从西兰花籽中分离制备葡萄糖莱菔子苷的方法技术

本发明专利技术公开了一种从西兰花籽中分离制备葡萄糖莱菔子苷的方法。采用甲醇浸提西兰花籽中的硫苷；用萃取法对浸提得到提取物进行初步纯化，得到西兰花籽硫苷粗提物；以逆流色谱仪为分离设备分离纯化西兰花籽花色苷粗提物中的葡萄糖莱菔子苷，其溶剂系统由常温常压下处于液态的正丁醇、乙腈、和１０％硫酸铵水溶液组成，乙腈、正丁醇和１０％硫酸铵的体积比为０．５∶２～４∶１，本发明专利技术的方案成本较低、经济适用，分离所得葡萄糖莱菔子苷纯度在８５％以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食品加工
，涉及西兰花籽深加工技术，特别是从西兰花籽中分离制 备葡萄糖莱菔子苷的方法。
技术介绍
西兰花籽是我国的传统特产蔬菜，其风味独特，且具有很高的营养保健价值，含有丰富 的营养物质和活性物质，硫代葡萄糖苷类化合物是其中最主要的一类活性成分。西兰花籽硫 苷主要成分为葡萄糖莱菔子苷。国内外研究表明葡萄糖莱菔子苷具有抗氧化、抗癌、抗突变 等生物活性，并对DNA分裂有保护作用和减轻眼睛的疲劳、提高夜间视力和改善视觉瞬间 改变适应性。从西兰花籽分离制备葡萄糖莱菔子苷未有文献报道。现有关于硫代葡萄糖苷的分离主要采用制备型高效液相色谱，其局限性是分离量少。其 次，高效液相色谱柱价格昂贵、再生使用相对困难，分离得到硫代葡萄糖苷成本较高，难以 发展成为制备量大的分离技术。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种成本较低、经济适用的从西兰花籽中分离制备葡萄糖莱菔子苷 的方法。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案采用甲醇浸提西兰花籽中的硫苷；用萃取 法对浸提得到提取物进行初步纯化，得到西兰花籽硫苷粗提物；以逆流色谱仪为分离设备分 离纯化西兰花籽花色苷粗提物中的葡萄糖莱菔子苷.，其溶剂系统由常温常压下处于液态的乙腈、正丁醇和10%硫酸铵水溶液组成，乙腈、正丁醇和10%硫酸铵的体积比为0.5:2 4:1， 水的用量应至少保证使溶剂系统上下相分层，硫酸铵水溶液的浓度为10%。下相做固定相， 上相做流动相。以上方案按步骤叙述如下1. 采用甲醇溶剂浸提西兰花籽中的葡萄糖莱菔子苷，得到葡萄糖莱菔子苷提取液。2. 将葡萄糖莱菔子苷提取液真空浓縮至含固形物；3. 在上述浓縮液中加入适量的水，用乙酸乙酯萃取两次，脱脂为水相葡萄糖莱菔子苷；4. 将葡萄糖莱菔子苷水相真空浓縮至糊状，再冷冻干燥，获西兰花籽葡萄糖莱菔子苷粗提 物；5. 采用逆流色谱方法分离纯化葡萄糖莱菔子苷粗提物；6.收集逆流色谱分离的葡萄糖莱菔子苷组分进行真空浓缩，直至固形物浓度达到40%以上， 再采用冷冻干燥，得到纯化的葡萄糖莱菔子苷粉末，纯度达95%以上。 步骤(1)所述的浸提过程是采用甲醇溶剂，浸提溶剂与西兰花籽的体积比为5 10: 1，条件为沸水浴，浸提时间为l小时，浸提次数2 3次。步骤(2)、步骤(4)和步骤(6)所述真空浓縮的真空度低于0.09Mpa，温度为35~40。C。步骤(4)和步骤(6)所述冷冻干燥的真空度低于50Pa，温度低于-35'C。 步骤(5)所述逆流色谱方法为采用逆流色谱仪为分离设备，溶剂系统由常温常压下处 于液态的正丁醇、乙腈和10%硫酸铵水溶液组成，乙腈、正丁醇和10%硫酸铵的体积比为0.5: 2 4: 1，水的用量应至少保证使溶剂系统上下相分层，硫酸铵水溶液的浓度为10%，下相做 固定相，上相做流动相；用泵将上述溶剂系统的下相注入逆流色谱仪的色谱柱，并取上述溶 剂系统的部分上相溶解花色苷粗提物制备逆流色谱样品溶液；开启逆流色谱仪和流动相输液 泵，将样品溶液和流动相输入逆流色谱分离柱；用紫外-可见检测器检测逆流色谱流出液，根 据所得的色谱图收集葡萄糖莱菔子苷组分。步骤(5)所述逆流色谱方法中的逆流色谱仪为高速逆流色谱仪(HSCCC)或低速逆流 色谱仪(SRCCC)。附图说明图1为本专利技术的工艺流程图。图2为实施例1的HSCCC分离图谱。图3为实施例1分离所得的葡萄糖莱菔子苷的HPLC图谱。图4为实施例2的HSCCC分离图谱。图5为实施例3的SRCCC分离图谱。具体实施方式 实施例1本实施例的溶剂系统采用乙腈:正丁醇10%硫酸铵水溶液=0.5:3:1，硫酸铵水溶液浓度为 10%;逆流色谱仪为HSCCC-D1000高速逆流色谱仪，葡萄糖莱菔子苷粗提物中葡萄糖莱菔 子苷约占3.6%。量取乙腈500 ml、正丁醇3000 ml和10%硫酸铵1000 ml，置于5000 ml分液漏斗，充分 摇匀，静置分层后，将上下两相分别装入试剂瓶。将下相以40ml/min的流速注入高速逆流色谱的色谱柱。称取葡萄糖莱菔子苷粗提物2.0g溶于50ml下相中制备逆流色谱样品溶液，开 启逆流色谱仪至800转/min，然后以1.0 ml/min的流速输入样品溶液，待进样结束后，再以 2.0 ml/min的流速输入流动相以洗脱柱内的组分，用紫外可见检测器在253nm下检测逆流色 谱流出液，根据检测器采集的图谱收集葡萄糖莱菔子苷组分。分离得到葡萄糖莱菔子苷组分 131 mg，纯度达86%以上。实施例2本实施例的溶剂系统采用乙腈:正丁醇10%硫酸铵水溶液=0.5:2:1，硫酸铵水溶液浓度为 10%，逆流色谱仪为HSCCC-D1000高速逆流色谱仪，西兰花籽花色苷提取物中葡萄糖莱菔 子苷约占6.6%。量取乙腈500 ml、正丁醇2000 ml和10%硫酸铵1000 ml，置于5000 ml分液漏斗，充分 摇匀，静置分层后，将上下两相分别装入试剂瓶。将下相以40ml/min的流速注入高速逆流色 谱的色谱柱。葡萄糖莱菔子苷粗提物2.0g溶于50ml下相中制备逆流色谱样品溶液，开启逆 流色谱仪至800转/min,然后以1.0 ml/min的流速输入样品溶液，待进样结束后，再以2.0 ml/min的流速输入流动相洗脱柱内的组分，用紫外可见检测器在253nm下检测逆流色谱流出 液，根据检测器采集的图谱收集葡萄糖莱菔子苷组分。分离得到葡萄糖莱菔子苷组分130 mg， 纯度达88%以上。实施例3本实施例的溶剂系统采用乙腈:正丁醇10%硫酸铵水溶液=0.5:4:1，硫酸铵水溶液浓度为 10%，逆流色谱仪为SRCCC-D40L低速逆流色谱仪，西兰花籽花色苷提取物中葡萄糖莱菔子 苷约占6.6%。量取乙腈20L、正丁醇160 L和水40L，置于不锈钢桶中，充分搅拌匀，静置分层后， 将上下两相分别装入试剂桶。将上相以600ml/min的流速注入低速逆流色谱的色谱柱。称取 葡萄糖莱菔子苷粗提物500g溶于18L下相中制备逆流色谱样品溶液，开启低速逆流色谱仪至 80转/min，然后以5.0ml/min的流速输入样品溶液，待进样结束后，再以15.0 ml/min的流速 输入流动相洗脱柱内的花色苷组分，用紫外可见检测器在235nm下检测逆流色谱流出液，根 据检测器采集的图谱收集葡萄糖莱菔子苷组分。分离得到葡萄糖莱菔子苷组分35.0g，纯度在 85%以上。权利要求1、，其特征在于以下步骤(1)采用甲醇溶剂浸提西兰花籽中的葡萄糖莱菔子苷，得到葡萄糖莱菔子苷提取液。(2)将葡萄糖莱菔子苷提取液真空浓缩至含固形物；(3)在上述浓缩液中加入适量的水，用乙酸乙酯萃取两次，脱脂为水相葡萄糖莱菔子苷；(4)将葡萄糖莱菔子苷水相真空浓缩至糊状，再冷冻干燥，获西兰花籽葡萄糖莱菔子苷粗提物；(5)采用逆流色谱方法分离纯化葡萄糖莱菔子苷粗提物；(6)收集逆流色谱分离的葡萄糖莱菔子苷组分进行真空浓缩，直至固形物浓度达到40％以上，再采用冷冻干燥，得到纯化的葡萄糖莱菔子苷粉末。2、 根据权利要求1所述，其特征在于步骤(l)所述的浸提过程是采用甲醇浸提溶剂与西兰花籽的液料体积比为5 10: 1，条件为水浴加热，浸提时间1小时，浸提次数2~3次。3、 根据权利要求1所述，其特征在于步骤(2)、步骤(4)和步本文档来自技高网...

【技术保护点】
从西兰花籽中分离制备葡萄糖莱菔子苷的方法，其特征在于以下步骤：（１）采用甲醇溶剂浸提西兰花籽中的葡萄糖莱菔子苷，得到葡萄糖莱菔子苷提取液。（２）将葡萄糖莱菔子苷提取液真空浓缩至含固形物；（３）在上述浓缩液中加入适量的 水，用乙酸乙酯萃取两次，脱脂为水相葡萄糖莱菔子苷；（４）将葡萄糖莱菔子苷水相真空浓缩至糊状，再冷冻干燥，获西兰花籽葡萄糖莱菔子苷粗提物；（５）采用逆流色谱方法分离纯化葡萄糖莱菔子苷粗提物；（６）收集逆流色谱分离的葡萄 糖莱菔子苷组分进行真空浓缩，直至固形物浓度达到４０％以上，再采用冷冻干燥，得到纯化的葡萄糖莱菔子苷粉末。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杜琪珍，崔洪刚，沈莲清，
申请(专利权)人：浙江工商大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]