重组酿酒酵母、其构建方法以及用途。具体地，本发明专利技术涉及保藏编号为CGMCC13126的产甘草次酸的重组酿酒酵母、其构建方法以及其在生产甘草次酸中的用途。

Recombinant Saccharomyces cerevisiae producing glycyrrhetinic acid, method for the construction thereof and use thereof

The present invention relates to recombinant Saccharomyces cerevisiae producing glycyrrhetinic acid, construction method and application thereof. Specifically, the invention relates to a recombinant Saccharomyces cerevisiae for the production of glycyrrhetinic acid numbered CGMCC13126, a method for constructing the same, and its use in the production of glycyrrhetinic acid.

【技术实现步骤摘要】
产甘草次酸的重组酿酒酵母、其构建方法以及用途
本专利技术涉及甘草次酸生产的
具体地，本专利技术涉及产甘草次酸的重组酿酒酵母、其构建方法以及用途。
技术介绍
甘草(GlycyrrhizauralensisFisch)是豆科甘草属多年生草本植物，以根和茎入药,有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药等功效，是我国应用最为广泛的传统中药材。目前，从甘草已分离得到约200余种化合物，主要分为三萜类，黄酮类及多糖类等。其中甘草酸(glycyrrhizicacid)又称甘草甜素(glycyirrhizin)，是一种齐墩果烷型五环三萜类皂苷，是甘草最主要的活性成分，占甘草干重的2-8％。现代药理研究证实甘草酸有多种药学活性，抗菌抗炎、调节机体免疫力、抗溃疡等。甘草酸对于多种DNA和RNA病毒如免疫缺陷病毒(HIV)，急性呼吸系统冠状病毒(SARS)，肝炎病毒等均有明显抑制作用，其中对HIV抑制率高达90％。甘草酸还有降血脂与抗动脉粥样硬化作用，以及防癌、抗癌作用。除了具有上述功效作用，甘草酸的甜度是蔗糖的150倍左右，因此被作为天然甜味剂广泛应用于食品、烟草等领域。甘草次酸是甘草本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种产甘草次酸的重组酵母菌株，所述重组酵母菌株过表达酵母基因ERG10、ERG12、ERG13、ERG19、ERG20、ERG9、ERG1、ERG8、IDI1和tHMG；以及所述重组酵母菌株表达甘草次酸合成途径中的β‑AS、CYP88D6和CYP72A154基因以及拟南芥的细胞色素P450还原酶基因；同时所述重组酵母菌株删除了BTS1。

【技术特征摘要】
1.一种产甘草次酸的重组酵母菌株，所述重组酵母菌株过表达酵母基因ERG10、ERG12、ERG13、ERG19、ERG20、ERG9、ERG1、ERG8、IDI1和tHMG；以及所述重组酵母菌株表达甘草次酸合成途径中的β-AS、CYP88D6和CYP72A154基因以及拟南芥的细胞色素P450还原酶基因；同时所述重组酵母菌株删除了BTS1。2.根据权利要求1所述的产甘草次酸的重组酵母菌株，其中CYP88D6和CYP72A154基因是密码子优化的，所述密码子优化的CYP88D6和CYP72A154序列分别如SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示。3.一种产甘草次酸的重组酵母菌株，其于2016年10月21日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC13126。4.一种制备权利要求1或2所述的产甘草次酸的重组酵母菌株的方法，所述方法包括步骤：a)从甘草植物中获得参与甘草次酸合成途径的β-AS、CYP88D6和CYP72A154基因，从拟南芥中获得CPR1基因片段；b)将步骤a)中获得的β-AS、CYP88D6、CYP72A154以及CPR1基因片段，构建Ppgk1-β-AS-Tadh1、Ptdh3-CYP88D6-Tcyc1、Padh1-CYP72A154-adh1、Ptdh3-CPR1-Tcyc1基因表达簇，将上述四个基因表达簇整合至酵母菌染色体Cen.pk2-1D的rDNA位点；c)将步骤b)中的CYP88D6和CYP72A154基因进行密码子优化，获得OPCYP88D6和OPCYP72A154基因，构建Ptdh3-OPCYP88D6-Tcyc1、Padh1-OPCYP72A154-adh1基因簇，连同Ppgk1-β-AS-Tadh1、Ptdh3-CPR1-Tcyc1基因簇，一起整合入酿酒酵母Cen.pk2-1D的rDNA位点；d)从酵母中PCR扩增获得酵母菌株的ERG9、ERG20、ERG1和tHMG片段，将ERG20和ERG9基因进行融合获得融合片段ERG20+9或者ERG9+20，连同ERG1和tHMG一起，构建其对应的基因表达簇Ptdh3...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈士林，王彩霞，孙伟，苏新尧，张梦婷，孙梦楚，
申请(专利权)人：中国中医科学院中药研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11