亲和色谱用载体制造技术

本发明专利技术提供一种杂质的非特异吸附得到抑制、且因长期保存所致的动态结合容量的降低得到抑制的保存稳定性优异的亲和色谱用载体。所述亲和色谱用载体包含固相载体、使环氧基开环而得到的开环环氧基和结合于所述固相载体的配体，所述固相载体含有包含(M－1)结构单元和(M－2)结构单元的共聚物，(M－1)结构单元是来自含环氧基的单乙烯基单体的结构单元，相对于全部结构单元为大于20质量份且为99.5质量份以下，(M－2)结构单元是来自聚乙烯基单体的结构单元，相对于全部结构单元为0.5～80质量份，其中，将所述亲和色谱用载体填充于任意的柱容器，用含有2M的NaCl的pH7.5的20mM磷酸钠缓冲液对柱进行置换，在40℃下静置7天时的柱内的pH上升幅度为2以下。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种亲和色谱用载体。特别是涉及一种对于抗体等蛋白质的纯化有用的亲和色谱用载体。
技术介绍
亲和色谱用载体在包含单克隆抗体的蛋白质的研究、开发和制造中起到重要的作用。亲和色谱用载体一般而言包含具有与靶物质选择性地结合的配体的固相载体。亲和色谱用载体由于固相载体上的配体对靶物质具有高的选择性，因此，与离子色谱、凝胶过滤色谱、反相液相色谱等其它色谱相比，能够以优异的收率且高速地进行经济的纯化。通常，作为蛋白质纯化用的亲和色谱所要求的性能，可以举出：(1)不会非特异吸附靶蛋白质以外的杂质；(2)不会因长时间保管而使结合容量降低，保存稳定性优异；(3)柱操作上具有充分的机械强度等。其中，作为亲和色谱用载体的固相载体，提出了琼脂糖粒子(专利文献1、2)、由苯乙烯－二乙烯基苯的共聚物构成的多孔粒子(专利文献3、4)、由甲基丙烯酸酯系乙烯基单体的聚合物所成的多孔粒子(专利文献5、6)。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特表2008－523140号公报专利文献2：日本特表2009－522580号公报专利文献3：日本特开平08－278299号公报专利文献4：日本特表平10－501173号公报专利文献5：国际公开第2011/125674号公报专利文献6：日本特开2012－141212号公报
技术实现思路
然而，琼脂糖粒子通常弹性模量低，因此，具有以高速流动介质时柱的压力变高这样缺点。另外，琼脂糖粒子通常由天然海草经过漫长、繁杂的工序而制造，因此，难以得到品质一定的琼脂糖。另外，由苯乙烯－二乙烯基苯这样的芳香族乙烯基单体的共聚物构成的多孔粒子通常耐碱性优异，但亲水性低，因此，具有配体的活性低、对靶物质的动态结合容量低这样的缺点。进而，由甲基丙烯酸酯系乙烯基单体的聚合物构成的多孔粒子虽然具有高的亲水性和机械强度，但对于杂质的除去性能期望进一步的改善。本专利技术所要解决的课题在于提供一种杂质的非特异性吸附得到抑制、且因长期保存所致的动态结合容量的降低得到抑制的保存稳定性优异的亲和色谱用载体。因此，本专利技术人进行了潜心研究，结果发现具有含有分别包含特定量的来自含环氧基的单乙烯基单体的结构单元和来自聚乙烯基单体的结构单元的共聚物的固相载体、结合于所述固相载体的配体和开环环氧基的特定亲和色谱用载体的靶物质的动态结合容量高，而且杂质的除去性能和保存稳定性优异，完成了本专利技术。即，本专利技术提供＜1＞一种亲和色谱用载体，包含固相载体、使环氧基开环而得到的开环环氧基和结合于所述固相载体的配体，所述固相载体含有包含(M－1)结构单元和(M－2)结构单元的共聚物，(M－1)结构单元是来自含环氧基的单乙烯基单体的结构单元，相对于全部结构单元为大于20质量份且为99.5质量份以下，(M－2)结构单元是来自聚乙烯基单体的结构单元，相对于全部结构单元为0.5～80质量份，其中，将所述亲和色谱用载体填充于任意的柱容器，用含有2M的NaCl的pH7.5的20mM磷酸钠缓冲液对柱进行置换，在40℃下静置7天时的柱内的pH上升幅度为2以下。另外，本专利技术提供＜2＞一种亲和色谱柱，是将上述＜1＞的亲和色谱用载体填充于柱容器而成的。另外，本专利技术提供＜3＞一种靶物质的纯化方法，其特征在于，使用上述＜1＞的亲和色谱用载体。本专利技术的亲和色谱用载体的表面上的环氧基残留量减少，而且因开环环氧基而具备高的亲水性。因此，利用本专利技术的亲和色谱用载体，能够改善非特异性地吸附的杂质、例如宿主细胞蛋白质(HCP＝HostCellProtein)、DNA的除去性能。另外，由于能够较高地保持配体的活性，因此，即使在将本专利技术的亲和色谱用载体用于例如免疫球蛋白的纯化之后进一步长时间反复使用，免疫球蛋白等的动态结合容量也不易降低，能够以低成本进行免疫球蛋白的纯化。具体实施方式以下，对本专利技术的亲和色谱用载体详细地进行说明。[亲和色谱用载体]＜固相载体的构成＞构成本专利技术的亲和色谱用载体的固相载体含有包含(M－1)和(M－2)的共聚物，(M－1)是来自含环氧基的单乙烯基单体的结构单元，相对于全部结构单元为大于20质量份且为99.5质量份以下，(M－2)是来自聚乙烯基单体的结构单元，相对于全部结构单元为0.5～80质量份，并且含有使环氧基开环而得到的开环环氧基。固相载体的形态可以为整体(monolith)、膜、中空纤维、粒子、盒(cassette)、片(chip)等中的任一种，但优选粒子。另外，从提高表面积的观点考虑，固相载体优选多孔粒子等经多孔化的载体。另外，作为多孔粒子，优选多孔聚合物粒子。应予说明，固相载体除上述共聚物以外，也可以含有天然高分子、合成高分子等。((M－1)来自含环氧基的单乙烯基单体的结构单元)含环氧基的单乙烯基单体为1分子中具有1个聚合性乙烯基(具有乙烯性不饱和键的基团)和1个以上环氧基的单体。含环氧基的乙烯基单体能够利用于将适当量的环氧基导入固相载体中而得到适当的配体结合量、开环环氧基量。作为含环氧基的单乙烯基单体，例如可以举出：(甲基)丙烯酸缩水甘油酯、(甲基)丙烯酸4－羟基丁酯缩水甘油醚、(甲基)丙烯酸3,4－环氧环己基甲酯、α－(甲基)丙烯基－ω－缩水甘油基聚乙二醇等不含羟基的(甲基)丙烯酸酯类；甘油单(甲基)丙烯酸酯缩水甘油醚等含羟基的(甲基)丙烯酸酯类；乙烯基苄基缩水甘油醚等芳香族单乙烯基化合物，此外，可以举出：烯丙基缩水甘油醚、3,4－环氧－1－丁烯、3,4－环氧－3－甲基－1－丁烯等。可以单独使用这些中的1种，也可以组合使用2种以上。其中，作为含环氧基的单乙烯基单体，从防污性、保存稳定性等观点考虑，优选含环氧基的(甲基)丙烯酸酯类、含环氧基的芳香族单乙烯基化合物，更优选含环氧基的(甲基)丙烯酸酯类，进一步优选(甲基)丙烯酸缩水甘油酯、(甲基)丙烯酸4－羟基丁酯缩水甘油醚，特别优选(甲基)丙烯酸缩水甘油酯。应予说明，通过正相悬浮聚合使固相载体为粒子状时，作为含环氧基的单乙烯基单体，从开环环氧基量的控制容易的方面考虑，优选水不溶性的含环氧基的单乙烯基单体。在此，水不溶性是指相对于水100mL在室温(25℃)下不溶解10g以上。应予说明，含环氧基的单乙烯基单体可以使用市售品，也可以依照公知的方法合成而使用。来自含环氧基的单乙烯基单体的结构单元的含量相对于全部结构单元为大于20质量份且为99.5质量份以下。若该含量为20质量份以下，则开环环氧基的量减少而配体结合后的亲和色谱用载体的亲水性变低，杂质的除去性能变低。另一方面，若大于99.5质量份，则机械强度变低，无法耐受作为亲和色谱用载体的操作。从防污性、保存稳定性等观点考虑，来自含环氧基的单乙烯基单体的结构单元的含量相对于全部结构单元，优选为25质量份以上，更优选为30质量份以上，进一步优选为40质量份以上，特别优选为50质量份以上，另外，从防污性、保存稳定性等观点考虑，相对于全部结构单元，优选为95质量份以下，更优选为90质量份以下，进一步优选为85质量份以下，特别优选为80质量份以下。((M－2)来自聚乙烯基单体的结构单元)聚乙烯基单体为1分子中具有2个以上聚合性乙烯基(具有乙烯性不饱和键的基团)的乙烯基单体。以下，将该聚乙烯基单体分成不含羟基的聚乙烯基单体和含羟基的聚乙烯基单体进行说明。应予说明，聚乙烯基单本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种亲和色谱用载体，包含固相载体、使环氧基开环而得到的开环环氧基和结合于所述固相载体的配体，所述固相载体含有包含(M－1)结构单元和(M－2)结构单元的共聚物，(M－1)结构单元是来自含环氧基的单乙烯基单体的结构单元，相对于全部结构单元为大于20质量份且为99.5质量份以下，(M－2)结构单元是来自聚乙烯基单体的结构单元，相对于全部结构单元为0.5～80质量份，其中，将所述亲和色谱用载体填充于任意的柱容器，用含有2M的NaCl的pH7.5的20mM磷酸钠缓冲液对柱进行置换，在40℃下静置7天时的柱内的pH上升幅度为2以下。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.27 JP 2014-1326111.一种亲和色谱用载体，包含固相载体、使环氧基开环而得到的开环环氧基和结合于所述固相载体的配体，所述固相载体含有包含(M－1)结构单元和(M－2)结构单元的共聚物，(M－1)结构单元是来自含环氧基的单乙烯基单体的结构单元，相对于全部结构单元为大于20质量份且为99.5质量份以下，(M－2)结构单元是来自聚乙烯基单体的结构单元，相对于全部结构单元为0.5～80质量份，其中，将所述亲和色谱用载体填充于任意的柱容器，用含有2M的NaCl的pH7.5的20mM磷酸钠缓冲液对柱进行置换，在40℃下静置7天时的柱内的pH上升幅度为2以下。2.根据权利要求1所述的亲和色谱用载体，其中，所述共聚物进一步含有(M－3)结构单元，(M－3)结构单元是来自不含环氧基的单乙烯基单体的结构单元，相对于全部结构单元为40质量份以下。3.根据权利要求1或2所述的亲和色谱用载体，其中，所述开环环氧基为下述式(1)所示的基团，式(1)中，R1表示碳原子数1～6的2价的有机基团，R2表示氢原子或碳原子数1～10的1价的有机基团，X表示硫基(＞S)、亚硫酰...

【专利技术属性】
技术研发人员：籾山昌辉，津田幸子，则信智哉，
申请(专利权)人：JSR株式会社，JSR生命科学株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP