一种纳米磁性微球固定化氢过氧化物裂解酶及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种纳米磁性微球固定化氢过氧化物裂解酶及其制备方法，其特征在于，它的化学名称为：四氧化三铁(甲基丙烯酸缩水甘油酯-甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸-2-羟乙酯)共聚物固定化氢过氧化物裂解酶。其制备过程为：a.将纳米磁性微球按HPL/NMP质量比为20mg/g～60mg/g加入HPL并将两者混合在一起，然后加入配置好的固定化介质，得到混合物；b.将所得混合物于30～40℃恒温震荡6～12h，得到固定化HPL；c.外加磁场回收固定化HPL；d.用PBS以及去离子水分别清洗之后得到纳米磁性微球固定化氢过氧化物裂解酶。本发明专利技术制备的纳米磁性微球固定化氢过氧化物裂解酶具有较高的酶活力及稳定性并且易于从反应体系中分离出来，实现固定化酶的重复利用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种纳米磁性微球固定化氢过氧化物裂解酶及其制备方法，属于生物催化工程领域。
技术介绍
氢过氧化物裂解酶(hydroperoxidelyase,HPL)是植物脂质氧化途径中脂肪氧合酶(LOX)下游的酶，可将LOX作用下多不饱和脂肪酸形成的脂肪酸氢过氧化物裂解形成含氧酸和挥发性醛类。根据底物过氧基位置的差异，HPL可分为两类：第一类可裂解13位氢过氧化产物生成C6醛和C12含氧酸，称为13-HPL；第二类可裂解9位氢过氧化物生成C9醛类和C9含氧酸，称为9-HPL。由13-LOX和13-HPL共同催化得到的C6醛类(包括己醛，己烯醛)具有清新芳香风味，在国外被称为“Greennote”。这些挥发性醛类被广泛应用于香精/香水制造和食品工业，例如用于长期存储或杀菌后果蔬新鲜气味的重塑。HPL的不稳定性是制约这一生物合成途径实现工业化的重要障碍。大多数植物来源的HPL通常会在反应开始的20分钟之内完全丧失活力。HPL的不稳定性主要体现在以下三个方面：(1)作为反应底物的氢过氧化物性质非常活泼，具有攻击性，易造成HPL蛋白的氧化而使酶失活；(2)Gargouri等本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种纳米磁性微球固定化氢过氧化物裂解酶，其特征在于，它的化学名称为：四氧化三铁(甲基丙烯酸缩水甘油酯‑甲基丙烯酸甲酯‑甲基丙烯酸‑2‑羟乙酯)共聚物固定化氢过氧化物裂解酶。

【技术特征摘要】
1.一种纳米磁性微球固定化氢过氧化物裂解酶，其特征在于，它的化学名称为：四氧化三铁(甲基丙烯酸缩水甘油酯-甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸-2-羟乙酯)共聚物固定化氢过氧化物裂解酶。2.根据权利要求1所述一种纳米磁性微球固定化氢过氧化物裂解酶，其特征在于由以下步骤制得：a.将纳米磁性微球置于锥形瓶中，按HPL/NMP质量比为20mg/g～60mg/g加入HPL并将两者混合在一起，然后加入配置好的固定化介质，得到混合物；b.将步骤a中得到的混合物于30～40℃恒温震荡6～12h，得到固定化HPL；c.外加磁场回收固定化HPL，然后去除上清液；d.用PBS以及去离子水分别清洗固定化HPL后得到纳米磁性微球固定化氢过氧化物裂解酶。3.根据权利要求2所述一种纳米磁性微球固定化氢过氧化物裂解酶，其特征在于，步骤a中所述纳米磁性微球的制备包括如下步骤：(一)水相组成为：将0.5～1.7g/L的Fe3O4超声至完全分散于含有0.1wt.％～0.3wt.％PVA的水溶液中；(二)油相组成为：GMA、HEMA以及MMA按摩尔比2～10:0～15:15～0
\t混合，并加入0.1wt.％～0.5wt.％的EDGMA作为交联剂；(三)水相与油相混合、通氮气驱氧并搅拌10～30min，然后逐滴加入0.5％～1.0％v/v过硫酸钾作为引发剂，并于60～80℃下回流反应30min～12h，然后磁分离得到固体产物；(四)使用40％～75％乙醇洗去固体产物中残余未聚合的单体，得到纳米磁性微球。4.根据权利要求3所述一种纳米磁性微球固定化氢过氧化物裂解酶，其特征在于，步骤(三)所述过硫酸钾的质量浓度为0.5％～5.0％。5.根据权利要求3所述一种纳米磁性微球固定化氢过氧化物裂解酶，其特征在于，步骤c为：外加磁场回收固定化HPL，然后去除上清液，之后向固定化HPL中加入半胱氨酸猝灭多余的环氧基团，半胱氨酸的添加量为摩尔比GMA:-NH2＝1:0.01～0.1。6.根据权利要求2所述一种纳米磁性微球固定化氢过氧化物裂解酶，其特征在于，步骤b所述固定化介质为...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘庆庆，于勇，朱松明，李文科，
申请(专利权)人：浙江大学自贡创新中心，
类型：发明
国别省市：四川;51