反义核苷酸或含有它的片段，其特征在于：所述反义核苷酸由下列序列１－３表示： 序列１：５’－ＴＣＴＧＴ ＧＴＴＧＴ ＡＧＧＴＧ ＡＣＣＡＧ－３’，命名为ＢＣＴ－６１； 序列２：５’－ＣＡＧＣＡ ＧＣＣＧＡ ＧＣＣＡＧ ＣＣＣＧＡ－３’，命名为ＢＣＴ－４１；或 序列３：５’－ＣＡＧＧＧ ＣＣＴＣＡ ＧＡＡＴＣ ＣＡＣＡＡ－３’，命名为ＢＣＴ－３６。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
,含它们的药物组合及其用于治疗癌症的用途的制作方法
本专利技术涉及靶向HER-2基因的，含它们的药物组合物及其用于治疗癌症的用途。
技术介绍
HER-2(c-erbB-2，neu)是一种与乳腺癌的发生、发展、预后等密切相关的原癌基因。约有高达30％的乳腺癌患者伴随有HER-2及其基因产物(p185HER-2/neu)的过表达，HER-2过表达的乳腺癌病人采用化疗、放疗、激素治疗或联合治疗等多种手段均无显著疗效(Menard S J Cell Physiol2000；182150-161.Pegram MD Oncogene 1997；15537-547。DepowskiPL Am J Clin Pathol 1999；112459-469)。近年来，选择HER-2原癌基因或/和p185HER-2/neu作为治疗乳腺癌的靶点已经越来越引起人们的关注。其中p185HER-2/neu特异的人源化单克隆抗体Herceptin(赫赛汀)用于治疗HER-2高表达的乳腺癌病人已被批准用于临床，并取得令人鼓舞的疗效(Miles DW Breast Cancer Res 2001；3380-384)。类药物可直接作用于RNA水平，并可以克服蛋白药物的诸多缺点。本专利技术的主要目的就在于寻找靶向HER-2的。
技术实现思路
本专利技术者经过广泛深入研究，现已发现下面对HER-2过表达的肿瘤细胞株如SK-BR-3乳腺癌、BT474乳腺癌细胞有良好抑制作用的。因此，本专利技术第一方面涉及的是具有下面序列1-3的或含有它们的片段序列15’-TCTGT GTTGT AGGTG ACCAG-3’，命名为BCT-61；序列25’-CAGCA GCCGA GCCAG CCCGA-3’，命名为BCT-41；或序列35’-CAGGG CCTCA GAATC CACAA-3’，命名为BCT-36。本专利技术再一方面涉及的是序列1-3的反义核苷酸或含其的片段用于治疗癌症的用途。本专利技术再一方面涉及的是至少一种序列1-3的或含其的片段用于制备用于治疗癌症的药物的用途，序列15’-TCTGT GTTGT AGGTG ACCAG-3’，命名为BCT-61；序列25’-CAGCA GCCGA GCCAG CCCGA-3’，命名为BCT-41；或序列35’-CAGGG CCTCA GAATC CACAA-3’，命名为BCT-36。本专利技术再一方面涉及一种药物组合物，其包括至少一个序列1-3的或含其的片段及药用载体，序列15’-TCTGT GTTGT AGGTG ACCAG-3’，命名为BCT-61；序列25’-CAGCA GCCGA GCCAG CCCGA-3’，命名为BCT-41；或序列35’-CAGGG CCTCA GAATC CACAA-3’，命名为BCT-36。具体实施例方式根据本专利技术，优选将本专利技术用于制备用于治疗乳腺癌的药物。下面的实施例是对本专利技术的进一步说明，但不意味着对本专利技术任何限制。实施例11.人乳腺癌细胞系(SK-BR-3、BT-474等)的培养及的处理接种细胞于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基中(补充青、链霉素各100ku·L-1)，培养器皿置于37℃含有5％CO2的细胞培养箱中。培养细胞达到50～60％融合时，用无血清培养基冲洗2遍。按Gibcol BRL公司脂质体转染说明书的要求，将导入到肿瘤细胞内。将脂质体lipofectamine 2000/无血清无抗生素培养基＝1/25的比例，配制成脂质体溶液，室温下静置30分钟。等体积混合用无血清培养基溶解的不同浓度的，静置20分钟后，加入到培养器皿中，迅速补充等量的无血清培养基。置于37℃含5％CO2的培养箱中6小时后，换正常培养基，培养24-48小时后MTT法测定细胞活度。对照组仅含等浓度的脂质体。2.靶向HER-2mRNA的对肿瘤细胞的抑制作用将对数生长期的SK-BR-3细胞或其它的细胞接种于96孔培养板中，20000个细胞/孔。培养18-24小时，按上述方法，加入不同浓度的反应终体积均为200μl。换正常培养基继续培养48-72小时，弃上清。每孔加入200μl新鲜配制的含0.5mg/ml四氮唑盐(MTT)的无血清培养基，37℃培养4小时后弃上清。以200μlDMSO溶解甲臜。轻度振荡后，用酶标仪在检测波长为570nm、参比波长为450nm下测定光吸收值。本专利技术对乳腺癌SK-BR-3细胞系强抑制增殖作用。表1～3显示本专利技术对SK-BR-3乳腺癌细胞体外增殖的抑制作用(N＝4，对照组为脂质体对照)。表1 BCT-61 表2 BCT-41 表3 BCT-36 实施例2反义脱氧寡核苷酸的合成合成方法使用美国ABI公司生产的ABI 390Z核酸合成仪的25umol合成程序，用标准寡核苷酸固相合成亚磷酰胺法合成。试剂为四乙基秋兰姆化二硫(Tetraethylthiuram disulfide)。制备时，将固相支持物连接保护的、通过固相合成的含本专利技术核苷酸序列的寡核苷酸，用浓氨水在55℃条件下，作用15个小时脱保护，从固相支持物上切离。用HPLC法进行纯化。本专利技术具有序列1-3的可按上述方法制备得到。序列表(1)一般资料I.序列数量3(2)序列BCT-61的资料I.序列特征a)核苷酸长度20b)类型核酸c)链型单链d)拓扑特征链状II.是否反义反义III.序列描述BCT-615’-TCTGT GTTGT AGGTG ACCAG-3’，20(3)序列BCT-41的资料I.序列特征a)核苷酸长度20b)类型核酸c)链型单链d)拓扑特征链状II.是否反义反义III.序列描述BCT-415’-CAGCA GCCGA GCCAG CCCGA-3’， 20(4)序列BCT-36的资料I.序列特征a)核苷酸长度20b)类型核酸c)链型单链d)拓扑特征链状II.是否反义反义 III.序列描述BCT-365’-CAGGG CCTCA GAATC CACAA-3’， 20权利要求1.反义核苷酸或含有它的片段，其特征在于所述反义核苷酸由下列序列1-3表示序列15’-TCTGT GTTGT AGGTG ACCAG-3’，命名为BCT-61；序列25’-CAGCA GCCGA GCCAG CCCGA-3’，命名为BCT-41；或序列35’-CAGGG CCTCA GAATC CACAA-3’，命名为BCT-36。2.权利要求1的反义核苷酸或含有它的片段，其中反义核苷酸由序列1表示序列15’-TCTGT GTTGT AGGTG ACCAG-3’，命名为BCT-61。3.权利要求1的反义核苷酸或含有它的片段，其中反义核苷酸由序列2表示序列25’-CAGCA GCCGA GCCAG CCCGA-3’，命名为BCT-41。4.权利要求1的反义核苷酸或含有它的片段，其中反义核苷酸由序列3表示序列35’-CAGGG CCTCA GAATC CACAA-3’，命名为BCT-36。5.一种药物组合物，其包括至少一种序列1-3的反义核苷酸或有它的片段及药用载体序列15’-TCTGT GTTGT AGGTG ACCAG-3’，命名为BCT-61；序列25’-CAGCA GCCGA GCCAG C本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：宋海峰，杨栓平，汤仲明，朱宝珍，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院放射医学研究所，
类型：发明
国别省市：
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