一种1，2，3-丙三酸偶联的EPO拟肽衍生物及其制备方法和应用技术

一种1，2，3-丙三酸偶联的EPO拟肽衍生物及其制备方法和应用。本发明专利技术涉及一种1，2，3-丙三酸偶联的促红细胞生成素拟肽衍生物及其二聚体，所述拟肽衍生物是序列如SEQ ID NO:1所示的单体肽：SEQ ID NO:1GGLYAC6HMGPITX1VC15QPLRX2K；其中，X1为3-(1-萘基)-L-丙氨酸(Nal)，X2为肌氨酸(Sar)，6位和15位的半胱氨酸(C)形成分子内二硫键，N末端乙酰化，所述二聚体的通式如下式I所示.本发明专利技术还提供了该拟肽衍生物及二聚体的制备方法及其可药用盐。本发明专利技术还进一步提供了含有上述拟肽衍生物或二聚体或其可药用盐的药物组合物。本发明专利技术的促红细胞生成素拟肽衍生物、二聚体及其可药用盐可刺激红细胞生成，并显著延长药物在体内的半衰期。

, 2, 3- c acid conjugated EPO pseudo peptide derivative, preparation method and application thereof

, 2, 3- c acid conjugated EPO pseudo peptide derivative, preparation method and application thereof. The invention relates to a 1, 2, erythropoietin 3- c acid conjugated peptidomimetic derivatives and two dimers, the peptide derivatives are monomeric peptide sequence as shown in SEQ ID NO:1: SEQ ID NO:1GGLYAC6HMGPITX1VC15QPLRX2K; among them, X1 3- (1- naphthyl) -L- (alanine Nal, X2) sarcosine (Sar), 6 and 15 of the cysteine (C) to form intramolecular disulfide bonds at the end of two, N acetylation, formula of the two dimers are shown in formula I. The invention also provides the peptidomimetic derivatives and two polymer preparation method and pharmaceutically acceptable salts. The invention further provides a pharmaceutical composition containing the peptide derivative or a two polymer or a pharmaceutically acceptable salt thereof. The invention relates to a erythropoietin mimetic peptide derivative, a two polymer and a pharmaceutically acceptable salt thereof, which can stimulate the generation of red blood cells and prolong the half-life of the medicine in vivo.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学领域，涉及一种1，2，3-丙三酸偶联的促红细胞生成素拟肽衍生物，具体地说，本专利技术涉及一种能够和促红细胞生成素受体结合并激活促红细胞生成素受体或者能起促红细胞生成素激动作用的1，2，3-丙三酸偶联的促红细胞生成素拟肽衍生物及其制备方法，本专利技术还涉及所述拟肽衍生物在制备治疗以缺乏红细胞生成素或红细胞群缺少或缺陷为特征的疾病的药物中的用途。
技术介绍
促红细胞生成素(以下简称EPO)是一种由肾脏合成并且分泌的活性糖蛋白，它作为一种作用于骨髓造血细胞，促进红系祖细胞增生、分化，最终成熟的内分泌激素，对机体供氧状况发挥重要的调控作用。在胚胎早期，促红细胞生成素由肝生成，然后逐渐向肾转移，出生后主要由肾小管间质细胞分泌。在促红细胞生成素诱导红系祖细胞分化过程中，球蛋白被诱导，这能使细胞吸收更多的铁合成功能性的血红蛋白，这种功能性的血红蛋白可以和成熟的红血球中的氧结合，因此，红血球和血红蛋白在提供机体氧方面扮演了极其重要的角色。这一过程是由促红细胞生成素与红祖细胞的表面受体之间的相互作用引起的。当人体处于健康状态时，组织可以从已经存在的红血球中吸收足够多的氧，此时体内的促红细胞生成素浓度很低，这种正常的较低的促红细胞生成素浓度完全可以剌激促进由于年龄的问题而正常损失的红细胞。当循环系统中的依靠红细胞进行氧输送的水平被降低进而出现缺氧情况时，促红细胞生成素在体内的数量将会增加。作为对组织处于缺氧压力的应答，促红细胞生成素水平的提高可以刺激红组细胞的分化达到提高红细胞生成的能力。当体内的红细胞的数量大于正常组织的需求时，循环系统中促红细胞生成素的水平被降低。正是由于促红细胞生成素对于红细胞的生成有着至关重要的作用，因此这类激素对于治疗和诊断以红细胞生成低下和缺陷为特征的血液病方面有着很广泛的前景。促红细胞生成素的部分生物学效应可以通过和细胞膜表面的受体内在作用来调节。最初在使用从小鼠的脾脏里分离出的未成熟的红细胞来研究细胞表面结合的促红细胞生成素蛋白时发现，这种蛋白是由两种多聚肽组成，其分子量大约为85000～100000KD(Sawyer,etal.(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA84:3690-3694)。有研究表明从感染了friend病毒贫血株的小鼠的脾脏红细胞对EP0的响应情况发现，大约有400个结合位点，其中Kd水平高的为100pM，Kd水平低的为800pM。随后的工作就是两种促红细胞生成素受体被单个基因翻录，这个基因已经被克隆。例如，小鼠和人的促红细胞生成素受体的DNA序列以及编码肽的序列在WO90/08822中已经有叙述。目前的模型表明促红细胞生成素结合到促红细胞生成素受体导致了两个促红细胞生成素受体的活化和二聚，这种二聚进一步导致了信号传导的开始。促红细胞生成素克隆基因的应用更有助于帮助寻找这些重要受体的激动剂和拮抗剂。某种程度上能够作用促红细胞生成素受体的肽已经被确定和叙述。特别是确定了一组含有主要肽段的肽，这些肽可以和促红细胞生成素受体结合并能剌激促红细胞生成素细胞的分化增殖。但是能够刺激红细胞增殖分化的肽的EC50却很低，在20nM和250nM之间，因此这些肽在临床应用上受到了较大的限制。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术提供了一种生物活性更好、生物利用度更高的1，2，3-丙三酸偶联的促红细胞生成素拟肽衍生物及其可药用盐以及它们的制备方法。本专利技术所使用的氨基酸除了包括本领域技术人员所熟知的二十种常见氨基酸外还包括部分非常见氨基酸，非常见氨基酸结构及名称见表1表1非常见氨基酸的名称和结构本专利技术提供了一种促红细胞生成素拟肽衍生物，其特征在于，所述拟肽衍生物的单体肽的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示：SEQIDNO:1GGLYAC6HMGPITX1VC15QPLRX2K其中，X1为3-(1-萘基)-L-丙氨酸(Nal)，X2为肌氨酸(Sar)，6位和15位的半胱氨酸(C)形成分子内二硫键，N末端乙酰化。本专利技术还提供了一种促红细胞生成素拟肽衍生物的二聚体，所述二聚体是由上述促红细胞生成素拟肽衍生物的单体肽的21位赖氨酸侧链氨基与1，2，3-丙三酸的1，3位羧基缩合偶联，2位羧基与X3的氨基缩合形成，X3包括6-氨基己酸，7-氨基庚酸，8-氨基辛酸，9-氨基壬酸，11-氨基十一烷酸，12-氨基十二烷酸等所述二聚体的通式如下式I所示:本专利技术还提供了所述二聚体的制备方法，所述方法包括步骤：1)X3羧基与树脂经常用方法连接，X3氨基与1，2，3-丙三酸的2位羧基缩合，1，3位羧基分别与赖氨酸的侧链氨基缩合；2)根据SEQIDNO:1选择氨基酸，通过Fmoc固相多肽合成法合成如式I所示的二聚体。在根据本专利技术的一个实施方案中，所述方法还包括以下步骤：将所述促红细胞生成素拟肽衍生物二聚体纯化、脱盐以及冷冻干燥得到二聚体的冻干粉；优选地，所述纯化是通过在HPLCC18半制备柱中，以乙腈为流动相实现的。本专利技术还提供了一种促红细胞生成素拟肽衍生物的可药用盐，所述可药用盐为所述拟肽衍生物或二聚体与酸性化合物或碱性化合物反应生成的盐；优选地，所述酸性化合物选自盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、对溴苯基磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸或乙酸；优选地，所述碱性化合物选自铵，碱金属或碱土金属的氢氧化物，以及碳酸盐、碳酸氢盐；更优选地，所述碱性化合物选自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、碳酸钠或碳酸钾；更优选地，所述促红细胞生成素拟肽衍生物的可药用盐选自硫酸盐、焦硫酸盐、三氟乙酸盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、盐酸盐、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、辛二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-l,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、甘醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、奈-l-磺酸盐、奈-2-磺酸盐或扁桃酸盐，优选地为三氟乙酸盐。本专利技术提供的促红细胞生成素拟肽衍生物或其二聚体通过公知技术可使用酸性或碱性化合物与之反应成盐，通常采用的形成酸加成盐的酸为：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、对溴苯基磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸、乙酸。优选地，所述促红细胞生成素拟肽衍生物及其二聚体的可药用盐选自硫酸盐、焦硫酸盐、三氟乙酸盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、盐酸盐、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、辛二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-l,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、甘醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、奈-l-磺酸盐、奈-2-磺酸盐和扁桃酸盐等，优选三氟乙酸盐。碱性化合物也可以和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种1，2，3‑丙三酸偶联的促红细胞生成素拟肽衍生物，其特征在于，所述拟肽衍生物的单体肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示：SEQ ID NO:1 GGLYAC6HMGPITX1VC15QPLRX2K其中，X1为3‑(1‑萘基)‑L‑丙氨酸(Nal)，X2为肌氨酸(Sar)，6位和15位的半胱氨酸(C)形成分子内二硫键，N末端乙酰化。

【技术特征摘要】
1.一种1，2，3-丙三酸偶联的促红细胞生成素拟肽衍生物，其特征在于，所述拟肽衍生物的单体肽的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示：SEQIDNO:1GGLYAC6HMGPITX1VC15QPLRX2K其中，X1为3-(1-萘基)-L-丙氨酸(Nal)，X2为肌氨酸(Sar)，6位和15位的半胱氨酸(C)形成分子内二硫键，N末端乙酰化。2.一种1，2，3-丙三酸偶联的促红细胞生成素拟肽衍生物的二聚体，所述二聚体是由上述促红细胞生成素拟肽衍生物的单体肽的21位赖氨酸侧链氨基与1，2，3-丙三酸的1，3位羧基缩合偶联，2位羧基与X3的氨基缩合形成，X3包括6-氨基己酸，7-氨基庚酸，8-氨基辛酸，9-氨基壬酸，11-氨基十一烷酸，12-氨基十二烷酸等所述二聚体的通式如下式I所示:3.一种1，2，3-丙三酸偶联的促红细胞生成素拟肽衍生物的可药用盐，其特征在于，所述可药用盐为如权利要求1所述的拟肽衍生物或权利要求2所述的二聚体与酸性化合物或碱性化合物反应生成的盐；优选地，所述酸性化合物选自盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、对溴苯基磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸或乙酸；优选地，所述碱性化合物选自铵，碱金属或碱土金属的氢氧化物，以及碳酸盐、碳酸氢盐；更优选地，所述碱性化合物选自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、碳酸钠或碳酸钾；更优选地，所述促红细胞生成素拟肽衍生物的可药用盐选自硫酸盐、焦硫酸盐、三氟乙酸盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、盐酸盐、溴化物、
\t碘化物、乙酸盐、丙酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、辛二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-l,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、甘醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、奈-l-磺酸盐、奈-2-磺酸盐或扁桃酸盐，优选地为三氟乙酸盐。4.如权利要求2所述的二聚体的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：1)X3羧基与树脂经常用方法连接，X3氨基与1，2，3-丙三酸的2位羧基缩合，1，3位羧基分别与赖氨酸的侧链氨基缩合；2)根据SEQIDNO:1选择氨基酸，通过Fmoc固相多肽合成法合成如式I所示的二聚体。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：将所述促红细胞生成素拟肽衍生物二聚体纯化、脱盐以及冷冻干燥得到二聚体的冻干粉；优选地，所述纯化是通过在HPLCC18半制备柱中，以乙腈为流动相实现的。6.如权利要求1所述的拟肽衍生物或权利要求2所述的二聚体或权利要求3所述的可药用盐在制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏群超，郑学敏，龚珉，周植星，徐为人，汤立达，
申请(专利权)人：天津药物研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12