一种定量检测葡萄糖系列酸及内酯的方法技术

本发明专利技术公开了一种定量检测葡萄糖系列酸及内酯的方法，属于分离检测技术领域。本发明专利技术主要利用SB-Aq色谱柱与氨基色谱柱联合，对混合样品中葡萄糖系列酸及内酯(葡萄糖一酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖二酸与葡萄糖二酸1,4-内酯)进行定性、定量检测。本发明专利技术首先采用SB-Aq色谱柱对样品中的葡萄糖二酸-1,4-内酯直接定量分析，然后通过氨基色谱柱对样品中的葡萄糖醛酸和葡萄糖二酸直接定量分析，再通过计算得到样品中葡萄糖一酸的含量。本发明专利技术前处理简便、灵敏度高、测定组分多，对于提高检测工作效率、控制红茶菌生产质量和提高功能因子产量，具有重要的意义。

Method for quantitatively detecting glucose series acid and lactone

The invention discloses a method for quantitatively detecting glucose series acid and lactone, belonging to the technical field of separation and detection. The invention mainly uses SB-Aq chromatographic column and amino column combination, mixed samples of glucose (glucose and a series of acid lactone acid, glucuronic acid, glucose and glucose acid 1,4- acid lactone) qualitative and quantitative measurement. The invention firstly analyzed by SB-Aq column of glucarate -1,4- lactone directly and quantitatively in the sample, and then through the analysis of the column of glucuronic acid and amino acid glucose directly and quantitatively in the sample, and then through the content of glucose in samples obtained acid. The present invention pretreatment is simple, high sensitivity, multiple components, to improve the detection efficiency, control production quality and improve the function of Kombucha yield factor, has important significance.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种定量检测葡萄糖系列酸及内酯的方法，具体涉及高效液相色谱对红茶菌发酵产生的葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖二酸与葡萄糖二酸-1,4-内酯(DSL)的分离检测，属于分离检测

技术介绍
红茶菌在发酵过程中，红茶培养液中的葡萄糖被醋酸菌氧化为葡萄糖酸类及乙酸等代谢产物，其中葡萄糖酸类包括葡萄糖一酸，逐步转化为葡萄糖醛酸、葡萄糖二酸、葡萄糖二酸-1,4-内酯。葡萄糖醛酸是人体肝脏中最主要的解毒物质之一，可与外源的毒素或人体代谢产生的内源有毒物质相结合，变成水溶性的葡萄糖苷酸，并一起排出体外，从而使可能引起身体各种病变的或已经发生病变的毒素被及时清除，起到防病和治病的良好效果；葡萄糖二酸及其衍生物葡萄糖二酸-1,4-内酯能够有效抑制β-葡萄糖醛酸酶的活性，通过参与人体代谢活动调节体内激素环境发挥化学防癌作用，预防和有效抑制如食道癌、结肠癌、激素依赖性癌症乳腺癌、肝癌、皮肤癌和膀胱癌等病症；葡萄糖二酸-1,4-内酯还具有很强的解毒和抗氧化性能，它可以抑制胰岛β细胞凋亡减轻四氧嘧啶(ALX)诱导的糖尿病，缓解盐酸伊立替康(CPT-11)引起的肠道黏膜损伤。国内外学者对葡萄糖系列酸及内酯的分离检测也有不少研究，主要集中在葡萄糖二酸、葡萄糖二酸-1,4-内酯、葡萄糖醛酸中其中一种或两种的检测分离。检测方法主要有高效液相色谱法和气相色谱法，其中气相色谱法对于样品前期处理过程相对繁杂，检测效率较低；高效液相色谱法主要采用C18柱和SB-Aq色谱柱，该方法前处理简便、灵敏度高、检测效果较好。但同时检测分离葡萄糖一酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖二酸与葡萄糖二酸-1,4-内酯的方法国内外未见报道，因此，目前需要探索一种新型、简便、高效的分离方法把这四种葡萄糖系列酸及内酯进行有效的分离测定，切实解决目前存在的葡萄糖酸分离不开、检测不出、方法繁杂、无法定量等问题，推动红茶菌发酵饮料产业的发展。
技术实现思路
为了克服上述问题，本专利技术针对目前由葡萄糖衍生而成的葡萄糖系列酸及其内酯在分离过程中存在的缺陷和局限性，提供了一种能够定性、定量检测葡萄糖一酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖二酸与葡萄糖二酸1,4-内酯的方法。本专利技术前处理简便、灵敏度高、测定组分多，不仅能有效的分离检测这四种葡萄糖酸及内酯，还能对其进行定量分析，对于提高检测工作效率、控制红茶菌生产质量和提高功能因子产量，具有重要的意义。本专利技术提供的一种定性或定量检测葡萄糖一酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖二酸与葡萄糖二酸1,4-内酯的方法，是先通过SB-Aq色谱柱对样品中的葡萄糖二酸-1,4-内酯直接进行定性或定量分析，若检测结果显示样品中不含葡萄糖二酸-1,4-内酯，则通过氨基色谱柱对样品中的葡萄糖一酸、葡萄糖醛酸和葡萄糖二酸直接进行定性或定量分析；若SB-Aq色谱柱检测结果显示含有葡萄糖二酸-1,4-内酯，则通过氨基色谱柱对样品中的葡萄糖醛酸和葡萄糖二酸直接进行定性或定量分析，再通过这4种化合物的总量计算分析得到样品中葡萄糖一酸的含量。在本专利技术的一种实施方式中，所述方法中利用SB-Aq色谱柱进行检测的色谱条件是：AgilentSB-Aq色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为pH2.5的0.025mol/LKH2PO4，流速0.3-0.7mL/min(最佳为0.5mL/min)，柱温25～30℃(最佳为30℃)，进样量10μL，紫外检测波长为210nm。在本专利技术的一种实施方式中，所述SB-Aq色谱条件条件下，葡萄糖一酸、葡萄糖二酸、葡萄糖醛酸的保留时间接近，但三者均与葡萄糖二酸-1,4-内酯得到较好的分离。在本专利技术的一种实施方式中，所述SB-Aq色谱条件条件下，葡萄糖一酸、葡萄糖二酸、葡萄糖醛酸的保留时间均在5.20-6.0min，而葡萄糖二酸-1,4-内酯保留时间为6.7-7.1min；葡萄糖二酸-1,4-内酯的回归方程y＝1.0×106x-81382，相关系数R为0.9998。在本专利技术的一种实施方式中，所述方法利用氨基色谱柱进行检测的色谱条件是：YMC-PackPolyamineⅡ氨基色谱柱，流动相为含有乙腈10％的80～120mM/L磷酸二氢铵溶液(最佳为100mM/L)，流速为0.4～1.0mL/min(最佳0.5mL/min)，柱温25～30℃(最佳为30℃)，进样量25μL，紫外检测波长210nm。在本专利技术的一种实施方式中，所述氨基色谱柱色谱条件下，葡萄糖一酸和葡萄糖二酸-1,4-内酯的保留时间接近，而葡萄糖二酸和葡萄糖醛酸均能够与葡萄糖一酸和/或葡萄糖二酸-1,4-内酯分离。在本专利技术的一种实施方式中，所述氨基色谱柱色谱条件下，葡萄糖醛酸的回归方程y＝1.3×106x+19744，相关系数R为0.9997；葡萄糖二酸的回归方程y＝4.3×105x+11113，相关系数R为0.9995；葡萄糖二酸-1,4-内酯的回归方程y＝1.6×106x-4.4×105，相关系数R为0.9998；葡萄糖一酸的回归方程y＝1.4×106x-2.7×105，相关系数R为0.9998。在本专利技术的一种实施方式中，所述样品是红茶菌的发酵液。在本专利技术的一种实施方式中，所述样品是将红茶菌的发酵菌液去除菌体、蛋白类大分子物质后收集得到的滤液。本专利技术的有益效果：本专利技术的方法通过利用SB-Aq色谱柱与氨基色谱柱联合检测，对混合样品中葡萄糖系列酸及内酯(葡萄糖一酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖二酸与葡萄糖二酸1,4-内酯)进行定性、定量检测，克服了目前存在的葡萄糖酸分离不开、检测不出、方法繁杂、无法定量等问题，推动红茶菌发酵饮料产业的发展。本专利技术的方法简便、高效、灵敏准确、精密度、稳定性好。附图说明图1是葡萄糖一酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖二酸、葡萄糖二酸-1,4-内酯混合标准品的氨基柱色谱图；1是葡萄糖二酸，2是葡萄糖一酸和葡萄糖二酸-1,4-内酯的混合，3是葡萄糖醛酸。图2是葡萄糖一酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖二酸、葡萄糖二酸-1,4-内酯混合标准品的的SB-Aq色谱图；1是葡萄糖一酸、二酸、醛酸的混合，2是葡萄糖二酸-1,4-内酯。图3是红茶发酵液的SB-Aq色谱图；1是葡萄糖一酸、二酸、醛酸混合，2是葡萄糖二酸-1,4-内酯。图4是红薯发酵液的SB-Aq色谱图；1是葡萄糖一酸、二酸、醛酸混合，2是葡萄糖二酸-1,4-内酯。图5是红薯发酵液的氨基柱色谱图；1是葡萄糖二酸，2是葡萄糖一酸、葡萄糖二酸-1,4-内酯混合，3是葡萄糖醛酸。具体实施方式实施例1：SB-Aq色谱柱和氨基色谱柱联合检本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种定性或定量检测葡萄糖一酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖二酸与葡萄糖二酸1,4‑内酯的方法，其特征在于，所述方法是先通过SB‑Aq色谱柱对样品中的葡萄糖二酸‑1,4‑内酯直接进行定性或定量分析，若检测结果显示样品中不含葡萄糖二酸‑1,4‑内酯，则通过氨基色谱柱对样品中的葡萄糖一酸、葡萄糖醛酸和葡萄糖二酸直接进行定性或定量分析；若SB‑Aq色谱柱检测结果显示含有葡萄糖二酸‑1,4‑内酯，则通过氨基色谱柱对样品中的葡萄糖醛酸和葡萄糖二酸直接进行定性或定量分析，再通过这4种化合物的总量计算分析得到样品中葡萄糖一酸的含量。

【技术特征摘要】
1.一种定性或定量检测葡萄糖一酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖二酸与葡萄糖二酸1,4-内酯的方法，
其特征在于，所述方法是先通过SB-Aq色谱柱对样品中的葡萄糖二酸-1,4-内酯直接进行定性
或定量分析，若检测结果显示样品中不含葡萄糖二酸-1,4-内酯，则通过氨基色谱柱对样品中
的葡萄糖一酸、葡萄糖醛酸和葡萄糖二酸直接进行定性或定量分析；若SB-Aq色谱柱检测结
果显示含有葡萄糖二酸-1,4-内酯，则通过氨基色谱柱对样品中的葡萄糖醛酸和葡萄糖二酸直
接进行定性或定量分析，再通过这4种化合物的总量计算分析得到样品中葡萄糖一酸的含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中利用SB-Aq色谱柱进行检测的色
谱条件是：AgilentSB-Aq色谱柱，流动相为pH2.5的0.025mol/LKH2PO4，流速为
0.3-0.7mL/min，柱温25～30℃，紫外检测波长为210nm。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述流速为0.5mL/min，柱温30℃。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法利用氨基色谱柱进行检测的色谱条件
是：YMC-PackPolyamineⅡ氨基色...

【专利技术属性】
技术研发人员：王淼，邓莉川，吕梦娴，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32