一种纽莫康定B1及其异构体的制备方法技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体涉及一种纽莫康定B1及其异构体的制备方法，包括以下步骤：将含有纽莫康定杂质B1的粗品用醇溶剂溶解，制备柱上样，以水为流动相A、以乙腈

【技术实现步骤摘要】
一种纽莫康定B1及其异构体的制备方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种纽莫康定B1及其异构体的制备方法。

技术介绍

[0002]纽莫康定(pneumocandins)是由真菌Glarea lozoyensis产生的次级代谢产物，是合成抗真菌药物卡泊芬净(Caspofungin)的前体化合物，具有环状六肽母核和脂肪酸侧链结构。按照不同脯氨酸在母核上取代的位置差异可以分成三类分别是纽莫康定A0(32羟基42甲基脯氨酸)、B0(32羟基脯氨酸)、和C0(42羟基脯氨酸)。
[0003]专利CN201710575306.3公开了肺念菌素B0(即纽莫康定B0)及类似物的结构，纽莫康定各组分结构如下式I所示：
[0004][0005][0006]现有技术中多对纽莫康定B0进行提纯制备，同时对其他杂质进行控制；例如CN105820213A公开了一种高效分离纽莫康定A0、B0和C0的方法，包括如下步骤：a.溶解：将含有纽莫康定B0的纽莫康定粗品用乙醇充分溶解，溶解时固液比为1:12～14，g：mL，过滤后得粗品溶液；b.上柱：采用层析柱分离纯化，层析柱填料选用150
‑
400目硅胶，采用湿法装柱，用乙酸乙酯逐渐将柱子装实后加入粗品溶液；c.层析：采用上述硅胶柱层析，流速控制在0.5～2.5BV/h，洗脱剂采用低沸点中等极性溶剂、高沸点醇和水组成的三元溶剂体系，三者
体积比为(3～8)：(3～7)：(1～5)；d.浓缩及重结晶：将分段收集到的纽莫康定B0洗脱液减压浓缩，正丙醇中重结晶得到纯品。该方法是提纯纽莫康定B0，对于其他杂质组分进行了控制，并没有得到纽莫康定其他杂质单组分。
[0007]杨渊等公开了一种亲水作用色谱法测定纽莫康定B0及其杂质的研究(中国抗生素杂志2016年12月第41卷第12期)，采用Xlon色谱柱进行分离，以乙腈和水(87:13)为流动相，流速为2.0mL/min；检测波长210nm；柱温30℃；进样量10μL。可以实现纽莫康定A0、B0和C0的同时检测。但是，该研究并没有提供纽莫康定B1或同分异构体的检测方法。并且该检测方法为线性色谱，应用到以非线性色谱为原理的工业生产中时，不再适用分离A0、B0和C0。
[0008]专利CN201611236860.0采用表面修饰了极性基团的硅胶作为亲水分离填料，采用有机溶剂和水混合为洗脱剂。有机溶剂与水的体积比为5/95～95/5。但没有涉及纽莫康定B1或同分异构体的制备。且技术方案所用粗品没有提供制备方法，对高纯度纽莫康定B0或杂质的制备适用范围有一定的局限性。
[0009]专利CN202011333347.X亲水层析柱的填料为均粒HILIC。洗脱液中乙腈、甲醇和水的体积比为(68
‑
72):(19
‑
23):(5
‑
13)。均粒HILIC的微球型号为UniSil亲水硅胶，UniSil亲水硅胶的粒径为10μm，孔径为然而，该方案所用特定填料为均一球，粗品上样前需要用缓冲盐再生、流动相平衡，给连续进样操作造成了不便。且方法为等度洗脱，仅把纽莫康定B0与杂质进行了充分分离，不适合于高纯度纽莫康定杂质的制备。
[0010]现有技术主要采用树脂柱工艺来纯化纽莫康定，然而，作为杂质成分的纽莫康定B1不能在反相色谱中与纽莫康定B0进行有效分离，只有通过正相色谱分离。纽莫康定B1在纯化工艺中需要对其严格控制，否则会严重影响醋酸卡泊芬净的质量。
[0011]在药品检测领域，需要纽莫康定B1作为对照品。纽莫康定B1是制备纽莫康定B0的副产物，也会参与到卡泊芬净合成过程中生成新的杂质，现有的研究都集中在如何尽量降低该副产物的产量，并没有如何制备高纯度纽莫康定B1的报道，因此，需要开发出一种制备高纯度的纽莫康定B1及其异构体的方法，以满足市场上对纽莫康定B1及其异构体的需要。

技术实现思路

[0012]本专利技术的目的是提供一种高纯度高收率的纽莫康定B1及其异构体的制备方法，以解决现有技术中没能得到大量高纯度的纽莫康定B1及其异构体(B5、B6、E0)方法的问题。
[0013]本专利技术的技术方案如下：一种纽莫康定B1及其异构体的制备方法，包括以下步骤：将含有纽莫康定B1的粗品用醇溶剂溶解，制备柱上样，以水为流动相A、以乙腈
‑
甲醇体系为流动相B进行梯度洗脱，收集目标成分流出液，各收集液经减压浓缩、冻干得纽莫康定B1及其异构体，所述异构体为纽莫康定B5、B6、E0。
[0014]优选地，所述的醇溶剂选自甲醇或乙醇。
[0015]优选地，所述的含有纽莫康定B1的粗品与醇溶剂的质量体积比为1～2:5，其中质量以g计，体积以mL计，进一步优选为1.5:5。
[0016]优选地，所述的流动相B中乙腈与甲醇的体积为7～9.5:3～0.5；进一步优选为9:1。
[0017]优选地，所述的制备柱为装有亲水性填料的制备柱，所述亲水性填料选自Click Xion、Unisil HILIC
‑
2M、Unisil HILIC
‑
T、ARG Silica、COSMOSIL HILIC中的一种，进一步
优选为Click Xion。
[0018]优选地，所述的梯度洗脱的梯度条件为：
[0019]时间
‑
min流动相A％流动相B％06.0
‑
7.594.0
‑
92.5187.5
‑
8.092.5
‑
92.0238.5
‑
10.090.0
‑
91.58311.0
‑
13.089.0
‑
87.012011.0
‑
13.089.0
‑
87.0
[0020]其中，流动相A为纯化水、流动相B是体积比为7～9.5:3～0.5的乙腈
‑
甲醇溶液。
[0021]进一步优选地，所述的梯度洗脱的梯度条件为：
[0022]时间
‑
min流动相A％流动相B％07.093.0187.7592.25239.590.58312.088.012012.088.0
[0023]其中，流动相A为纯化水、流动相B是体积比为9:1的乙腈
‑
甲醇溶液。
[0024]优选地，所述梯度洗脱测定波长范围是270～280nm，进一步优选为278nm。
[0025]优选地，所述的减压浓缩条件为：水浴温度35～45℃、真空度
‑
0.090MPa～
‑
0.100MPa。
[0026]优选地，所述的冻干的冻干参数设置为：
[0027][0028]进一步优选地，所述冻干曲线参数为：
[0029][0030]本专利技术所述的纽莫康定B1的粗品溶液可采用如下的方法获得：
[0031]对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纽莫康定B1及其异构体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将含有纽莫康定B1的粗品用醇溶剂溶解，制备柱上样，以水为流动相A、以乙腈
‑
甲醇溶液为流动相B进行梯度洗脱，收集目标成分流出液，各收集液经减压浓缩、冻干得纽莫康定B1及其异构体，所述异构体为纽莫康定B5、B6、E0。2.如权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述的醇溶剂选自甲醇或乙醇。3.如权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述的含有纽莫康定B1的粗品与醇溶剂的质量体积比为1～2:5，其中质量以g计，体积以mL计。4.如权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述的流动相B中乙腈与甲醇的体积为7～9.5:3～0.5。5.如权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述的制备柱为装有亲水性填料的制备柱，所述亲水性填料选自Click Xion、Unisil HILIC
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2M、Unisil HILIC
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T、ARG Silica、COSMOSIL HILIC中的一种，优选为Click Xion。6.如权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述的梯度洗脱的梯度条件为：时间
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min流动相A％...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾凡洲，朱兵峰，李会会，刘忠，
申请(专利权)人：山东新时代药业有限公司，
类型：发明
国别省市：