O型口蹄疫病毒抗体检测卡及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种O型口蹄疫病毒抗体检测卡及其制备方法，包括装配在外壳内的检测卡本体，所述检测卡本体包括底板，在底板上依次设置样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述硝酸纤维素膜上包被O型口蹄疫抗原为检测线，包被羊抗鸡抗体为质控线，在外壳上对应样品垫开设加样孔，对应硝酸纤维素膜上的检测线和质控线开设视窗孔。本发明专利技术灵敏度高，检测的批内差及批间差小，有较好的重复性，性能稳定，可实现O型口蹄疫病毒抗体现场快速检测，具有较高的实用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测卡，特别是涉及一种用于快速定量检测猪血清中O型口蹄疫病毒抗体的检测卡及其制备方法。
技术介绍
口蹄疫（Foot-and-MouthDisease，FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-MouthDiseaseVirus，FMDV）引起的偶蹄动物(猪、牛、羊、骆驼等)共患的一种急性、热性、高度传染性疫病，其特征是在口、舌、唇、鼻、蹄、乳房等发生水泡，并溃痒形成烂斑。该病传播途径多、速度快，流行区域广，能造成巨大的政治、经济损失，世界动物卫生组织(OfficeInternationaldesEpizooties，OIE)将其列为A类动物疫病。我国政府也将其排在14个一类动物传染病的第一位。目前，大部分OIE成员国都流行FMD，这不仅制约了畜牧业的发展而且还造成畜产品进出口市场的关闭和消费者的恐慌。FMD已经时刻威胁着那些无FMD国家和地区的家畜安全和畜产品贸易。例如，2001年英国暴发FMD时（O型泛亚毒株入侵所致），仅短短的7个月内就造成高达30亿英镑的政府损失和50亿英镑的私人损失。口蹄疫由口蹄疫病毒引起，口蹄疫病毒为小RNA病毒科（Picornaviridae）口蹄疫病毒属（Aphthovirus）的成员。口蹄疫病毒基因组为单股正链RNA，约由8500个核苷酸组成。病毒衣壳由4种结构蛋白即VP1、VP2、VP3和VP4各60个拷贝组成，其中VP1是主要免疫性抗原。口蹄疫病毒共有7个血清型：O、A、C、Asia-I、SAT1、SAT2和SAT3型。目前7个口蹄疫病毒型中O型的流行最为广泛（世界范围内），其次为Asia-I型和A型；C型和南非三型非常罕见，通常只在特定区域流行。O型口蹄疫的防控主要是疫苗免疫及屠宰感染和可疑畜群，而疫苗免疫动物与感染动物体内都会产生结构蛋白抗体，因此检测结构蛋白抗体的诊断方法能确定动物对病毒株的抵抗力。同时日常监测疫苗产生抗体对于养殖场来说，对群体的日常监测是选择疫苗、评估免疫程序合理性、掌握猪群健康状态的重要手段，同时也可从侧面反映饲养场管理是否合理，也是适时注射疫苗的主要依据。市面上有O型口蹄疫病毒抗体胶体金快速检测卡，通过对样品的检测，即可粗略判断猪体内是O型口蹄疫抗体含量，兽医根据检测结果判断是否需要注射O型口蹄疫疫苗。同样市场上也大量使用检测O型口蹄疫抗体酶标试剂盒，即液相阻断ELISA酶标试剂盒，ELISA试剂盒需要酶标仪、温育反应条件、洗板条件，操作工作环境和专业技术人员，另外检测样本还需要复杂的前处理，如采集血液，分离血清等；而快速胶体金虽然检测方便，不需专业技术人员和工作环境，但其检测的灵敏度低，且只能定性，检测范围窄。而本专利技术专利的目的就是克服以上两类试剂盒的各自缺点，通过简单的操作，现场快速、准确、高灵敏地定量（半定量）分析，实现在养猪现场检测。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种O型口蹄疫病毒抗体检测卡及其制备方法，能完全解决上述现有技术的不足之处。本专利技术的目的通过下述技术方案来实现：一种O型口蹄疫病毒抗体检测卡，包括装配在外壳内的检测卡本体，所述检测卡本体包括底板，在底板上依次设置样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述标记垫由载体基层和标记物组成，标记物为载体基层上喷涂镧系荧光检测微球和镧系荧光质控微球形成的一层膜，所述检测微球和质控微球均为表面带有羟基或氨基的硅胶微球或聚苯乙烯微球，且检测微球和质控微球的粒径均为50～500nm，所述硝酸纤维素膜上包被O型口蹄疫抗原为检测线，包被羊抗鸡抗体为质控线，在外壳上对应样品垫开设加样孔，对应硝酸纤维素膜上的检测线和质控线开设视窗孔。作为优选，所述底板为PVC底板,在PVC底板上从左至右依次粘贴样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，且样品垫的右端搭在标记垫的左端上，标记垫的右端搭在硝酸纤维素膜的左端上，吸水纸左端搭在硝酸纤维素膜的右端上。作为优选，所述检测微球为标记有O型口蹄疫抗原的微球，质控微球为标记有鸡lgY或兔lgG的质控微球。作为优选，所述硝酸纤维素膜上的检测线和标记垫上采用的O型口蹄疫抗原均为灭活O型口蹄疫病毒抗原、O型口蹄疫疫苗或O型口蹄疫结构蛋白VP1、VP2和VP3的重组蛋白；所述硝酸纤维素膜上质控线采用的羊抗鸡抗体为羊抗鸡lgY的lgG或者羊抗兔lgG。作为优选，所述检测微球和质控微球均为表面带有羟基或氨基的硅胶微球或聚苯乙烯微球。作为优选，所述标记在生物原料上的镧系荧光微球的镧系荧光是指镧系元素Eu、Sm或Tb与β－二酮配基产生的荧光。其发光效率高、吸收光谱宽、发射光谱很窄、斯特克斯位移宽，使其荧光光谱分析的灵敏度很高。作为优选，所述样品垫为检测血清或血浆的样品垫，或者为检测全血的样品垫。作为优选，本检测卡利用猪血样品中O型口蹄疫病毒抗体、O型口蹄疫病毒抗原的标记物和硝酸纤维素膜上包被O型口蹄疫病毒抗原通过双抗原夹心法来检测猪血样本中O型口蹄疫病毒抗体。作为优选，本检测卡为定量层析检测卡，它是通过检测仪检测层析后检测卡的检测线和质控线发出的荧光信号，然后根据此批检测卡的IC卡储存的标准曲线，再由检测线和质控线的荧光信号从标准曲线计算出待检物的浓度。一种O型口蹄疫病毒抗体检测卡的制备方法，其特征在，包括以下步骤：步骤一，把硝酸纤维素膜粘贴在PVC底板上，并在硝酸纤维素膜上喷涂已稀释至0.2～0.5mg/ml的羊抗鸡lgY的lgG形成质控线和已稀释至0.3～1.0mg/ml的O型口蹄疫抗原形成检测线，烘制后备用；步骤二，用封闭液封闭硝酸纤维素膜10～30分钟，用10mM磷酸缓冲液清洗硝酸纤维素膜10～30分钟，干燥后备用；步骤三，制备标记有鸡lgY的镧系荧光微球和标记有O型口蹄疫抗原的镧系荧光微球；步骤四，把标记有鸡lgY和标记有O型口蹄疫抗原的镧系荧光微球并分别稀释至浓度0.05～0.4μg/ml和1～8μg/ml，并将其喷涂在载体基层上构成标记垫，烘制后备用；步骤五，把样品垫、标记垫、吸水纸依次粘在PVC底板上，组装成大卡，再用剪切机切割成试纸条，装配在检测卡外壳内，即得到O型口蹄疫病毒抗体检测卡。名词解释：羊抗鸡lgY的lgG：羊抗鸡lgY的免疫球蛋白G；羊抗兔lgG：羊抗兔lgG的免疫球蛋白G；鸡lgY：鸡卵黄抗体；兔lgG：兔免疫球蛋白G；抗猪RBC：抗猪红细胞表面蛋白抗体。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：灵敏度高，检测的批内差及批间差小，有较好的重复性，性能稳定，既可检测全血样本，也可以检测血清和血浆样本，与CSFV（猪瘟病毒）、PRRSV（猪呼吸与繁殖障碍综合症耳病病毒)、PCV（猪圆环病毒）、PRV（伪狂犬病毒)、PPV（猪细小病毒）、JEV（乙脑病毒)等抗体没有交叉反应。可实现O型口蹄疫病毒抗体现场快速检测，具有较高的实用价值。附图说明图1是本专利技术的结构示意图；图2是图1中检测卡本体的结构示意图；图3是图2的俯视图；图4是O型本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种O型口蹄疫病毒抗体检测卡，包括装配在外壳内的检测卡本体，其特征在于：所述检测卡本体包括底板，在底板上依次设置样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述标记垫由载体基层和标记物组成，标记物为载体基层上喷涂镧系荧光检测微球和镧系荧光质控微球形成的一层膜，所述检测微球和质控微球均为表面带有羟基或氨基的硅胶微球或聚苯乙烯微球，且检测微球和质控微球的粒径均为50～500nm，所述硝酸纤维素膜上包被O型口蹄疫抗原为检测线，包被羊抗鸡抗体为质控线，在外壳上对应样品垫开设加样孔，对应硝酸纤维素膜上的检测线和质控线开设视窗孔。

【技术特征摘要】
1.一种O型口蹄疫病毒抗体检测卡，包括装配在外壳内的检测卡本体，其特征在于：所述检测卡本体包括底板，在底板上依次设置样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述标记垫由载体基层和标记物组成，标记物为载体基层上喷涂镧系荧光检测微球和镧系荧光质控微球形成的一层膜，所述检测微球和质控微球均为表面带有羟基或氨基的硅胶微球或聚苯乙烯微球，且检测微球和质控微球的粒径均为50～500nm，所述硝酸纤维素膜上包被O型口蹄疫抗原为检测线，包被羊抗鸡抗体为质控线，在外壳上对应样品垫开设加样孔，对应硝酸纤维素膜上的检测线和质控线开设视窗孔。
2.根据权利要求1所述的O型口蹄疫病毒抗体检测卡，其特征在于：所述底板为PVC底板,在PVC底板上从左至右依次粘贴样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，且样品垫的右端搭在标记垫的左端上，标记垫的右端搭在硝酸纤维素膜的左端上，吸水纸左端搭在硝酸纤维素膜的右端上。
3.根据权利要求1所述的O型口蹄疫病毒抗体检测卡，其特征在于：所述检测微球为标记有O型口蹄疫抗原的微球，质控微球为标记有鸡lgY或兔lgG的质控微球。
4.根据权利要求3所述的O型口蹄疫病毒抗体检测卡，其特征在于：所述硝酸纤维素膜上的检测线和标记垫上采用的O型口蹄疫抗原均为灭活O型口蹄疫病毒抗原、O型口蹄疫疫苗或O型口蹄疫结构蛋白VP1、VP2和VP3的重组蛋白；所述硝酸纤维素膜上质控线采用的羊抗鸡抗体为羊抗鸡lgY的lgG或者羊抗兔lgG。
5.根据权利要求3所述的O型口蹄疫病毒抗体检测卡，其特征在于：所述标记在生物原料上的镧系荧光微球的镧系荧光是指镧系元素Eu、Sm或Tb与β－二酮配基产生的荧光。
6.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：常惠芸，吴俊清，邵军军，章健，赵付荣，吴冠英，张永光，李明伟，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，成都微瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：甘肃;62