本发明专利技术提供了抗ERPV-ATIp重组截短蛋白的单克隆抗体及其制备和应用。具体地，利用果蝇S2细胞表达系统，导入特定的ERPV-ATIp截短蛋白编码基因，获取高纯度的重组ERPV-ATI截短蛋白，并以此为抗原获得了抗ERPV-ATIp截短蛋白单克隆抗体。所述单克隆抗体能够特异性的识别ERPV-ATIp截短蛋白，对ERPV-ATIp全长蛋白有高亲和力。
Preparation and application of monoclonal antibody against ERPV-ATIp recombinant truncated protein
The invention provides a monoclonal antibody against ERPV-ATIp recombinant truncated protein and its preparation and application. Specifically, the expression system using Drosophila S2 cells, truncated ERPV-ATIp protein encoding gene into specific, obtaining high purity of recombinant truncated ERPV-ATI protein was used as antigen to obtain anti truncated ERPV-ATIp protein monoclonal antibody. The monoclonal antibody can specifically recognize the truncated protein of ERPV-ATIp, and has high affinity to ERPV-ATIp full-length protein.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，更具体地涉及抗ERPV-ATIp重组截短蛋白单克隆抗体的制备和应用。
技术介绍
红斑性肢痛症相关痘病毒(erythromelalgia-relatedpoxvirus，ERPV)，是正痘病毒属鼠痘病毒的一员，该病毒曾经被命名为Zheng-ZhangVirus，由流行性红斑性肢痛症患者咽拭子中分离。流行性红肿性肢痛症多发于15岁至17岁的女中学生；该病发病急，多在夜间突然发作；起初患者脚趾疼痛，继而脚前掌疼痛；患者常不能安然入眠，冷敷可以缓解疼痛；部分患者脚和腿出现水肿充血，同时伴有麻木感；严重者行走困难；某些患者脚出现病症时，手指也会出现类似病症。EPPV病毒在生长周期中会出现A型包涵体(ATI)，该包涵体由A25L表达的ATIp经组装形成；该包涵体为无病毒型(ATIV-)；在某些流行性红肿性肢痛症病人血清中会出现特异性抗ERPVA型包涵体的IgG。目前，还没有上市的抗ERPVA型包涵体的抗体。因此，本领域迫切需要开发具有良好临床应用前景的抗ERPV病毒的药物和检测抗体。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抗ERPV-ATIp重组截短蛋白单克隆抗体的制备和应用。在本专利技术的第一方面，提供了一种抗原多肽，所述的抗原多肽的序列如SEQIDNO.:2中第497-919位所示。在另一优选例中，所述的抗原多肽是在真核宿主细胞中重组表达的。在另一优选例中，所述的真核宿主细胞包括果蝇S2细胞。在本专利技术的第二方面，提供了一种特异性抗本专利技术第一方面所述的抗原多肽的抗体。在另一优选例中，所述的抗体为多克隆抗体或抗血清。在另一优选例中，所述的抗体为单克隆抗体。在本专利技术的第三方面，提供了一种检测试剂盒，所述的试剂盒含有本专利技术第一方面所述的抗原多肽和/或本专利技术第二方面所述的抗体。在本专利技术的第四方面，提供了一种本专利技术第一方面所述的抗原多肽和/或本专利技术第二方面所述的抗体的用途，用于制备检测红斑性肢痛症相关痘病毒(erythromelalgia-relatedpoxvirus，ERPV)的检测试剂或试剂盒。在另一优选例中，所述的检测试剂包括侧流片。在本专利技术的第五方面，提供了一种用于检测红斑性肢痛症相关痘病毒的检测试剂，所述的检测试剂含有本专利技术第一方面所述的抗原多肽和/或本专利技术第二方面所述的抗体。在另一优选例中，所述的检测试剂包括测试条。在另一优选例中，所述检测条包括：样品垫、结合垫、反应膜、吸收垫、和背衬，其中所述反应膜上设置有检测区和质控区；以及其中，所述的检测区固定有如本专利技术第一方面所述的多肽，且所述结合垫固定有如本专利技术第二方面所述的抗体。在本专利技术的第六方面，提供了一种抗体的重链可变区，所述的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQIDNO:XH1所示的CDR1，SEQIDNO:XH2所示的CDR2，和SEQIDNO:XH3所示的CDR3；优选地，所述重链可变区具有SEQIDNO:XHV所示的氨基酸序列。在本专利技术的第七方面，提供了一种抗体的重链，所述的重链具有本专利技术第六方面所述的重链可变区和重链恒定区。在另一优选例中，所述抗体的重链氨基酸序列如SEQIDNO.:XH所示。在本专利技术的第八方面，提供了一种抗体的轻链可变区，所述轻链可变区具有选自下组的互补决定区CDR：SEQIDNO:XL1所示的CDR1’，SEQIDNO:XL2所示的CDR2’，和SEQIDNO:XL3所示的CDR3’；优选地，所述的轻链可变区具有SEQIDNO:XLV所示的氨基酸序列。在本专利技术的第九方面，提供了一种抗体的轻链，所述的轻链具有本专利技术第八方面所述的轻链可变区和轻链恒定区。在另一优选例中，所述抗体的轻链氨基酸序列如SEQIDNO.:XL所示。在本专利技术的第十方面，提供了一种抗体，所述抗体具有：(1)如本专利技术第六方面所述的重链可变区；和/或(2)如本专利技术第八方面所述的轻链可变区；或者，所述抗体具有：如本专利技术第七方面所述的重链；和/或本专利技术第九方面所述的轻链。在另一优选例中，所述的抗体的亚型为IgG1。在另一优选例中，所述单克隆抗体由选自下组的杂交瘤细胞株产生：5E9、6G12、和/或11B2。在本专利技术的第十一方面，提供了一种重组蛋白，所述的重组蛋白具有：(i)如本专利技术第六方面所述的重链可变区、如本专利技术第七方面所述的重链、如本专利技术第八方面所述的轻链可变区、如本专利技术第九方面所述的轻链、或如本专利技术第十方面所述的抗体；以及(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。在本专利技术的第十二方面，提供了一种多核苷酸，它编码选自下组的多肽：(1)如本专利技术第六方面所述的重链可变区、如本专利技术第七方面所述的重链、如本专利技术第八方面所述的轻链可变区、如本专利技术第九方面所述的轻链、或如本专利技术第十方面所述的抗体；或(2)如本专利技术第十一方面所述的重组蛋白。在另一优选例中，所述多核苷酸的序列具有如SEQIDNO.:XHDNA和/或SEQIDNO.:XLDNA所示的多核苷酸序列。在本专利技术的第十三方面，提供了一种载体，它含有本专利技术本专利技术第十二方面所述的多核苷酸。在本专利技术的第十四方面，提供了一种遗传工程化的宿主细胞，它含有本专利技术第十三方面所述的载体或基因组中整合有本专利技术第十二方面所述的多核苷酸。在本专利技术的第十五方面，提供了一种试剂盒，所述试剂盒中包括：本专利技术第十方面所述的抗体。在另一优选例中，所述试剂盒为酶联免疫检测试剂盒。在本专利技术的第十六方面，提供了一种免疫偶联物，该免疫偶联物含有：(a)本专利技术第十方面所述的抗体或本专利技术第十一方面所述的重组蛋白；和(b)选自下组的偶联部分：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素、或酶。在本专利技术的第十七方面，提供了一种药物组合物，所述组合物包含本专利技术第十方面所述的抗体、本专利技术第十一方面所述的重组蛋白、或本专利技术第十六方面所述的免疫偶联物；以及药学上可以接受的载体。在本专利技术的第十八方面，提供了一种重组多肽的制备方法，该方法包含：(a)在适合表达的条件下，培养本专利技术第十四方面所述的宿主细胞；(b)从培养物中分离出重组多肽，所述的重组多肽是本专利技术第十方面所述的抗体或本专利技术第十一方面所述的重组蛋白。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1显示了采用PCR扩增ERPV-ATIp编码序列片段的电泳结果。图2显示了使用亲和层析方法纯化ERPV-ATIp重组截短蛋白的SDS-PAGE图。图3显示了使用亲和层析方法纯化ERPV-ATIp重组截短蛋白免疫印迹(WB)。图4显示了Balb/c小鼠第三次免疫后血清抗体效价图。图5显示了使用ProteinG亲和层析柱纯化腹水中抗体的SDS-PAGE分析图。图6显示了本专利技术单克隆抗体和Abmart公司的His-Tag(2A8)MousemAb进行免疫印迹分析的结果。图7显示了本专利技术单克隆抗体和Abmart公司的His-Tag(2A8)MousemAb进行免疫沉淀分析的结果。图8显示了本专利技术单克隆抗体与Abbkine公司的Anti-FlagTagMouseMonoclonalAntibody(1B10)(对照)进行免疫荧光实验的结果。图9显示了本本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗原多肽，其特征在于，所述的抗原多肽的序列如SEQ ID NO.:2中第497‑919位所示。
【技术特征摘要】
1.一种抗原多肽，其特征在于，所述的抗原多肽的序列如SEQIDNO.:2中第497-919位所示。2.一种特异性抗权利要求1所述的抗原多肽的抗体。3.如权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述的抗体为多克隆抗体或抗血清。4.如权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述的抗体为单克隆抗体。5.一种检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有权利要求1所述的抗原多肽和/或权利要求2所述的抗体。6.一种权利要求1所述的抗原多肽和/或权利要求2所述的抗体的用途，其特征在于，用于制备检测红斑性肢痛症相关痘病毒(erythromelalgia-relatedp...
【专利技术属性】
技术研发人员：蓝柯，姜福伟，张弛宇，何志祥，
申请(专利权)人：中国科学院上海巴斯德研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31
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