一种布美诺肽的制备方法技术

本发明专利技术涉及多肽药物制备领域，具体公开了一种布美诺肽的制备方法，该法采用固液相结合的方式，液相合成三肽片段Fmoc

【技术实现步骤摘要】
一种布美诺肽的制备方法


[0001]本专利技术涉及多肽药物制备领域，具体涉及一种布美诺肽的制备方法。

技术介绍

[0002]妇女绝经前机能减退性欲障碍(HSDD)是女性常见性功能障碍之一,全球育龄妇女患病率6％
‑
10％。主要表现为性欲降低，同时带来精神压力，影响妇女的情感健康、家庭和谐、人际关系和总体生活质量。
[0003]布美诺肽，英文名称Bremelanotide,是由美国Palatin技术公司开发的一种黑皮质素受体
‑
4(MC4R)激动药，通过激活大脑中的内源性途径来调节性欲和性反应，用于治疗患有获得性广泛性性欲低下的绝经前女性。目前已完成临床III期研究，该药于2019年6月12日获得美国FDA批准上市，皮下注射液的商品名为成为第二款获得FDA批准针对妇女绝经前机能减退性欲障碍(HSDD)治疗的药物。目前中国未批准任何治疗HSDD的药物上市，因此，布美诺肽有着广阔的市场前景。
[0004]布美诺肽是α
‑
黑素细胞刺激激素(α
‑
MSH)合成多肽的类似物，含7种氨基酸的黑皮质素(melanocortin)环状多肽衍生物,CAS号为1607799
‑
13
‑
2，是C端为羧酸的环七肽，其中，含有非天然氨基酸：D型的苯丙氨酸和Nle正亮氨酸，Asp侧链羧基与Lys侧链的氨基以酰胺键成环。N端偶联Nle，并乙酰化封端。氨基酸序列为：Ac
‑
Nle
‑
Cyclo[Asp
‑
His
‑
D
‑
Phe
‑
Arg
‑
Trp
‑
Lys]‑
OH。化学结构如下：
[0005][0006]专利CN101092451A公开了一种固相合成布美诺肽方法，使用PAM树脂，依次偶联氨基酸，得到Fmoc保护的肽树脂，脱除Asp侧链β
‑
COOH保护基和Lys侧链ε
‑
NH2保护基，固相缩合成环，再脱除N端的Fmoc，乙酰化封端，HF裂解即得。该工艺使用到易腐蚀的HF裂解，对环境不友好，不利于规模化放大生产。
[0007]专利CN101280005A公开了一种固相合成布美诺肽的方法，首先使用Wang树脂固相合成肽树脂，脱除保护基后，固相上环化，裂解。然而Asp(O
‑2‑
Phipr)和Lys(Mmt)片段氨基酸价格昂贵，使用低浓度TFA选择性脱保护可能导致Asp和Lys上保护基脱除不彻底。
[0008]专利CN110746486A公开了一种布美诺肽的固液相1+6合成方法。固相合成6肽片段后再在液相中与Lys(Boc)
‑
OMe合成全保护7肽甲酯，裂解得到线性七肽甲酯，再将线性七肽甲酯的Asp侧链的β
‑
COOH与Lys侧链ε
‑
NH2用缩合剂成环。该工艺在裂解得到线性七肽甲酯
后形成酰胺键，由于此时线性七肽甲酯已经是去保护状态，因此在形成酰胺键时容易产生较多杂质，且裂解时优先选择了含硫试剂，气味刺鼻，不利于环保。
[0009]专利CN110950933A公开了一种布美诺肽的固液相2+5合成方法。通过液相法合成Ac
‑
Nle
‑
Asp
‑
O
‑2‑
Phipr二肽片段，在Lys的主链和侧链分别进行偶联延长肽序，得到全保护肽树脂，在His的α
‑
NH2和Asp的α
‑
COOH固相成酰胺键环化。该法避免了首尾折叠成环，然而二肽片段Ac
‑
Nle
‑
Asp
‑
O
‑2‑
Phipr合成成本高，价格昂贵，工艺中需要使用到水合肼脱保护，对环境不友好；且二肽片段偶联在C端Lys上，Lys与树脂接触，偶联完后还需偶联其他氨基酸，因位阻作用后续偶联效果较差，偶联效率会降低。
[0010]布美诺肽是由7个氨基酸组成的环肽，该肽合成的难点在于分子内环酰胺键的构建，现有的布美诺肽的制备方法成环位点主要集中在Asp侧链β
‑
COOH与Lys侧链ε
‑
NH2及Asp的α
‑
COOH与His的α
‑
NH2。现有技术的合成策略中，采用此两种成环位点制备得到布美诺肽，会存在如下缺点：采用昂贵的氨基酸物料，如Asp(O
‑2‑
Phipr)、Lys(Mmt)等，导致合成成本高，工艺步骤繁琐；有些裂解试剂和脱保护试剂(HF、含硫试剂、水合肼等)对环境不友好；二肽片段偶联在C端Lys上时，空间位阻作用导致偶联效果差；线性七肽甲酯处于去保护状态，形成酰胺键时容易导致粗肽中产生的杂质多，粗品不易纯化，不利于工业大规模生产。
[0011]因此，提供一种可以减少杂质的产生，粗品易于纯化，成品收率和纯度高，有利于环保要求，适合大批量生产的布美诺肽的制备方法具有重要的现实意义。

技术实现思路

[0012]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种新的布美诺肽的制备方法，该方法主要包括如下步骤：
[0013]合成得到全保护的线性布美诺肽肽树脂，之后经裂解、环化、脱保护得环七肽酯，经水解制得布美诺肽粗品；
[0014]全保护的线性布美诺肽肽树脂为：
[0015][0016]其中，X选自Trt或Boc；
[0017]Y选自甲酯、乙酯或苄酯。
[0018]进一步地，制得布美诺肽粗品步骤具体为：
[0019]步骤1)：合成三肽片段Fmoc
‑
Lys(Ac
‑
Nle
‑
Asp)
‑
Y；
[0020]步骤2)：通过固相合成法，偶联Fmoc
‑
Trp(Boc)
‑
OH到固相载体树脂上，得到Fmoc
‑
Trp(Boc)
‑
树脂；
[0021]步骤3)：取步骤2)所得的Fmoc
‑
Trp(Boc)
‑
树脂，在缩合剂下依次偶联相应的保护氨基酸或片段以及步骤1)合成的三肽片段，得到全保护的线性布美诺肽肽树脂；
[0022]步骤4)：取步骤3)所得的线性布美诺肽肽树脂，经裂解、环化、脱保护，得到环七肽甲酯；
[0023]步骤5)：取步骤4)所得的环七肽甲酯，加入碱性试剂，在反应溶剂中水解甲酯，得到布美诺肽粗品。
[0024]步骤1)中合成的三肽片段位阻较大，在进行步骤3)中的固相偶联时放在氮端较合
适，可以有效避免因位阻大带来的偶联效率低的问题。
[0025]在一些实施例中，步骤1)中的三肽片段Fmoc
‑
Lys(Ac
‑
Nle
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种布美诺肽的制备方法，其特征在于，主要包括如下步骤：合成得到全保护的线性布美诺肽肽树脂，之后经裂解、环化、脱保护得环七肽酯，经水解制得布美诺肽粗品；全保护的线性布美诺肽肽树脂为：其中，X选自Trt或Boc；Y选自甲酯、乙酯或苄酯。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，制得布美诺肽粗品步骤具体为：步骤1)：合成三肽片段Fmoc
‑
Lys(Ac
‑
Nle
‑
Asp)
‑
Y；步骤2)：通过固相合成法，偶联Fmoc
‑
Trp(Boc)
‑
OH到固相载体树脂上，得到Fmoc
‑
Trp(Boc)
‑
树脂；步骤3)：取步骤2)所得的Fmoc
‑
Trp(Boc)
‑
树脂，在缩合剂下依次偶联相应的保护氨基酸或片段以及步骤1)合成的三肽片段，得到全保护的线性布美诺肽肽树脂；步骤4)：取步骤3)所得的线性布美诺肽肽树脂，经裂解、环化、脱保护，得到环七肽甲酯；步骤5)：取步骤4)所得的环七肽甲酯，加入碱性试剂，在反应溶剂中水解甲酯，制得布美诺肽粗品。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中的三肽片段Fmoc
‑
Lys(Ac
‑
Nle
‑
Asp)
‑
Y通过液相法合成，具体为：H
‑
Asp
‑
OtBu与Ac
‑
Nle
‑
OSu反应得到Ac
‑
Nle
‑
Asp
‑
OtBu，随后将其与HOSu反应生成活泼酯Ac
‑
Nle
‑
Asp(OSu)
‑
OtBu；将活泼酯与Fmoc
‑
Lys
‑
Y缩合得到Fmoc
‑
Lys(Ac
‑
Nle
‑
Asp
‑
OtBu)
‑
Y；最后，脱除保护基得到Fmoc
‑
Lys(Ac
‑
Nle
‑
Asp)
‑
Y。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中的三肽片段Fmoc
‑
Lys(Ac
‑
Nle
‑
Asp)
‑
Y通过液相法合成，具体为：H
‑
Asp
‑
OtBu与Boc
‑
Nle
‑
OSu反应得到Boc
‑
Nle
...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘自成，张利香，张建松，李新宇，
申请(专利权)人：深圳市健元医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：