一种聚乙二醇修饰的巴西芬净及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种聚乙二醇修饰的巴西芬净及其制备方法。其特征是，先将不同分子量的聚乙二醇的一端与二琥珀酰亚胺碳酸酯形成活泼酯，再与巴西芬净通过酯键连接，得到不同分子量的聚乙二醇修饰的巴西芬净。本发明专利技术中的聚乙二醇修饰的巴西芬净在保持原有活性的同时，其稳定性增强，在体内半衰期延长。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物化学领域，具体涉及聚乙二醇修饰的巴西芬净及其制备方法。技术背景随着大量抗菌药物、抗肿瘤药物、皮质激素和免疫抑制剂的使用增多以及器官移植、介入技术手术和获得性免疫缺陷综合征发病率的逐年上升，深部真菌感染的发病率也逐年增加。目前只有一些唑类抗真菌药物(两性霉素B，氟胞嘧啶和一些唑类药物)在这类治疗中起到效果。而此类药物，从疗效、药物毒性，抗菌谱以及药物抗性的角度看来，治疗效果有一定的局限性。其中大环内脂类抗菌素，两性霉素B在临床中运用的效果最好，与其他抗菌药物不同，两性霉素B是同时作用于成熟的和正在生长的病原菌细胞。然而两性霉素B的静脉给药具有较大的毒性。因此，我们需要一种更安全、疗效更好的抗菌素。巴西芬净是从丝状真菌(Aureobasidiumpullulans)R106中分离出来的环酯肽类抗生素，具有很强的抗真菌能力。在较低的浓度下(0.1-0.5μg/ml)即可对酵母产生毒性。对其敏感的真菌种类包括：出牙酵母(Saccharomycescerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)、光滑念珠菌(Candidaglabrata)、构巢曲霉(Aspergillusnidulans)和黑曲霉(A.niger.)。其作用机制是，巴西芬净抑制了真菌生长所依赖的肌醇磷酰胺(inositolphosphorylceramide，IPC)合成酶的活性，干扰鞘脂合成，从而进一步杀死菌株。并且，巴西芬净不会破坏DNA，RNA和蛋白质的合成。聚乙二醇是一种具有高度亲水性的聚合大分子，其无毒，pH中性，是具有较好生物相容性的独特理化性质的一类高分子聚合物。聚乙二醇具有极强的亲水性，且没有免疫原性，它与药物连接以后会改变药物的性质，将聚合物自身的优良性质赋予药物分子。此外。聚乙二醇是迄今为止已知的大分子聚合物中细胞和蛋白吸收水平最低的分子，鉴于其具有以上优良性质，聚乙二醇已被美国FDA批准作为体内注射药用聚合物分子。聚乙二醇修饰的巴西芬净有较强的溶解能力，而由于聚乙二醇在巴西芬净周围形成的屏障，产生了大分子的空间位阻作用，从而减少了巴西芬净在体内的酶解，使其半衰期延长，避免了巴西芬净在肾脏中很快代谢消除，提高其治疗效果。
技术实现思路
：本专利技术涉及一种聚乙二醇修饰的巴西芬净及其制备方法，目的在于在提高巴西芬净的稳定性、延长其半衰期、提高其治疗效果。为达到上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案是：先将聚乙二醇的一端与二琥珀酰亚胺碳酸酯连接形成活泼酯，所述聚乙二醇修饰剂与巴西芬净通过酯键连接，得到聚乙二醇修饰的巴西芬净化合物。具体的，将活化的mPEG通过共价键偶联到巴西芬净上，形成通式为D-R的化合物，其中D为巴西芬净，R为聚乙二醇修饰剂PEG-(C＝O)-。其中所述聚乙二醇为分子量3kDa～50KDa的直链聚乙二醇，优选为分子量为3kDa，6kDa，9kDa，10kDa，20kDa，30kDa，40kDa，50kDa更优选分子量为9kDa。mPEG要和巴西芬净结合，需要根据连接分子的特性选择活化所需的功能基团，对mPEG分子的一端进行活化，常见具有生物相容性的活化基团包括酯基、酰胺基、酰亚氨基、氨基甲酸酯基、羧基、羟基、琥珀酰亚氨基、环氧基、氧羰基咪唑基、硝基苯基、醛基、半胱氨酸基、组氨酸基或伯胺等。优选琥珀酰亚胺琥珀酰酯(SS)、琥珀酰亚胺碳酰酯(SC)、对硝基苯碳酸和醛基(adehyde)等，更优选琥珀酰亚胺琥珀酰酯(SC)。另外，本专利技术还提供了该复合物的制备方法，其工艺如下：附图说明图1为巴西芬净抗菌活性图2为巴西芬净在小鼠内的药代动力学具体实施方式：下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限定本专利技术的范围。实施例1制备mPEG-C(＝O)-巴西芬净1.1mPEG-SC样品的制备(3)将不同分子量的聚乙二醇PEG分别溶于适量的二氯甲烷中，加入1.1当量的DSC(二琥珀酰亚胺碳酸酯)，2当量的DIEA(二异丙基乙胺)，加入0.2当量的DMAP(N,N-二甲基氨基吡啶)，温控60℃，反应8h，浓缩，异丙醚析晶,分别得到不同分子量的PEG琥珀酰亚胺活化产物PEG-SC。1.2mPEG-C(＝O)-巴西芬净样品制备(5)本专利技术的聚乙二醇修饰的巴西芬净包括以下步骤：将磷酸缓冲液加入巴西芬净溶液中，调节其pH至6.0-9.0，然后加入mPEG-SC在5～40℃进行反应，优选为25℃，反应时间为2～6小时，优选为4小时。将反应混合液用色谱分离，流动相为含氯化钠醋酸缓冲液，色谱分离后，浓缩，冻干可得不同分子量的聚乙二醇修饰的巴西芬净；所述的巴西芬净溶液重量为1mg/mL的水溶液。本专利技术所述的聚乙二醇修饰巴西芬净可以制备抗真菌药物。实施例2体外抗菌实验比较取未修饰的巴西芬净及不同分子量的mPEG修饰后的巴西芬净(3kDa、6kDa、9kDa、10kDa、20kDa、30kDa、40kDa、50kDa)，分别置于37℃0，2，4，6，8，12，24，48，72h定时取样0.1ml，测定各时间点对抗真菌活性的影响，结果以活性保留百分数表示。试验结果见图1。实施例3不同分子量mPEG修饰的巴西芬净在小鼠体内的药代动力学研究雄性昆明中小鼠84只，按随机分成组，每只小鼠快速尾静脉注射给药分子量不同的巴西芬净100uL，分别为basifungin，mPEG-C(＝O)-basifungin(3kDa)，mPEG-C(＝O)-basifungin(6kDa)，mPEG-C(＝O)-basifungin(9kDa)，mPEG-C(＝O)-basifungin(10kDa)，mPEG-C(＝O)-basifungin(20kDa)，mPEG-C(＝O)-basifungin(30kDa)，mPEG-C(＝O)-basifungin(40kDa)，mPEG-C(＝O)-basifungin(50kDa)。给药0，2，4，6，8，12，24，48，72h(9个时间点)，眼球取血0.1mL，离心取血清，应用放射免疫法测定血药浓度，经时曲线见图2。其中未经修饰的basifungin在12h时，血药浓度最高为0.74mg/μL，5kDamPEG-C(＝O)-basifungin在8h时，血药浓度最高为0.89mg/μL，9kDamPEG-C(＝O)-basifungin在12h时血药浓度最高为0.93mg/μL，20kDamPEG-C(＝O)-basifungin在24h时血药浓度最高为0.73mg/μL。以上结果可以得出，经PEG修饰的巴西芬净能明显的延缓药物延缓时间，其中随着PEG分子量的增大，其药物代谢时间越长。综合代谢时间以及药物效果，以9kDa的PEG-(C＝O)-basifungin最佳。实施例4mPEG-C(＝O)-basifungin的修饰条件1.pH值对聚乙二醇修饰巴西芬净本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种聚乙二醇修饰的巴西芬净化合物及其制备方法，其特征在于，巴西芬净通过酯键与不同分子量的聚乙二醇相连，具体通式为D‑R，其中D为巴西芬净抗真菌药物，R为PEG‑(C＝O)‑。

【技术特征摘要】
1.一种聚乙二醇修饰的巴西芬净化合物及其制备方法，其特征在于，巴西芬净通过酯键与不同分子量的聚乙二醇相连，具体通式为D-R，其中D为巴西芬净抗真菌药物，R为PEG-(C＝O)-。
2.根据权利要求1所述的聚乙二醇修饰的巴西芬净化合物，其特征在于巴西芬净D的修饰位点为其环上的羟基。
3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于所述的聚乙二醇可为直链型或支链型聚乙二醇，优选直链型聚乙二醇。
4.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，PEG的分子量为3kDa～50kDa，优选分子量为3kDa，6kDa，9k，10kDa，20kDa，30kDa，40kDa，50kDa，更优选分子量为9kDa。
5.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，R连接的活化基团包括酯基、酰胺基、酰亚氨基、氨基甲酸酯基、羧基、羟基、琥珀酰亚氨基、环氧基、氧羰基咪唑基、硝基苯基、醛基、半胱氨酸基、组氨酸基或伯胺等。
6.根据权利力要求5所述的活化基团，优选琥珀酰亚胺琥珀酰酯(SS)、琥珀酰亚胺碳酰酯(SC)、对硝基苯碳酸和醛基(adehyde)。
7.根据权利力要求5所述的活化基团，更优选琥珀酰亚胺碳酰酯(SC)。
8.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘自成，姚志勇，李新宇，支钦，周莹，
申请(专利权)人：深圳市健元医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44