一种卷曲霉素的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种卷曲霉素的制备方法，该方法包括以下步骤：将超顺磁性微球加入卷曲霉素发酵液进行吸附、洗脱、脱色、喷雾干燥等，得到卷曲霉素产品。本发明专利技术在提取过程中无需对发酵液进行预处理及预热，无需昂贵的提取分离设备，生产周期缩短2/3，污染减少1/2，收率提高10%，为工业化生产提供技术支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于工业微生物
，具体涉及一种卷曲霉素的制备方法。
技术介绍
结核病死灰复燃，正严重威胁人类健康。近年来，耐多药结核（MDR-TB）的出现，以及结核分枝杆菌与人类免疫缺陷病毒的联合感染导致结核病再度在全球成流行趋势。卷曲霉素是治疗耐多药结核分枝杆菌和持留菌感染的一类重要药物。该药对耐药型结核杆菌感染引起的肺结核疗效显著，毒副作用较其他二线药物小，是目前较理想的抗结核菌药物。卷曲霉素，是由卷曲链霉菌发酵产生的环状多肽类抗生素，由四个结构相似的活性化合物IA、IB、IIA、IIB组成，其中IA和IB的含量占90%以上，是发挥疗效的主要成分。目前，国内生产硫酸卷曲霉素的主要技术手段如专利CN100471867C，利用离子交换树脂进行吸附、脱盐、脱色、反复中和，再经浓缩、喷雾干燥而成，过程复杂，不利于环保，影响收率及产品质量。如何能够提高卷曲霉素产率及质量，专利技术人做了大量实验研究。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种工艺流程短、易操作、产品纯度高、有利环保的卷曲霉素的制备方法。本专利技术提供的一种卷曲霉素的制备方法，包括以下步骤：a、将超顺磁性微球加入卷曲霉素发酵液中，搅拌使之吸附完全，然后分离出超顺磁性微球。b、将分离出的超顺磁性微球先用水净化，再用酸性水溶液洗脱，得到卷曲霉素洗脱液。c、将卷曲霉素洗脱液中加入活性炭脱色，过滤，得到卷曲霉素脱色液。d、卷曲霉素脱色液经纳滤、喷雾干燥，得到卷曲霉素产品。其中步骤（a）所述超顺磁性微球的粒径为10-30μm，表面的功能基团为经氢氧化钠溶液处理后的钠型结构。所述超顺磁性微球的加入量为每升发酵液加入30-60克。其中步骤（b）所述酸水0.2-0.5mol/L的硫酸水溶液。用量为每克超顺磁性微球加入4-6毫升。其中步骤（c）所述活性炭用量为每升洗脱液加入0.5-1.0克，脱色时间30-40min。步骤（d）所述纳滤所用的过滤膜为截留分子量100-300Da的卷式膜。步骤（d）所述喷雾干燥的料液浓度为25-30万μg/mL。超顺磁性微球的预处理及再生，在使用前用2-5倍（v/w）的2moL/L的NaOH水溶液，静态浸泡2-4小时后过滤，然后用去离子水洗涤至pH值至为7-8，备用。本专利技术具有如下优点：1、采用超顺磁性微球，在提取过程中无需对发酵液进行预处理及预热，既能够实现目标物的简便分离，生产周期为由56h缩减为18h，效率提高2/3，废液排放减少1/2；2、超顺磁性微球选择性高，无需昂贵的提取分离设备即可得到高纯度的卷曲霉素产品，产品质量优于药典标准，收率大于85%，收率较原工艺提高10%；3、整个提取过程未使用有机溶剂，节能环保；4、超顺磁性微球具有可回收、反复利用、再生简便等优点；5、本专利技术所述方法工艺流程短，克服了卷曲霉素难于纯化的缺点，且具有易操作、可控性强的优点，为工业化生产提供有力的技术支撑。附图说明图1卷曲霉素产品高效液相色谱图。具体实施方式下面用具体实施例来进一步说明本专利技术的内容，但并不以任何方式意味着对本发明进行限制。下列实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。本专利技术所使用的卷曲霉素发酵液，为华北制药集团新药研究开发有限责任公司生产。超顺磁性微球，苏州纳微生物科技有限公司；喷雾干燥机(SP-1500)，上海顺仪实验设备有限公司；高效液相色谱仪（SPD-M20A型紫外检测器，LC-20AT泵，SIL-20A自动进样器，CTO-10AS柱温箱，岛津公司）；蒸馏水，为本实验室自制；其他试剂为分析纯。卷曲霉素发酵液的制备将卷曲链霉菌菌株（编号NRRL2773）的斜面培养物或孢子液接种于种子培养基，28℃、220rpm、培养60h获得种子液；将种子液接种到发酵罐进行发酵培养，接种量为10%，培养温度29℃、罐压0.05±0.01Mpa、通气比为1:0.8vvm，400rpm搅拌，在发酵培养开始40小时后每升发酵液加入1.5g赖氨酸，总发酵144h。其中所述的种子培养基按以下方法制得：蔗糖30.0克、酵母粉8.0克、硫酸铵2.0克、玉米浆5.0克、氯化钠1.0克、碳酸钙5.0克，加自来水定容至1000mL，pH7.0，121℃灭菌30min。其中所述的发酵培养基按以下方法制得：玉米淀粉30.0克、棉籽蛋白粉20.0克、酵母粉5.0克、硫酸铵2.0克、玉米浆6.0克、磷酸二氢钾2.0克、氯化钠2.0克、碳酸钙5.0克，加自来水定容至1000mL，pH7.0，121℃灭菌30min。超顺磁性微球的预处理及再生超顺磁性微球的预处理及再生，在使用前用2-5倍（v/w）的2moL/L的NaOH水溶液，静态浸泡2-4小时后过滤，然后用去离子水洗涤至pH值至为7-8，备用。实施例1300mL发酵液，发酵单位11530μg/mL，加入粒径为10μm的超顺磁性微球18g，搅拌吸附1h后，分离超顺磁性微球，用36mL水洗涤分离出的超顺磁性微球，然后用108mL0.2mol/L的硫酸水溶液洗脱超顺磁性微球，收集卷曲霉素洗脱液，洗脱液加入0.054克的活性炭脱色，室温搅拌30min后过滤，滤液再经100Da卷式膜纳滤至溶液浓度25万μg/mL，进行喷雾干燥，得到卷曲霉素产品（高效液相色谱图见图1）3.0g，含量98.6%，收率85.5%。实施例21L发酵液，发酵单位11583μg/mL，加入粒径为20μm的超顺磁性微球50g，搅拌吸附1.5h后，分离超顺磁性微球，用100mL水洗涤分离出的超顺磁性微球，然后用200mL0.3mol/L的硫酸水溶液洗脱超顺磁性微球，收集卷曲霉素洗脱液，洗脱液加入0.16克的活性炭，室温搅拌40min后过滤，滤液再经200Da卷式膜纳滤至溶液浓度28万μg/mL，进行喷雾干燥，得到卷曲霉素产品10.1g，含量98.9%，收率86.2%。实施例33L发酵液，发酵单位11516μg/mL，加入粒径30μm的超顺磁性微球90g，搅拌吸附2h后，分离超顺磁性微球，用180mL水洗涤分离出的超顺磁性微球，然后用450mL0.5mol/L的硫酸水溶液洗脱超顺磁性微球，收集卷曲霉素洗脱液，洗脱液加入0.45克的活性炭，搅拌35min后过滤，滤液再经300Da卷式膜纳滤至溶液浓度30万μg/mL，进行喷雾干燥，得到卷曲霉素产品30.3g，含量98.7%，收率86.6%。对比例1300mL发酵液，发酵单位11530μg/mL，加入300mL水稀释后，用草酸调PH=3.0，然后加入本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种卷曲霉素的制备方法，包括下述步骤：a、将超顺磁性微球加入卷曲霉素发酵液中，搅拌使之吸附完全，然后分离出超顺磁性微球；b、将分离出的超顺磁性微球先用水净化，再用酸性水溶液洗脱，得到卷曲霉素洗脱液；c、将卷曲霉素洗脱液中加入活性炭脱色，过滤，得到卷曲霉素脱色液；d、卷曲霉素脱色液经纳滤、喷雾干燥，得到卷曲霉素产品。

【技术特征摘要】
1.一种卷曲霉素的制备方法，包括下述步骤：
a、将超顺磁性微球加入卷曲霉素发酵液中，搅拌使之吸附完全，然后分离出超顺磁性
微球；
b、将分离出的超顺磁性微球先用水净化，再用酸性水溶液洗脱，得到卷曲霉素洗脱液；
c、将卷曲霉素洗脱液中加入活性炭脱色，过滤，得到卷曲霉素脱色液；
d、卷曲霉素脱色液经纳滤、喷雾干燥，得到卷曲霉素产品。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其中步骤（a）所述超顺磁性微球的粒径为10-30μm，
表面的功能基团为经氢氧化钠溶液处理后的钠型结构。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其中步骤（a）所述超顺磁性微球的加入量为每升发

【专利技术属性】
技术研发人员：高任龙，王海燕，张雪霞，任风芝，耿文飞，段宝玲，
申请(专利权)人：华北制药集团新药研究开发有限责任公司，
类型：发明
国别省市：河北;13