结合ERBB‑2和ERBB‑3的抗体制造技术

本发明专利技术尤其涉及抗体，其包含结合ErbB‑2的第一抗原结合部位和结合ErbB‑3的第二抗原结合部位。所述抗体通常能降低ErbB‑2和ErbB‑3阳性细胞上ErbB‑3的配体诱导之受体功能。还描述了用于治疗的方法以及所述抗体在成像和在治疗患有ErbB‑2、ErbB‑3或ErbB‑2/3阳性肿瘤的对象中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及抗体领域。特别地，其涉及用于治疗涉及异常细胞的疾病的治疗性(人)抗体领域。更特别地，其涉及结合ErbB-2和ErbB-3的抗体，及其在结合ErbB-2和ErbB-3阳性细胞(特别是肿瘤细胞)中的用途。人表皮生长因子受体家族(humanepidermalgrowthfactorreceptorfamily，HER，还统称为ErbB信号传导网络)是跨膜受体酪氨酸激酶(receptortyrosinekinase，RTK)家族。该家族包含表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)(也被称为ErbB-1(或HER1))以及同源受体ErbB-2(HER2)、ErbB-3(HER3)和ErbB-4(HER4)。这些受体(在Yarden和Pines，2012中综述)在上皮细胞上广泛表达。HER受体或其配体(例如调蛋白(heregulin，HRG)或表皮生长因子(epidermalgrowthfactor，EGF))的上调是人癌症中的频繁事件(Wilson，Fridlyand等，2012)。ErbB-1和ErbB-2的过表达特别地发生于上皮肿瘤中，并且与肿瘤侵袭、转移、对化疗的抗性以及不良预后相关(Zhang，Berezov等，2007)。在正常乳腺中，ErbB-3已被示出在腔内上皮的生长和分化中非常重要。例如，ErbB-3的丢失/抑制导致基底在腔内上皮上的选择性扩张(Balko，Miller等，2012)。配体与RTK胞外结构域的结合诱导受体二聚化，其发生于相同(同源二聚化)和不同(异源二聚化)的受体亚型之间。二聚化可活化胞内酪氨酸激酶结构域，其发生自体磷酸化并继而可活化许多下游的促增殖信号传导途径，包括由促分裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinases，MAPK)和促存活途径Akt介导的那些(在Yarden和Pines，2012中综述)。还没有鉴定出对ErbB-2特异性的内源性配体，因此其被推定为通过异源二聚化来正常地传导信号(Sergina，Rausch等2007)。ErbB-3可通过结合(engagement)其配体而被活化。这些配体包括但不限于神经调节蛋白(neuregulin，NRG)和调蛋白(HRG)。已经鉴定了活化ErbB受体家族信号传导的多种模式。其中有配体依赖性和配体非依赖性的信号传导活化。即使在不存在ErbB-3配体的情况下，过表达的ErbB-2也能够通过ErbB-2：ErbB-3异源二聚体产生致癌信号传导(Junttila，Akita等2009)。ErbB-2活性可被ErbB-2特异性抗体抑制。这样的ErbB-2特异性抗体例如被用于治疗ErbB-2阳性(HER2+)肿瘤。此类治疗的问题是肿瘤经常逃避ErbB-2特异性治疗，并且即使在抑制性抗体的存在下继续生长。已经观测到，ErbB-2阳性肿瘤(例如乳腺、卵巢、子宫颈和胃肿瘤)可通过表现出上调的ErbB-3表达(Ocana，Vera-Badillo等，2013)和/或ErbB-3配体表达(Wilson，Fridlyand等，2012)的肿瘤细胞亚群的选择性生长而逃避治疗。还已经鉴定了ErbB-3受体中的活化性突变。抗ErbB-2单克隆抗体曲妥珠单抗(trastuzumab，赫赛汀(Herceptin))和ErbB-1特异性的西妥昔单抗(cetuximab，爱必妥(Erbitux))在被批准用于临床应用的数种单克隆抗体之中。曲妥珠单抗具有已证明的在转移性乳腺癌中的生存益处(Arteaga，Sliwkowski等，2011)。曲妥珠单抗的精确作用机制尚未被明确地建立。建议的作用模型为RTK信号传导的抑制和抗体依赖性细胞毒性(antibodydependentcellularcytotoxicity，ADCC)的招募。其他已经描述的作用机制包括阻断ErbB-2胞外结构域的蛋白水解性切割、抑制血管发生因子以及增强受体内吞。干扰ErbB-2信号传导的其他试剂已经获得批准或尚在用于治疗乳腺癌及其他ErbB-2过表达癌症的开发中。例如，化合物拉帕替尼(lapatinib)抑制ErbB-1和ErbB-2二者的酪氨酸激酶活性并被用于ErbB-2扩增的乳腺癌的一线治疗。在患有HER2+转移性乳腺癌的患者中，对于曲妥珠单抗(作为单一药剂或者与化疗组合)的抗性通常发生于开始治疗的数月内。只有一部分患有HER2+转移性乳腺癌的患者对单一药剂的曲妥珠单抗有响应，这表明在晚期肿瘤中抗性的新机制(denovomechanism)。这些机制尤其包括来自于其他HER受体家族的信号传导以及来自于HER家族以外的RTK的补偿性信号传导(Thery等，Resistancetohumanepidermalgrowthfactorreceptortype2-targetedtherapies，EurJCancer(2014)，Vol.50，Issue5，pages892-901(ttp：//dx.doi.org/10.1016/j.ejca.2014.01.003))。例如，与HER2一起的HER3或其配体的过表达导致HER2/HER3异源二聚体的形成和对曲妥珠单抗的获得性抗性。因此，所述抗体曲妥珠单抗被认为在阻断由ErbB-3配体驱动的信号传导中是无效的(Wehrman，Raab等，2006，Junttila，Akita等，2009，Thery等，2014)。最近，单克隆抗体帕妥珠单抗(pertuzumab)基于其额外的5个月的无进展存活益处而被批准与曲妥珠单抗组合使用(Baselga，Cortes等，2012)。帕妥珠单抗还结合ErbB-2，但结合位置与曲妥珠单抗不同。治疗ErbB-2阳性肿瘤的其他策略针对ErbB-3。结合ErbB-3的单克隆抗体具有在临床前研究中经证明的活性(Schoeberl，Faber等，2010)。一些结合ErbB-3的单克隆抗体可抑制多种癌症的增殖和生长。另一种策略涉及结合ErbB-2和ErbB-3受体二者。分子MM-111是含有两条结合ErbB-2和ErbB-3的单链Fv(singlechainFv，scFv)片段的人造生物分子。所述两条scFv与突变的人血清白蛋白(humanserumalbumin，HSA)蛋白质相组合以提高所述分子的半衰期。在临床前试验中，所述分子表现出抑制ErbB-3信号传导和增殖。该作用主要在ErbB-2表达量相对高的ErbB-3阳性细胞系上测量。专利技术概述本专利技术提供了双特异性抗体，其包含结合ErbB-2的第一抗原结合部位和结合ErbB-3的第二抗原结合部位，并且其中所述抗体能降低ErbB-2和ErbB-3阳性细胞上ErbB-3的配体诱导之受体功能。所述第一抗原结合部位优选存在于包含VH链的可变结构域中，其中所述VH链具有以下VH链的氨基酸序列：MF2926、MF2930、MF1849、MF2973、MF3004、MF3958(为人源化的MF2971)、MF2971、MF3025、MF2916、MF3991(为人源化的MF3004)、MF3031、MF2889、MF2913、MF1847、MF3001、MF300本文档来自技高网...

【技术保护点】
双特异性抗体，其包含结合ErbB‑2的第一抗原结合部位和结合ErbB‑3的第二抗原结合部位，其中所述抗体能降低ErbB‑2和ErbB‑3阳性细胞上ErbB‑3的配体诱导之受体功能。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.02.28 EP 14157360.0;2014.05.05 EP 14167066.11.双特异性抗体，其包含结合ErbB-2的第一抗原结合部位和结合ErbB-3的第二抗原结合部位，其中所述抗体能降低ErbB-2和ErbB-3阳性细胞上ErbB-3的配体诱导之受体功能。2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中所述抗体能降低配体诱导的ErbB-2和ErbB-3阳性细胞生长。3.根据权利要求2所述的双特异性抗体，其中所述抗体能降低配体诱导的ErbB-2和ErbB-3阳性细胞生长，其中所述细胞具有至少100.000个ErbB-2细胞表面受体/细胞。4.根据权利要求1至3中任一项所述的双特异性抗体，其中所述细胞为MCF-7细胞、SKBR-3细胞、NCI-N87细胞、BxPC-3细胞、BT-474细胞或JIMT-1细胞。5.根据权利要求1至4中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一抗原结合部位与ErbB-2的结构域I或结构域IV结合。6.根据权利要求1至5中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第二抗原结合部位干扰ErbB-3配体与ErbB-3的结合。7.双特异性抗体，其包含结合ErbB-2的第一抗原结合部位和结合ErbB-3的第二抗原结合部位，其中所述第一抗原结合部位结合ErbB-2的结构域I，并且所述第二抗原结合部位结合ErbB-3的结构域III。8.双特异性抗体，其包含结合ErbB-2的第一抗原结合部位和结合ErbB-3的第二抗原结合部位，其中所述第二抗原结合部位对ErbB-3阳性细胞的亲和力(KD)等于或高于所述第一抗原结合部位对ErbB-2阳性细胞的亲和力。9.根据权利要求1至8中任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗体能降低ErbB-2和ErbB-3阳性细胞上ErbB-3的配体诱导之受体功能。10.根据权利要求1至9中任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗体能降低配体诱导的ErbB-2和ErbB-3阳性细胞生长。11.根据权利要求1至10中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第二抗原结合部位对ErbB-3阳性细胞的亲和力(KD)低于或等于2.0nM，优选低于或等于1.39nM，更优选低于或等于0.99nM。12.根据权利要求1至11中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一抗原结合部位对ErbB-2阳性细胞的亲和力(KD)低于或等于5.0nM，优选低于或等于4.5nM，优选低于或等于4.0nM。13.根据权利要求1至12中任一项所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体对BT-474细胞的亲和力(KD)低于或等于5.0nM，优选低于或等于4.0nM，更优选低于或等于3.2nM，和/或其中所述双特异性抗体对SK-BR-3细胞的亲和力低于或等于5.0nM，优选低于或等于3.0nM，更优选低于或等于2.0nM。14.包含两个结合ErbB-2的抗原结合部位的抗体，其中至少一个所述抗原结合部位结合Erb-B2的结构域I。15.根据权利要求14所述的抗体，其中至少一个所述抗原结合部位对ErbB-2阳性细胞的亲和力(KD)低于或等于5.0nM，优选低于或等于4.0nM，更优选低于或等于4.0nM。16.包含两个结合ErbB-3的抗原结合部位的抗体，其中至少一个所述抗原结合部位结合Erb-B3的结构域III。17.根据权利要求16所述的抗体，其中至少一个所述抗原结合部位对ErbB-3阳性细胞的亲和力(KD)低于或等于2.0nM，优选低于或等于1.39nM，更优选低于或等于0.99nM。18.根据权利要求1至17中任一项所述的抗体，其中所述ErbB-3阳性细胞和/或所述ErbB-2阳性细胞为BT-474细胞或SK-BR-3细胞。19.根据权利要求1至18中任一项所述的抗体，其包含结合ErbB-2结构域I的选自T144、T164、R166、P172、G179、S180和R181的至少一个氨基酸以及位于距离T144、T164、R166、P172、G179、S180或R181约5个氨基酸位置以内的暴露于表面的氨基酸残基的抗原结合部位。20.根据权利要求1至19中任一项所述的抗体，其包含结合ErbB-3结构域III的选自R426的至少一个氨基酸以及在天然ErbB-3蛋白中位于距离R426在以内的暴露于表面的氨基酸残基的抗原结合部位。21.根据权利要求1至20中任一项所述的抗体，其中所述抗体至少包含ErbB-2特异性重链可变区的CDR3序列，所述重链可变区选自MF2926、MF2930、MF1849、MF2973、MF3004、MF3958、MF2971、MF3025、MF2916、MF3991、MF3031、MF2889、MF2913、MF1847、MF3001、MF3003和MF1898，如图16A或图16E中所示。22.根据权利要求1至21中任一项所述的抗体，其中所述抗体至少包含ErbB-3特异性重链可变区的CDR3序列，所述重链可变区选自MF3178、MF3176、MF3163、MF3099、MF3307、MF6055、MF6056、MF6057、MF6058、MF6059、MF6060、MF6061、MF6062、MF6063、MF6064、MF6065、MF6066、MF6067、MF6068、MF6069、MF6070、MF6071、MF6072、MF6073和MF6074，如图16B或图16E或图37中所示。23.根据权利要求1至22中任一项所述的抗体，其中所述抗体至少包含ErbB-2特异性重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述重链可变区选自：MF2926、MF2930、MF1849、MF2973、MF3004、MF3958、MF2971、MF3025、MF2916、MF3991、MF3031、MF2889、MF2913、MF1847、MF3001、MF3003和MF1898，如图16A或图16E中所示，或者其中所述抗体包含与MF2926、MF2930、MF1849、MF2973、MF3004、MF3958、MF2971、MF3025、MF2916、MF3991、MF3031、MF2889、MF2913、MF1847、MF3001、MF3003或MF1898的CDR1、CDR2和CDR3序列有最多3个氨基酸、优选最多2个氨基酸、优选最多1个氨基酸差异的CDR序列。24.根据权利要求1至23中任一项所述的抗体，其中所述抗体至少包含ErbB-3特异性重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述重链可变区选自MF3178、MF3176、MF3163、MF3099、MF3307、MF6055、MF6056、MF6057、MF6058、MF6059、MF6060、MF6061、MF6062、MF6063、MF6064、MF6065、MF6066、MF6067、MF6068、MF6069、MF6070、MF6071、MF6072、MF6073和MF6074，如图16B或图16E或图37中所示，或者其中所述抗体包含与MF3178、MF3176、MF3163、MF3099、MF3307、MF6055、MF6056、MF6057、MF6058、MF6059、MF6060、MF6061、MF6062、MF6063、MF6064、MF6065、MF6066、MF6067、MF6068、MF6069、MF6070、MF6071、MF6072、MF6073或MF6074的CDR1、CDR2和CDR3序列有最多3个氨基酸、优选最多2个氨基酸、优选最多1个氨基酸差异的CDR序列。25.根据权利要求1至24中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含选自以下的ErbB-2特异性重链可变区序列：MF2926、MF2930、MF1849、MF2973、MF3004、MF3958...

【专利技术属性】
技术研发人员：塞西利亚·安娜·威廉明娜·热延，科内利斯·阿德里安·德克吕夫，马克·思罗斯比，敦·洛格滕伯格，亚历山大·贝特霍尔德·亨德里克·巴克，
申请(专利权)人：美勒斯公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL