一种泰拉霉素有关物质、富集制备方法、分离方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种泰拉霉素有关物质、富集制备方法、分离方法及应用。本发明专利技术提供了一种泰拉霉素有关物质的分离方法，其包括下述步骤：采用高效液相色谱法，将待测物在色谱柱中进行洗脱，即可。本发明专利技术还提供了一种泰拉霉素有关物质1或其盐。本发明专利技术的分离方法能够有效分离泰拉霉素在合成及降解过程中产生的杂质，并可进一步通过质谱检测，高灵敏度地检出微量杂质，鉴定、确证其结构，从而控制泰拉霉素的药品质量，为泰拉霉素未知杂质的研究奠定了良好的基础；本发明专利技术的泰拉霉素有关物质是对泰拉霉素进行质量控制的必需品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种泰拉霉素有关物质、富集制备方法、分离方法及应用。
技术介绍
泰拉霉素(Tulathromycin)是半合成大环内酯类抗生素，于2004年在美国和欧盟上市。该药主要用于牛和猪由敏感菌引起的呼吸系统感染性疾病及由牛莫拉氏菌引起牛传染性角膜结膜炎的防治，药效强于市场上广泛使用的大环内酯类抗生素泰乐菌素和替米考星，在畜禽生产中的使用前景广阔。泰拉霉素是由异构体A、B(分子式C41H79N3O12，分子量806.09)按9:1组成的十五元环大环内酯类抗生素，两种异构体可通过C11和C13之间内酯键的形成和断裂进行转换。泰拉霉素结构中含有三个极性氨基基团，PKa值在8.6～9.6之间，属于三胺类大环内酯抗生素，不同于氮杂环内酯和酮内酯类抗生素。为了确保动物源性食品的安全，须对动物专用药物质量进行严格控制，药物含量测定、未知杂质的结构鉴定和杂质限量是药物质量控制的有效方法，杂质分析是药物质量标准的重要内容。泰拉霉素由半合成过程生产，与合成药物相比可控性更低，因此杂质谱更为复杂且难以预测。现行欧洲药典(EP)和美国药典(USP)均将兽药收录其中，并对有关物质限量提出要求，欧洲药典还要求对特定杂质进行控制(英国药典按惯例收录了欧洲药典的全部专论，内容一般不作修改)。VICH(兽用药物注册技术要求国际协调会)指导原则要求兽医专用原料药的杂质报告限度为0.10％，鉴定限度为0.20％，控制限度为0.50％(该指导不包括半合成抗生素)；EMA(欧洲药品管理局)要求半合成兽用药物的杂质限度应符合VICH指导原则的要求。目前，国内外尚未见采用LC-MS法分离检测泰拉霉素有关物质的报道。因此，亟需降解泰拉霉素以制备降解的有关物质，建立泰拉霉素有关物质的
LC-MS分离、检测方法，并对泰拉霉素有关物质进行鉴定。
技术实现思路
本专利技术所要解决的问题是为了克服现有技术中缺乏泰拉霉素在合成及降解过程中产生的有关物质的分离、检测方法，且不能对之进行鉴定、确证结构等缺陷，而提供了一种泰拉霉素有关物质、富集制备方法、分离方法及应用。本专利技术的分离方法能够有效分离泰拉霉素在合成及降解过程中产生的杂质，并可进一步通过质谱检测，高灵敏度地检出微量杂质，鉴定、确证其结构，从而控制泰拉霉素的药品质量，为泰拉霉素未知杂质的研究奠定了良好的基础；本专利技术的泰拉霉素有关物质是对泰拉霉素进行质量控制的必需品。本专利技术提供了一种泰拉霉素有关物质的分离方法，其包括下述步骤：采用高效液相色谱法，将待测物在色谱柱中进行洗脱，即可；所述的待测物为泰拉霉素原料药或泰拉霉素降解物；所述的色谱柱为C18分析柱或C18制备柱；所述的洗脱的流动相A为用氨水调节pH值为7～8的、体积分数为0.1％～0.4％的甲酸水溶液，所述的洗脱的流动相B为甲醇与乙腈的体积比为(1.5～2.0):1的混合溶剂；当所述的色谱柱为C18分析柱时，所述的洗脱的参数如下：0min→15min，A:B＝(60～70):(40～30)，15min→40min，A:B＝(60～70):(40～30)→(25～35):(75～65)，40→55min，A:B＝(25～35):(75～65)；所述的A:B指所述的流动相A与所述的流动相B的体积比；当所述的色谱柱为C18制备柱时，所述的洗脱的参数如下：所述的流动相A与所述的流动相B的体积比为(75～85):(25～15)。在所述的分离方法中，所述的泰拉霉素原料药可为本领域常规的泰拉霉素原料药，较佳地为江苏凌云药业有限公司生产的泰拉霉素原料药。在所述的分离方法中，所述的泰拉霉素降解物为泰拉霉素经降解反应得到的物质；所述的降解反应可为本领域常规的降解反应，较佳地为酸降解反
应、碱降解反应、高温降解反应、高湿降解反应、氧化降解反应或光照降解反应；所述的氧化降解反应可包括下述步骤：在乙腈中，将泰拉霉素与双氧水水溶液进行氧化降解反应，得到即可；所述的碱降解反应可包括下述步骤：在乙腈中，将泰拉霉素与氢氧化钠水溶液进行碱降解反应，得到即可。在所述的分离方法中，所述的待测物可采用本领域常规的方法进样，较佳地以待测物的乙腈溶液的形式进样；当所述的待测物为泰拉霉素经氧化降解反应得到的物质时，较佳地，所述的氧化降解反应的反应液经乙腈稀释后形成所述的待测物的乙腈溶液；当所述的待测物为泰拉霉素经碱降解反应得到的物质时，较佳地，所述的碱降解反应的反应液经酸中和、并用乙腈稀释后形成所述的待测物的乙腈溶液；当所述的待测物为泰拉霉素经酸降解反应得到的物质时，较佳地，所述的酸降解反应的反应液经碱中和、并用乙腈稀释后形成所述的待测物的乙腈溶液；所述的酸中和的酸可为本领域常规的酸，较佳地为盐酸水溶液，更佳地为0.1mol/L的盐酸水溶液；所述的碱中和的碱可为本领域常规的碱，较佳地为NaOH水溶液，更佳地为0.1mol/L的NaOH水溶液；所述的待测物的乙腈溶液的浓度可为本领域常规的浓度，较佳地为
3g/L～50g/L，更佳地为5g/L～20g/L；所述的待测物的乙腈溶液的进样量可为本领域常规的进样量，当所述的色谱柱为C18分析柱时，所述的进样量较佳地为5μL～100μL，更佳地为20μL～50μL；当所述的色谱柱为C18制备柱时，所述的进样量较佳地为50μL～500μL，更佳地为50μL～300μL。在所述的分离方法中，所述的C18分析柱可为本领域常规的C18分析柱，较佳地为XbridgeTM C18(250×4.6mm，5μm)分析柱；所述的C18制备柱可为本领域常规的C18制备柱，较佳地为XbridgeTM C18(19*50mm，5μm)制备柱。在所述的分离方法中，所述的流动相B中甲醇与乙腈的体积比较佳地为45:25；当所述的色谱柱为C18分析柱时，所述的流动相A的pH值较佳地为7.6～7.99(例如7.66)，所述的流动相A的甲酸水溶液的体积分数较佳地为0.3％～0.35％，更佳地，为用氨水调节pH值为7.6的、体积分数为0.35％的甲酸水溶液；当所述的色谱柱为C18制备柱时，所述的流动相A的pH值较佳地为7.6～7.8，所述的流动相A的甲酸水溶液的体积分数较佳地为0.3％～0.35％。在所述的分离方法中，当所述的色谱柱为C18分析柱时，所述的洗脱的参数较佳地如下：0min→15min，A:B＝65:35，15min→40min，A:B＝65:35→30:70，40→55min，A:B＝30:70；当所述的色谱柱为C18制备柱时，所述的洗脱的参数较佳地如下：所述的流动相A与所述的流动相B的体积比为80:20。在所述的分离方法中，所述的氨水为本领域常规的氨水，较佳地为质量分数为25％～28％的氨水。在所述的分离方法中，可采用本领域常规的高效液相色谱，当所述的色谱柱为C18分析柱时，较佳地采用Waters公司的Alliance 2695/ZQ液相色谱-质谱联用仪；当所述的色谱柱为C18制备柱时，较佳地采用Waters公司的2767型自动纯化仪。在所述的分离方法中，所述的分离方法的流速可为本领域常规的流速；当所述的色谱柱为C18分析柱时，所述的流速较佳地为0.7ml/min～1.3ml/min，0.8ml/min～1.2ml/min，例本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种泰拉霉素有关物质的分离方法，其特征在于，包括下述步骤：采用高效液相色谱法，将待测物在色谱柱中进行洗脱，即可；所述的待测物为泰拉霉素原料药或泰拉霉素降解物；所述的色谱柱为C18分析柱或C18制备柱；所述的洗脱的流动相A为用氨水调节pH值为7～8的、体积分数为0.1％～0.4％的甲酸水溶液，所述的洗脱的流动相B为甲醇与乙腈的体积比为(1.5～2.0):1的混合溶剂；当所述的色谱柱为C18分析柱时，所述的洗脱的参数如下：0min→15min，A:B＝(60～70):(40～30)，15min→40min，A:B＝(60～70):(40～30)→(25～35):(75～65)，40→55min，A:B＝(25～35):(75～65)；所述的A:B指所述的流动相A与所述的流动相B的体积比；当所述的色谱柱为C18制备柱时，所述的洗脱的参数如下：所述的流动相A与所述的流动相B的体积比为(75～85):(25～15)。

【技术特征摘要】
1.一种泰拉霉素有关物质的分离方法，其特征在于，包括下述步骤：采用高效液相色谱法，将待测物在色谱柱中进行洗脱，即可；所述的待测物为泰拉霉素原料药或泰拉霉素降解物；所述的色谱柱为C18分析柱或C18制备柱；所述的洗脱的流动相A为用氨水调节pH值为7～8的、体积分数为0.1％～0.4％的甲酸水溶液，所述的洗脱的流动相B为甲醇与乙腈的体积比为(1.5～2.0):1的混合溶剂；当所述的色谱柱为C18分析柱时，所述的洗脱的参数如下：0min→15min，A:B＝(60～70):(40～30)，15min→40min，A:B＝(60～70):(40～30)→(25～35):(75～65)，40→55min，A:B＝(25～35):(75～65)；所述的A:B指所述的流动相A与所述的流动相B的体积比；当所述的色谱柱为C18制备柱时，所述的洗脱的参数如下：所述的流动相A与所述的流动相B的体积比为(75～85):(25～15)。2.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述的泰拉霉素降解物为泰拉霉素经降解反应得到的物质；所述的降解反应为酸降解反应、碱降解反应、高温降解反应、高湿降解反应、氧化降解反应或光照降解反应；和/或，所述的待测物以待测物的乙腈溶液的形式进样。3.如权利要求2所述的分离方法，其特征在于，当所述的待测物为泰拉霉素经氧化降解反应得到的物质时，所述的氧化降解反应的反应液经乙腈稀释后形成所述的待测物的乙腈溶液；和/或，当所述的待测物为泰拉霉素经碱降解反应得到的物质时，所述的碱降解反应的反应液经酸中和、并用乙腈稀释后形成所述的待测物的乙腈溶液；和/或，当所述的待测物为泰拉霉素经酸降解反应得到的物质时，所述的酸降解反应的反应液经碱中和、并用乙腈稀释后形成所述的待测物的乙腈溶液；和/或，所述的待测物的乙腈溶液的浓度为3g/L～50g/L；和/或，当所述的色谱柱为C18分析柱时，所述的待测物的乙腈溶液的
\t进样量为5μL～100μL；和/或，当所述的色谱柱为C18制备柱时，所述的待测物...

【专利技术属性】
技术研发人员：李悦，黄珊，
申请(专利权)人：上海医药工业研究院，中国医药工业研究总院，
类型：发明
国别省市：上海;31